陆静芬
- 作品数：12 被引量：33H指数：3
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目南京军区医学科技创新课题江苏省博士后科研资助计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 烟曲霉免疫优势抗原硫氧还蛋白还原酶GliT的鉴定及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估
- 目的 GliT(thioredoxin reductase GliT,TR)的鉴定,及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估。方法用生物信息学技术分析TR的同源性;用基因克隆和原核表达技术获得重组TR;经质...
- 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋
- 念珠菌优势抗体检测方法的建立及临床诊断价值评估被引量：9
- 2013年
- 目的侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)是免疫功能损伤或低下患者常见的感染和死亡原因,近年来检测IC患者血清中特异性抗体的血清学诊断方法成为研究热点。本文旨在建立检测念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)、果糖二磷酸醛羧酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)特异性抗体的ELISA方法,评估其在IC早期诊断中的应用价值。方法利用基因重组技术获得的Eno、Fba1重组蛋白作为包被抗原,建立测定人血清相应抗体的ELISA,并对方法的敏感性、特异性进行考查。结果建立了检测IC患者血清抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA,cut-off值分别为吸光度(A)值0.370和0.610。ELISA结果显示,IC患者血清中的抗Eno、抗Fba1抗体水平明显高于健康对照和非IC患者对照(P<0.001)。抗Eno和抗Fba1对诊断IC的敏感性和特异性分别为72.3%(73/101)和98%(196/200),87.1%(88/101)和96%(192/200),联合检测可提高敏感性至91.0%。且与细菌感染及其他真菌感染患者(如曲霉病)无交叉反应。IC患者中40.6%(41/101)可以在血培养阳性前检测到抗Eno、49.5%(50/101)可以在血培养阳性前检测到抗Fba1。结论建立了检测抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA法,检测念珠菌菌丝相分泌蛋白IgG抗体特异性和灵敏度良好,在念珠菌感染诊断中具有潜在临床应用价值。
- 马春芳陆静芬孔倩倩韩丹丹廖红李芳秋
- 关键词：念珠菌烯醇化酶ELISA
- 白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶的原核表达和应用研究
- 侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis，IC)多见于危重患者和免疫功能低下的患者，有很高的发病率和死亡率。白色念珠菌是常见的条件致病菌之一，在念珠菌感染中位列首位。并且仍然缺乏快速、敏感以及特异性检测I...
- 陆静芬
- 关键词：侵袭性念珠菌病免疫学诊断原核表达
- 抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT抗体对侵袭性曲霉病的诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的建立检测抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT(TRG)抗体的ELISA法,评价其对侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值。方法选择非中性粒细胞缺乏症IA患者42例、中性粒细胞缺乏症IA患者34例、血培养为其他真菌或细菌的非IA患者155例及体检健康者200例作为研究对象。用重组TRG作为包被抗原建立检测血清抗TRG抗体的ELISA法,检测研究对象血清抗TRG抗体水平,并与半乳甘露聚糖(GM)试验比较。建立兔IA模型观察抗TRG抗体产生的情况。结果 ELISA法检测抗TRG抗体的cut off值为0.514。非中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.827(0.571,1.234),抗TRG抗体阳性率为81.0%(34/42);中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.445(0.250,0.924),阳性率为41.2%(14/34)。非中性粒细胞缺乏症IA患者、中性粒细胞缺乏症IA患者组血清抗TRG抗体水平高于健康人+非IA患者对照组[0.191(0.134,0.293)],U分别为2 669.5、855,P均<0.01。对于非中性粒细胞缺乏症IA患者,抗TRG抗体ELISA检测法的敏感性高于GM试验(81.0%vs 52.3%,χ2=6.72,P<0.01);对于中性粒细胞缺乏症IA患者,GM试验的敏感性高于抗TRG抗体ELISA检测法(85.3%vs 41.2%,χ2=6.72,P<0.01)。2者联合检测,可使诊断非中性粒细胞缺乏症和中性粒细胞缺乏症IA的敏感性分别提高至88.1%(37/42)和91.2%(31/34)。血清抗TRG抗体在IA初期阶段持续升高,抗真菌治疗有效后,抗TRG抗体水平逐渐降至正常。兔IA模型显示感染烟曲霉1周后即出现抗TRG抗体,且抗体滴度快速增高。结论抗TRG抗体是辅助诊断非中性粒细胞缺乏症IA患者的潜在的标志物。
- 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋
- 关键词：侵袭性曲霉病中性粒细胞缺乏症
