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番茄不孕病毒实时荧光RT-PCR检测方法研究被引量：2: 2009年; 番茄不孕病毒(tomato aspermy virus,TAV)是危害我国菊花生产的主要病毒之一。本研究根据该病毒外壳蛋白北京分离物的基因,设计特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与DAS-ELIAS相比,检测灵敏度提高了约1 000倍,重复性试验表明批内与批间变异系数均在5%以内,整个检测过程仅需2 h,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、快速有效的TAV检测方法。; 谭钟闻伟刚张吉红张颖; 关键词：番茄不孕病毒实时荧光RT-PCR

实时荧光RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒被引量：8: 2009年; 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高104倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对ORSV和CymMV的快速检测。应用该方法,从来自台湾的蝴蝶兰样品中检出齿兰环斑病毒。; 闻伟刚谭钟崔俊霞; 关键词：齿兰环斑病毒建兰花叶病毒实时荧光RT-PCR

痕量及微量转基因大米成分半巢式PCR检测方法的建立被引量：17: 2008年; 采用半巢式PCR技术建立了食品中痕量及微量转基因大米成分的检测方法。根据大米内源SPS基因以及转基因大米Bt63含有的外源Cry1A(b)/Cry1A(c)融合基因和Btc基因,分别设计了6对普通与半巢式PCR引物。扩增结果显示,针对理论DNA浓度的检测灵敏度,普通PCR扩增灵敏度为1ng/μl左右,半巢式PCR扩增灵敏度达到10-3～10-4ng/μl,半巢式PCR比普通PCR方法提高了103～104倍;在质量百分比的检测灵敏度方面,普通PCR方法扩增灵敏度在0.1%～1%之间,半巢式PCR方法的检测灵敏度能够达到0.001%～0.01%,半巢式PCR比普通PCR方法要提高10倍以上。在实际样品的检测中,速冻汤圆、婴儿米粉及芝士小圆饼等食品经普通PCR扩增,其内源SPS基因条带模糊或未扩增到,进一步采用半巢式PCR扩增后,能够得到清晰明亮的特异性条带。所有样品均未扩增到外源Cry1A(b)/Cry1A(c)和Btc基因。; 闻伟刚盛蕾张吉红谭钟; 关键词：半巢式PCR

检测小麦线条花叶病毒的TaqMan MGB探针技术被引量：9: 2009年; 为给小麦线条花叶病毒(Wheat streak mosaic virus,WSMV)的灵敏、稳定、快速检测提供依据,根据该病毒不同分离株外壳蛋白(Coat protein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与Taq Man MGB荧光探针,建立了WSMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,本研究设计的Taq Man MGB荧光探针对WSMV的检测具有很好的特异性,解决了因病毒不同分离物之间基因组变异较大、难以找到长片段保守序列来设计探针的困难。该方法无需任何PCR后处理,基因污染风险小。它与双抗体夹心酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高1 000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合于WSMV的快速检测。; 闻伟刚谭钟张吉红张颖; 关键词：TAQMAN

应用TaqMan MGB探针技术检测菜豆荚斑驳病毒被引量：10: 2009年; 根据菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了BPMV的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高了100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适于对BPMV的快速检测。应用该方法,对来自美国不同地区的携带有BPMV的大豆样品进行检测,均能够得到BPMV的典型扩增曲线,表明引物与探针对BPMV不同分离株具有良好的简并性。; 闻伟刚谭钟张吉红张颖; 关键词：菜豆荚斑驳病毒 TAQMAN

实时荧光RT-PCR检测香蕉苞片花叶病毒方法的建立被引量：8: 2009年; 香蕉苞片花叶病毒(Banana bract mosaic virus,BBrMV)是我国对外检疫性有害生物。为防止该有害生物传入我国,根据BBrMV不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计特异性引物与TaqMan荧光探针,建立了BBrMV的实时荧光RT-PCR检测方法。结果表明,该方法检测BBrMV的2个不同来源毒株,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为26.65和27.52;而马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其它毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对BBrMV的检测。; 闻伟刚谭钟张颖; 关键词：TAQMAN探针

齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒分子检测研究被引量：6: 2008年; 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,Cy MV)是严重危害兰科植物的两种主要病毒。本研究根据病毒外壳蛋白基因设计特异性引物,应用ELISA、普通RT-PCR、巢式RT-PCR和免疫捕获RT-PCR4种方法进行了检测研究与比较。结果表明:普通RT-PCR与ELISA方法检测灵敏度相当;巢式RT-PCR检测灵敏度要比普通RT-PCR与ELISA方法高出104倍以上;免疫捕获RT-PCR检测灵敏度介于普通RT-PCR和巢式RT-PCR之间。采用巢式RT-PCR方法对我国台湾进境的蝴蝶兰植株样本检测,1号样本出现与阳性对照一致的特异条带。双向测序分析,扩增产物序列与ORSV外壳蛋白基因具有100%的同源性,表明1号蝴蝶兰样本携带ORSV。; 闻伟刚谭钟崔俊霞陈先锋; 关键词：齿兰环斑病毒建兰花叶病毒

基于TaqMan MGB探针的李痘病毒分子检测被引量：3: 2009年; 李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国对外检疫性有害生物。研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白(coatprotein,CP)基因的保守序列,设计了特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan MGB分子探针的PPV实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PPV的2个主要流行株系M株系与D株系,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为14.96和18.22;而对于马铃薯Y病毒、李属坏死环斑病毒以及桃丛簇花叶病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比双抗体夹心酶联免疫检测方法的灵敏度提高1000倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PPV的检测。; 闻伟刚谭钟张颖; 关键词：李痘病毒 TAQMAN 实时荧光RT-PCR

基于TaqMan MGB探针的花生矮化病毒检测研究被引量：6: 2010年; 花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)是我国进境检疫性有害生物。本研究根据该病毒不同分离株外壳蛋白基因(coat protein,CP)的保守序列,设计了特异性引物与TaqMan MGB荧光探针,建立了PSV的实时荧光RT-PCR检测方法。方法特异性研究表明,针对PSV的2个不同株系PSV-E和PSV-W,均能够得到典型扩增曲线,Ct值分别为20.10和21.22;而对于黄瓜花叶病毒、番茄不孕病毒、马铃薯Y病毒、菜豆荚斑驳病毒以及烟草环斑病毒等其他毒株则没有典型扩增曲线,也无Ct值。灵敏度比较发现,该方法比普通RT-PCR检测方法的灵敏度提高100倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对PSV的检测。; 闻伟刚谭钟张颖; 关键词：花生矮化病毒 TAQMAN 实时荧光RT-PCR

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谭钟