蒋如璋 作品数:20 被引量:49 H指数:5 供职机构: 南开大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
BticryIVB基因的克隆及表达质粒的构建 被引量:4 2000年 采用 PCR方法 ,克隆得到 3 .5kb的开放阅读框架 ( ORF) ,其包括 Bti的杀虫蛋白基因 ,cry IVB结构基因和部分上游启动区 .将结构基因亚克隆到高表达载体 p QE52中 ,构建了高表达质粒 p QE52 B.在 E.coli SG1 3 0 0 9( p REP4 )中 ,1 3 0 k D的蛋白得到表达 ,其对韭菜迟眼蕈蚊 ( Bradysia odoriphaga)三龄幼虫具有较强的毒杀作用 . 刘国奇 蒋如璋 张自立关键词:BTI 基因表达 克隆 双翅目害虫 生物防治 短小芽孢杆菌缺陷噬菌体 被引量:1 1990年 经丝裂霉素C发和CsCl密度梯度离心,得到了短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)噬菌体PPO。该噬菌体具有典型的20面体的头部,长而可收缩尾鞘的尾,尾鞘的下端附有基板及尾丝。噬菌体 DNA 的限制核酸内切酶酶切电泳及其与宿主基因组 DNA 之间的分子杂交结果证明,噬菌体 PPO 颗粒内包裹的是寄主 DNA,因而它是一缺陷噬菌体。 蒋如璋 樊庭玉关键词:短小芽孢杆菌 苏云金杆菌以色列亚种cryIVB基因在E.coli中的高表达 被引量:5 1999年 韭菜迟眼蕈蚊(Bradysiaodoriphaga)幼虫以取食根部危害韭菜的生长.为了研究有效的生防制剂,采用DNA聚合酶链式反应方法,从苏云金杆菌以色列亚种(Bti)得到3.5kb的开放阅读框架(ORF),其包括Bti杀虫蛋白基因cryIVB的结构基因和部分上游启动区.将结构基因亚克隆到高表达载体pQE52中,构建了高表达质粒pQE52B.在E.coliSG13009(pREP4)中,经IPTG诱导,130kD的蛋白表达量约占细胞总蛋白的7.9%,其对韭菜迟眼蕈蚊三龄幼虫具有较强的毒杀作用.为进一步利用cryIVB基因。 刘国奇 蒋如璋 张自立关键词:基因表达 韭菜迟眼蕈蚊 苏云金杆菌 α-淀粉酶基因表达中启动子上游区EcoRI-BclI片段的生理功能 被引量:2 1994年 本文从pAmy41和pNL201出发,构建了一系列α-淀粉酶基因上游区EcoRI-BclI片段缺失或部分缺失的质粒,并构建了含有pAmy41系列单质粒pAmy41系列、pNL201系列双质粒工程菌。通过对这些工程菌α-淀粉酶基因表达水平的分析显示,B.Licheniformisα-淀粉酶基因上游区EcoRI-BclI片段在α-淀粉酶基因表达中行使负的调控功能。 杨洪江 杨丽珠 陈启民 蒋如璋关键词:Α-淀粉酶基因 基因表达 枯草杆菌信号肽酶Ⅰ的识别序列特异性和信号肽在蛋白质分泌中的作用 1990年 本文采用重组体DNA技术使质粒pUB110的β-蛋白质的N-末端编码区与B.licheniformis的α-淀粉酶结构基因融合并产生了信号肽酶Ⅰ识别切割区,从而构建了带有β-信号肽的β AMY基因。该基因借助β-蛋白的可译读码和β-信号肽表达并分泌到胞外,分泌效率约为野生型的10%,通过对不同pβAMY质粒分泌能力的比较、限制性内切酶切点分析和β-信号肽介导下的胞外α-淀粉酶分子量的比较,in vivo证明了B.subtilis信号肽酶Ⅰ的特异识别切割序列为Ala—Ala—Ala Ala,结果还表明B.licheniformis α-淀粉酶在B.subtilis中的分泌作用符合翻译后加工模式。 周毅 蒋如璋关键词:枯草杆菌 蛋白质分泌 转座子Tn917在短小芽孢杆菌中的转座作用 1992年 粪链球菌(Streptococcus faecalis)转座子 Tn917已成为枯草芽孢杆菌(B.subtilis)遗传操作中的一个很有用的工具。