蔡军
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
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- 谷氨酸脱羧酶表达型质粒的构建
- 1997年
- 采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）克隆了谷氨酸脱羧酶基因的ｃＤＮＡ，双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定后，将此编码５８５个氨基酸、全长１７５８ｂｐ的ｃＤＮＡ重组入ｐＧＥＸ表达型载体中，通过原位杂交筛选阳性重组质粒，并通过序列分析证实重组质粒接口处读码框架无误，为谷氨酸脱羧酶重组基因的表达及表达产物在临床诊断中的应用奠定了基础。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶胰岛细胞自身抗原糖尿病
- 谷氨酸脱羧酶基因的体外表达
- 1998年
- 目的 为获得足量的、可供实验研究和临床应用的谷氨酸脱羧酶（ Ｇ Ａ Ｄ６５） 抗原。方法将 Ｇ Ａ Ｄ６５ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 正确地重组到表达型载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３ Ｘ 中，并通过原核细胞进行诱导表达， Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳测定表达产物分子量，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法证实其免疫原性。结果 表达产物分子量约为６３ ．２３ Ｋ Ｄ，在误差允许范围（ ＜ ８ ％ ） 内，与 Ｇ Ａ Ｄ６５ 蛋白分子量相近，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 显示表达产物与１ 型糖尿病病人血清发生明显的显色反应，证明其具有免疫原性。结论 运用基因工程技术获得的表达产物为重组 Ｇ Ａ Ｄ６５ 抗原。这一抗原的获得，将有助于１ 型糖尿病的预测、预防、鉴别诊断以及免疫治疗等方面的研究。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶1型糖尿病抗原免疫原性体外表达蛋白分子
- 碘缺乏对大鼠神经元特异性烯醇化酶基因表达的影响被引量：6
- 1996年
- 以 NSE 的 cDNA 制备基因探针,用 Northern blot 方法检测 NSE mRNA 的相对含量,观察碘缺乏(甲低)对大鼠 NSE 基因表达的影响,结果表现1日龄和20日龄低碘甲低大鼠 NSE mRNA 含量均低于同龄正常大鼠,表明低碘甲低可于转录水平阻碍 NSE 的基因表达。
- 宋建良赵崇宋学文蔡军陈祖培张镜宇
- 关键词：烯醇化酶碘缺乏基因表达甲状腺机能减退
- 大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析被引量：4
- 1996年
- 胰岛β－细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶（Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ＧＡＤ，ＥＣ４．１．１．１５）同源物。以双链ｃＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ＧＡＤ基因的ｃＤＮＡ，将此包括编码５９３个氨基酸的全长ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列，证明其全长为１７７９ｂｐ．经比较发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑与Ｒｕｓｓｅｌｌ报导的大鼠脑ＧＡＤ基因序列，有一处碱基的差别，但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用ＰＣＲ扩增长片段ＤＮＡ进行了方法学上的探讨。
- 宋学文赵崇邓彤蔡军何炜张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶基因CDNA克隆
- 人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白基因的分离及重组质粒鉴定
- 2000年
- 目的:应用聚合酶链技术获取作为基因探针和体外表达研究所必需的人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA 69)编码基因,为探讨该基因在不同种系间和(或)组织来源间的差异打下基础。方法:分别从正常白人胰腺细胞和国人胰岛细胞瘤Poly(A^+)-RNA中逆转录合成编码人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA 69)的全长cDNA,以双链cDNA(ds cDNA)为模板,经聚合酶链反应(PCR)特异性扩增出hICA 69基因的编码序列。利用基因重组技术,将纯化的目的基因插入pSPORT1质粒的多克隆位点,经限制性内切酶加以初步鉴定。结果:成功地扩增了hICA 69基因,并正确地克隆进pSPORT1载体,酶切鉴定筛选出正向插入重组子,其结果与预期值一致。结论:hICA 69基因的克隆为应用基因工程技术生产胰岛细胞自身抗原、生产适用于1型糖尿病诊断的试剂盒打下一定的基础。
- 黄逎萍吴锐蔡军张镜宇
- 关键词：聚合酶链反应糖尿病质粒
- 国人ICA69基因cDNA的克隆及序列分析
- 2000年
- 目的 :克隆国人胰岛细胞自身抗原69kD蛋白基因(hiICA69)并经序列分析予以确证。方法 :采用聚合酶链式反应技术 ,从中国人胰岛细胞瘤cDNA文库中扩增出hiICA69编码序列cDNA ,将基因片段插入 pSPORT1质粒 ,进一步亚克隆到 pUC18载体中 ,经蓝白斑和限制性酶谱分析得以初步筛选后 ,双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定。结果 :证实了hiICA69基因全长为1449bp、编码483个氨基酸。与Pietropaolo等报道的序列比较 ,仅在编码第139位氨基酸的密码子由CAA→CTA ,即由谷氨酰胺→亮氨酸 ,其余均与文献报道和EMBL核酸数据库提供的序列相同。结论 :这一基因的获得和定征 ,为后续研究打下基础。
- 黄迺萍蔡军吴锐张镜宇
- 关键词：分子克隆
- 基因工程降钙素的实验研究
- 运用基因重组技术从人外周血基因组DNA和鲑鱼精子DNA中克隆人降钙素和鲑鱼降钙素的编码DNA,构建表达重组质粒p3XCT(h/s),序列分析表明:人降钙素(CA1CI)的核苷酸顺序与国外报导的白人序列一致,而鲑鱼降钙素(...
