吴锐
- 作品数：15 被引量：578H指数：4
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- 人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白基因的分离及重组质粒鉴定
- 2000年
- 目的:应用聚合酶链技术获取作为基因探针和体外表达研究所必需的人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA 69)编码基因,为探讨该基因在不同种系间和(或)组织来源间的差异打下基础。方法:分别从正常白人胰腺细胞和国人胰岛细胞瘤Poly(A^+)-RNA中逆转录合成编码人胰岛细胞自身抗原69ku蛋白(hICA 69)的全长cDNA,以双链cDNA(ds cDNA)为模板,经聚合酶链反应(PCR)特异性扩增出hICA 69基因的编码序列。利用基因重组技术,将纯化的目的基因插入pSPORT1质粒的多克隆位点,经限制性内切酶加以初步鉴定。结果:成功地扩增了hICA 69基因,并正确地克隆进pSPORT1载体,酶切鉴定筛选出正向插入重组子,其结果与预期值一致。结论:hICA 69基因的克隆为应用基因工程技术生产胰岛细胞自身抗原、生产适用于1型糖尿病诊断的试剂盒打下一定的基础。
- 黄逎萍吴锐蔡军张镜宇
- 关键词：聚合酶链反应糖尿病质粒
- 国人ICA69基因cDNA的克隆及序列分析
- 2000年
- 目的 :克隆国人胰岛细胞自身抗原69kD蛋白基因(hiICA69)并经序列分析予以确证。方法 :采用聚合酶链式反应技术 ,从中国人胰岛细胞瘤cDNA文库中扩增出hiICA69编码序列cDNA ,将基因片段插入 pSPORT1质粒 ,进一步亚克隆到 pUC18载体中 ,经蓝白斑和限制性酶谱分析得以初步筛选后 ,双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定。结果 :证实了hiICA69基因全长为1449bp、编码483个氨基酸。与Pietropaolo等报道的序列比较 ,仅在编码第139位氨基酸的密码子由CAA→CTA ,即由谷氨酰胺→亮氨酸 ,其余均与文献报道和EMBL核酸数据库提供的序列相同。结论 :这一基因的获得和定征 ,为后续研究打下基础。
- 黄迺萍蔡军吴锐张镜宇
- 关键词：分子克隆
- 谷氨酸脱羧酶基因的体外表达
- 1998年
- 目的 为获得足量的、可供实验研究和临床应用的谷氨酸脱羧酶（ Ｇ Ａ Ｄ６５） 抗原。方法将 Ｇ Ａ Ｄ６５ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 正确地重组到表达型载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３ Ｘ 中，并通过原核细胞进行诱导表达， Ｓ Ｄ Ｓ聚丙烯酰胺凝胶电泳测定表达产物分子量，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法证实其免疫原性。结果 表达产物分子量约为６３ ．２３ Ｋ Ｄ，在误差允许范围（ ＜ ８ ％ ） 内，与 Ｇ Ａ Ｄ６５ 蛋白分子量相近，间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 显示表达产物与１ 型糖尿病病人血清发生明显的显色反应，证明其具有免疫原性。结论 运用基因工程技术获得的表达产物为重组 Ｇ Ａ Ｄ６５ 抗原。这一抗原的获得，将有助于１ 型糖尿病的预测、预防、鉴别诊断以及免疫治疗等方面的研究。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶1型糖尿病抗原免疫原性体外表达蛋白分子
- 谷氨酸脱羧酶基因工程融合抗原在Ⅰ型糖尿病临床诊断中的应用被引量：5
- 1998年
- 目的运用基因工程技术获取具有免疫原性的谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ６５）重组蛋白，探讨其用于Ⅰ型糖尿病早期诊断的可行性。方法通过ＰＣＲ扩增获得ＧＡＤ６５全编码基因，经克隆及序列分析后在原核细胞中表达，鉴定表达产物的免疫原性，用表达产物初步检测３０例糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体。结果所获ＰＣＲ产物经序列分析确证为１７５８ｂｐ，编码５８５个氨基酸，并正确地重组到ｐＧＥＸ３Ｘ表达型质粒中，其在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性，并能应用于糖尿病病人血清中抗ＧＡＤ６５抗体的检测。结论利用具有免疫原性的ＧＡＤ６５基因重组蛋白，通过间接ＥＬＩＳＡ检测糖尿病病人血清中的相关抗体，是一种简便可行的Ⅰ型糖尿病早期诊断的方法。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：糖尿病谷氨酸脱羧酶自身抗原IDDM
- 生物人工胰——以琼脂糖/聚乙烯醇互穿聚合物网络为免疫隔离膜被引量：2
- 1996年
- 对生物人工胰,即把胰岛包被在免疫隔离半透膜中保护使其不受排斥,已进行了广泛的研究,大多数使用海藻酸钠-聚赖氨酸作为免疫隔离膜,但其选择渗透性不尽如意。对琼脂糖膜的研究显示,由于其具有高度组织相容性和稳定性而在移植领域有很大的潜力。琼脂糖膜的渗透系数能精确测定。
- 于德民高伟尹潍吴锐姚康德
- 关键词：琼脂糖聚乙烯醇
- 基因工程降钙素的实验研究
- 运用基因重组技术从人外周血基因组DNA和鲑鱼精子DNA中克隆人降钙素和鲑鱼降钙素的编码DNA,构建表达重组质粒p3XCT(h/s),序列分析表明:人降钙素(CA1CI)的核苷酸顺序与国外报导的白人序列一致,而鲑鱼降钙素(...