- 白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备抗白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)单克隆抗体,用以研究胞壁蛋白Fba1在侵袭性念珠菌感染(IC)中的致病作用。方法取重组白念珠菌Fba1蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA测定单克隆抗体的效价,western blot和免疫荧光技术鉴定其特异性,用IsoStrip鉴定其抗体类型。结果筛选到1株稳定分泌抗Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体类型为IgG2a,轻链为κ型。鉴定结果表明,ELISA效价为1×106,能与念珠菌裂解物中天然Fba1和基因重组Fba1特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单克隆抗体与白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌均发生反应。结论建立了1株持续分泌高效价抗念珠菌属特异性Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为研究Fba1在IC中的致病作用提供了实验材料。
- 李芳秋陆静芬史利宁胡毓安王颖马春芳孔倩倩
- 关键词：念珠菌单克隆抗体
- 健康人外周血白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶的抗原特异性T细胞检测被引量：2
- 2017年
- 目的侵袭性念珠菌病临床致死率较高,文中旨在研究白念珠菌免疫优势抗原1,6-果糖二磷酸醛缩酶(Fba)的细胞免疫应答类型,以评估其在侵袭性念珠菌病中是否具有保护性细胞免疫功能。方法建立检测健康人外周血单个核细胞(PBMC)中白念珠菌Fba抗原特异性T淋巴细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)与白细胞介素-17A(IL-17A)的酶联免疫斑点法(ELISPOT)。用白念珠菌重组抗原Fba为刺激物,检测26名健康人外周血PBMC中分泌IFN-γ、IL-4和IL-17A的阳性斑点形成细胞(SFC)频数。结果 Fba刺激后,26名健康人分泌IFN-γ、IL-4和IL-17A的频数分别为23.00(9.75,42.50)个、0(0,0.25)个和1.5(0.75,8.25)个,三者间两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。IFN-γ、IL-4和IL-17A的应答率分别为100%(26/26)、15.38%(4/26)和76.92%(20/26),IFN-γ和IL-17A的应答率显著高于IL-4应答率(P<0.01)。其中Fba刺激后产生强IFN-γ应答(SFC≥20)者占57.69%(15/26),而产生IL-17A强应答者1人,无人产生强IL-4应答。健康受试者PBMC应答同时产生Th1和Th17型应答者占65.38%(17/26);其中19.23%(5/26)的受试对象仅产生Th1型细胞免疫应答,无受试对象单独产生Th2型细胞免疫应答。结论白念珠菌特异性抗原Fba诱导的T细胞免疫以Th1型和Th17型为主,提示该抗原将产生保护性细胞免疫应答,具有成为理想疫苗的潜能。
- 胡毓安王静瑜商秀娟李伟周妍陆静芬李芳秋史利宁
- 关键词：酶联免疫斑点法干扰素Γ白念珠菌
- 烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：6
- 2011年
- 目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。
- 史利宁邵世和李芳秋孔小祥王仕钦陆静芬黄梅邵海枫
- 关键词：烟曲霉硫氧还蛋白还原酶基因克隆原核表达
- 抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定。方法取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性。结果筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体。病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应。结论获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础。
- 史利宁胡毓安陆静芬廖红马春芳李晓军李芳秋
- 关键词：曲霉单克隆抗体
- 白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶重组蛋白的制备及鉴定被引量：10
- 2011年
- 目的制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白。方法以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定。结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致。在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,最终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌。经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性。结论成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础。
- 陆静芬李芳秋史利宁王颖
- 关键词：白念珠菌基因克隆原核表达
- 抗果糖二磷酸醛缩酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值被引量：3
- 2012年
- 目的利用重组白念殊菌果糖二磷酸醛缩酶（fructose-bisphosphatealdolase，Fbal）抗原，建立测定人血清中抗白念珠菌FbalIgG抗体的ELlSA法，评估其在侵袭性念珠菌病（invasivecandidiasis，IC）诊断中的应用价值。方法收集经血培养确诊的各类IC患者（110例）、念珠菌定植者（50例）、细菌感染者（147例）及健康体检者（200例）血清，用重组Fbal包被ELlSA微孔板，测定血清中的抗Fbal抗体，确定cutoff值并对方法的精密度和特异度进行考察。结果以重组Fbal抗原建立的ELlSA法精密度良好，批内变异系数（coefficientofvariation，CV）=1．81％，批间CV=14．85％；阻断率-88．8％，证实此法对抗白念珠菌Fbal抗体具有特异性。依据ROC曲线，选择吸光度（absorbance，A）值0．61作为cut—off值。IC患者阳性率为74．5％（82／110），念珠菌定植患者阳性率为12％（6／50），二者差异有统计学意义（x^2=7．8，P〈o．01）；健康体检者及细菌感染患者的抗体检出与IC患者相比，差异有统计学意义（p均〈0．001）。结论建立了检测抗白念珠菌Fbal抗体的ELISA法，在IC早期诊断中具有潜在应用价值。
- 王颖陆静芬李芳秋史利宁黄梅王卫萍邵海枫
- 关键词：侵袭性念珠菌病抗体酶联免疫吸附试验
