刘晓
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：内蒙古农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- CRISPR-Cas9介导的蒙古牛MSTN基因敲除细胞系的建立被引量：3
- 2018年
- 试验旨在利用CRISPR-Cas9技术对蒙古牛胎儿成纤维细胞肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行编辑,构建无标记的MSTN基因敲除的蒙古牛细胞系,为培育肌肉发达的蒙古牛提供试验材料。通过组织块贴壁法对妊娠45d的蒙古牛胎儿建立皮肤成纤维细胞系,同时在第2外显子区域选定1个gRNA靶位点,使用在线软件设计sgRNA序列,并选取评分较高的3个sgRNA,采用试剂盒法构建无标记的Cas9/gRNA载体,随后用T7E1酶酶切法对其进行活性验证,将有活性的载体用电转法转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,通过无限稀释法和口吸管法将转染后的单细胞接种于96孔板扩繁后提取DNA,对其进行PCR扩增及测序验证来获取阳性细胞。本试验构建了3个无标记的CRISPR-Cas9载体,经验证1个有活性,对电转染后的单细胞进行筛选共获得96个单细胞株,测序分析后有1个单细胞株发生单碱基突变,使得MSTN基因不能编码正常的蛋白。试验成功建立了1个MSTN基因失活的细胞株,可作为后续体细胞核移植的供体细胞,用于生产无标记的敲除MSTN基因的蒙古牛,对培养产肉率高并具有生物安全性的蒙古牛具有重要的意义。
- 郭梓茹张立马云龙苏小虎周欢敏张焱如刘晓
- 关键词：MSTN基因蒙古牛
- 基于Cas9技术的无标记定点整合LacS基因的载体系统构建
- 2018年
- 为了获得奶牛Cas9特异识别位点载体,同时构建无标记Lac S基因载体,并对Cas9载体进行活性验证,以达到建立Lac S基因阳性细胞系的目的,试验基于奶牛β-casein第2内含子区域序列设计Cas9靶位点作为潜在Lac S基因插入位点、构建Cas9/gRNA载体,利用T7E1酶进行活性验证,构建包含针对靶位点微同源序列的Lac S基因载体。结果表明：经过PCR和测序比对,发现构建的Cas9/gRNA载体具有活性,而且Lac S基因载体可用于整合。同时构建的包含有微同源序列和Cas9靶位点的Lac S基因克隆载体,可用于后续研究。
- 刘晓苏小虎马云龙郭梓茹张焱茹周欢敏张立
- 关键词：无标记奶牛
- 不同培养条件对牛输卵管上皮细胞的影响被引量：1
- 2016年
- 自从1890年首次报道家兔胚胎移植获得成功以来，胚胎移植技术已有一百多年的研究历史，如今很多国家已经进入商业化应用阶段。在商业化应用上，牛的胚胎移植技术最成熟，占的比例最大。然而胚胎体外发育仍然存在诸多问题，包括囊胚效率低、胚胎质量整体偏差、发育机理不够明确、体外难以完全模拟体内环境等。
- 张仙保郭梓茹刘晓苏小虎张立张嘉祺
- 关键词：输卵管上皮细胞胚胎移植技术体外发育胚胎质量