- 蔡军吴锐任智勇赵崇何炜尹潍张镜宇
- 关键词：降钙素基因工程多肽激素
- 文献传递
- 琼脂糖微囊人工膜制备的实验研究被引量：4
- 1996年
- 使用美国Sigma公司琼脂糖,国产琼脂糖以及国产琼脂糖加上其他合成高分子制备成的互穿聚合物网络(IPN),对分子量不同的4种物质(甲基橙、VitB_(12)、胰岛素、溶菌酶)进行了渗透性能的研究。结果表明,对分子量小于6 000的溶质,在3种膜中的渗透系数相近,都可实现其通透。而对于大分子溶质(14 300)的隔离作用上,IPN膜具有良好的免疫隔离性能,两种琼脂糖膜虽然对溶菌酶这样的大分子有一定的隔离作用,但效果远差于IPN膜。研制出的免疫隔离效果优异的琼脂糖和合成高分子互穿网络,基本达到移植用要求。对6只糖尿病大鼠施行腹腔内植入微囊化胰岛手术,2 000～3 000个/只,不用任何免疫抑制剂。移植后第4天血糖明显下降,第7天时血糖至正常范围,维持达30天。实验表明所制备的琼脂糖微囊具有较邓的免疫隔离作用,为今后使用微包囊猪胰岛移值治疗Ⅰ型糖尿病的临床研究奠定了基础。
- 于德民尹潍吴锐高伟姚康德
- 关键词：微囊琼脂糖糖尿病
- 谷氨酸脱羧酶表达型质粒的构建
- 1997年
- 采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）克隆了谷氨酸脱羧酶基因的ｃＤＮＡ，双脱氧末端终止法对其全部核苷酸序列予以确定后，将此编码５８５个氨基酸、全长１７５８ｂｐ的ｃＤＮＡ重组入ｐＧＥＸ表达型载体中，通过原位杂交筛选阳性重组质粒，并通过序列分析证实重组质粒接口处读码框架无误，为谷氨酸脱羧酶重组基因的表达及表达产物在临床诊断中的应用奠定了基础。
- 吴锐蔡军赵崇宋学文尹潍张镜宇
- 关键词：谷氨酸脱羧酶胰岛细胞自身抗原糖尿病
- 琼脂糖微囊化猪胰岛移植治疗糖尿病的实验研究被引量：6
- 1996年
- 对微囊化猪胰岛的体外、体内功能进行研究。方法采用经胰导管连续灌注胶原酶技术分离和纯化猪胰岛。国产琼脂糖作为制备微包囊的免疫隔离材料，用“相分离”方法包被成年猪胰岛。２１只糖尿病大鼠用于实验，对照组６只，移植组１５只。其中６只腹腔内植入微囊化胰岛，６只腹腔内植入未包囊胰岛，３只肾包膜下植入未包囊胰岛。数据做组间比较，用ｔ检验。结果微囊化胰岛在１个月的培养期间可持续分泌胰岛素。囊内细胞生长良好，微囊没有溶解和破碎。培养２天的微囊化胰岛对高糖与茶碱刺激有明显反应，胰岛素释放量分别为低糖的１．８３倍和２．２８倍（Ｐ＜０．０１）。对６只糖尿病大鼠施行腹腔内植入微囊化胰岛手术，２０００～３０００个／只。不用任何免疫抑制剂。移植后第４天血糖明显下降，第７天时血糖降至正常范围，维持３０天。结论琼脂糖微囊具有较好的免疫隔离作用。
- 于德民尹潍吴锐高伟袁咏夏致祥
- 关键词：糖尿病胰岛移植
- 实验性链脲佐菌素糖尿病动物模型的研究被引量：555
- 1995年
- 采用腹腔内１次注射６０ｍｇ／ｋｇ体重ＳＴＺ方法，建立了速发型链脲佐菌素Ｗｉｓｔａｒ大鼠糖尿病模型。采用每周１次连续３周腹腔内注射ＣＦＡ０．５ｍｌ和ＳＴＺ（２５ｍｇ／ｋｇ）方法，建立了迟发型Ｗｉｓｔａｒ大鼠糖尿病模型。结果提示：速发型模型建立的机制与ＳＴＺ直接损伤胰岛β细胞有关，迟发型大鼠糖尿病模型胰岛β细胞损伤可能与Ｔ淋巴细胞介导的免疫机制有关。
- 于德民吴锐尹潍袁咏
- 关键词：糖尿病链脲佐菌素动物模型
