郑喜
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：浙江大学化学工程与生物工程学系更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 一种与抗生素调控基因afsk高度同源的新基因——Spy1的克隆被引量：1
- 2009年
- 普那霉素是由始旋链霉菌产生的一种链阳性菌素类抗生素.目前国外对普那霉素的基因工程研究甚少,国内尚属空白,这阻碍了利用基因工程的方法来提高普那霉素产量的发展.本文通过对普那霉素产生菌——始旋链霉菌柯斯基因组文库的构建和菌落原位杂交,筛选出了与普那霉素高产密切相关的新基因所在的柯斯质粒,并通过酶切分析和Southern杂交确定了该基因所在的酶切片段,对酶切片段进行亚克隆测序,获得了与天蓝色链霉菌中抗生素调控基因afsk同源新基因的全长克隆,该新基因包含有1个2 127 bp的开放阅读框(ORF),编码708个氨基酸的蛋白,命名为Spy1.对该新基因的生物信息学初步分析表明,该基因编码的是丝/苏氨酸蛋白激酶.
- 洪小伟金志华金庆超郑喜黄柯梅乐和
- 关键词：普那霉素SOUTHERN杂交
- 普那霉素发酵与吸附分离耦合过程动力学被引量：3
- 2010年
- 根据S.pristinaespiralis E-71普那霉素发酵过程的代谢特性提出了一个针对产物合成期的普那霉素合成动力学方程,结合液膜-孔扩散理论,建立了描述2.5L通气搅拌发酵罐中JD-1大孔吸附树脂吸附分离原位耦合发酵过程的动力学模型,并获得产物生成速率常数、产物抑制常数及液膜传质和孔内扩散系数。结果表明该发酵-吸附耦合过程动力学模型能较好地描述这一原位分离耦合发酵生产普纳霉素过程。在此基础上,考察了树脂添加量及树脂半径对原位分离耦合发酵过程的影响,结果表明添加JD-1树脂能有效移走发酵液主体相中高达90%的普那霉素,且原位分离效果随树脂粒径减小而增强,在一定范围内随树脂添加量的增加而增强,当添加70g.L-1半径为0.195mm的树脂时,普纳霉素产量达到1.01g.L-1,其中被树脂吸附的高于95%。
- 郑喜金志华梅乐和张达
- 关键词：普那霉素大孔吸附树脂动力学模型
- 谷氨酰胺转胺酶基因的融合表达被引量：3
- 2010年
- 运用基因工程手段在大肠杆菌中高效表达谷氨酰胺转胺酶基因。以茂原链霉菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到一条长为1224bp的谷氨酰胺转胺酶基因片段,成功构建原核表达载体pGEX-TGase,并转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌BL21/pGEX-TGase。重组菌经IPTG诱导产生GST-TGase融合蛋白,并对表达条件进行了优化,应用亲和层析方法纯化融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示目的蛋白获得了较高水平的表达。
- 黄柯金志华金庆超洪小伟郑喜
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶融合蛋白