Tn917长度为5.4 kb,携带可诱导的红霉素抗性基因,并具有与革兰氏阴性细菌 Tn3族转座子类似的末端重复序列。质粒 pTV32是 pTV1的一个衍生质粒,它保留着质粒 pTV1的复制温度敏感特性,并可形成 lacZ 基因转座融合,因而可用来研究有关基因的表达调控机制。本文报道了载体质粒 pTV32在短小芽孢杆菌(B.pumilus)中的稳定性和 Tn917的转座及其插入诱变效应。 耿运琪 蒋如璋关键词:转座子 短小芽孢杆菌 外源质粒在枯草芽孢杆菌BF7658中的稳定性及其基因表达 被引量:3 1990年 通过B.subtilis噬菌体PBSI转导,已将携带热稳定α-淀粉酶基因的质粒pAmy411引进了B.subtilis BF7658.转导频率为10_(-9)转导子/PFU。尽管pAmy 411的诲贝数在B.subtilis BF7658中较在B.subtilis AS 1.1176中高1倍,但其传代稳定性却较后者低。质粒携带的热稳定α-淀粉酶基因的表达水平在B.subtilis BF 7658中较在B.subtilisAS1.1176中高6倍。 耿运琪 蒋如璋 李隽关键词:枯草芽孢杆菌 基因表达 以淀粉酶基因为筛选标记的E.coli克隆载体的构建 1998年 以E.coli质粒pJRD184为基础,将多酶切点引入地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)的a-淀粉酶基因信号肽编码区的PstI切点,构建了能表达并将a-淀粉酶(Amy)渗漏到胞外的E.coli克隆载体pLAM9712.该载体可根据在含有可溶性淀粉的LB平板上菌落周围有没有淀粉水解圈直接筛选重组子,从而避免了使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D一半乳糖苷(X-gal),代之以廉价的碘、淀粉.实验进一步验证了pLAM9712在基因克隆中的可行性及质粒本身的稳定性. 刘国奇 蒋如璋关键词:淀粉酶 信号肽 克隆载体 基因克隆 携有巨大芽孢杆菌淀粉酶基因的两种质粒在枯草杆菌中产酶性质的比较 被引量:2 1993年 携带巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium糖化型α淀粉酶基因的质粒pBX95和pBX96(pBX96在枯草杆菌中传代对自发缺失0.65kb片段的衍生质粒)在枯草杆菌Bacillus subtilis中表达的α淀粉酶分子量分别为64 kD和58kD。它们的比活力相差两倍。并且在等电点、米氏常数、最适温度、最适pH、热稳定性方面均有差别。但二者的淀粉水解产物的层析谱带相同。 杨丽珠 马明 王诚一 纪永刚 陈启民 蒋如璋关键词:巨大芽孢杆菌 枯草杆菌 淀粉酶 枯草芽孢杆菌BF7658α-淀粉酶的性质 被引量:8 1989年 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BF7658产生的α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)在免疫学上与解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)产生的液化型α-淀粉酶相同。并且二者的α-淀粉酶的淀粉水解产物的层析谱带相同,分子量相等(约55000道尔顿),等电点相近(5.12和5.28);B.subtilis Marburg 168α-淀粉酶分子量为64000道尔顿,等电点为6.12。因此,B.subtilis BF7658产生的α-淀粉酶是液化型α-淀粉酶。因而建议将B.subtilis BF7658改名为B.amyloliquefaciens BF7658。 王桂芬 蒋如璋 吴立云 陈启民 耿运琪关键词:枯草芽孢杆菌 淀粉酶