- 蔡军吴锐任智勇赵崇何炜尹潍张镜宇
- 关键词：降钙素基因工程多肽激素
- 文献传递
- 谷氨酸脱羧酶基因工程融合抗原在Ⅰ型糖尿病临床诊断中的应用被引量：5
- 1998年
- 目的运用基因工程技术获取具有免疫原性的谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ６５）重组蛋白，探讨其用于Ⅰ型糖尿病早期诊断的可行性。方法通过ＰＣＲ扩增获得ＧＡＤ６５全编码基因，经克隆及序列分析后在原核细胞中表达，鉴定表达产物的免疫原性，用表达产物初步检测３０例糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体。结果所获ＰＣＲ产物经序列分析确证为１７５８ｂｐ，编码５８５个氨基酸，并正确地重组到ｐＧＥＸ３Ｘ表达型质粒中，其在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性，并能应用于糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体的检测。结论利用具有免疫原性的ＧＡＤ６５基因重组蛋白，通过间接ＥＬＩＳＡ检测糖尿病病人血清中的相关抗体，是一种简便可行的Ⅰ型糖尿病早期诊断的方法。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：糖尿病谷氨酸脱羧酶自身抗原IDDM
- 鼠脑谷氨酸脱羧酶GAD_(65)基因的cDNA克隆
- 1998年
- 目的：从Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑中克隆谷氨酸脱羧酶ＧＡＤ６５的ｃＤＮＡ并进行序列分析。方法：用ＲＴＰＣＲ法扩增目的基因，酶切鉴定后，将特异性ＤＮＡ片段重组入质粒载体中，双脱氧末端终止法测定其全部核苷酸顺序。结果：克隆的特异性ＤＮＡ片段为编码５８５个氨基酸、含终止密码子在内的共１７５８ｂｐ的ＧＡＤ６５全编码序列。经重复实验，与ＥＭＢＬ核酸数据库提供的大鼠ＧＡＤ６５基因比较，发现第５７９位碱基由ＡＴ，并产生一新的ＰｖｕＩ酶切位点，但这种变化不涉及氨基酸的改变。结论：获得鼠脑谷氨酸脱羧酶ＧＡＤ６５基因的全长ｃＤＮＡ，为该基因的体外表达打下基础。
- 蔡军吴锐赵崇何炜张镜宇
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR
- 人降钙素基因的克隆及其序列分析被引量：3
- 1998年
- 目的：克隆人降钙素基因（ｈＣＴ）并经序列分析予以确证。方法：首先自新鲜全血中用含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的缓冲液提取基因组ＤＮＡ，经酒精沉淀和洗涤后，作为模板，加入上下游引物，应用聚合酶链反应直接扩增出ｈＣＴ的编码序列。并将此段ＤＮＡ插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳｍａＩ位点之间。最后用ＰＣＲ－双脱氧末端终止法进行序列分析。结果：成功地克隆了ｈＣＴ，证实所得ｈＣＴ基因克隆含编码人降钙素３２个氨基酸的全长ＤＮＡ序列９６ｂｐ。结论：已获得人降钙素基因克隆。
- 蔡芳蔡军赵崇邓彤张镜宇
- 关键词：降钙素聚合酶链反应基因克隆
