陈丹
- 作品数：12 被引量：16H指数：2
- 供职机构：徐州医学院心血管病研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- pXZ208／gfp-akt1慢病毒表达载体的构建被引量：2
- 2009年
- Akt是蛋白激酶B（PKB）家族成员，是PI3K（phosphoinositide 3-kinase）下游激酶。Akt参与胞内许多重要生理过程，包括细胞周期调节、细胞存活、细胞生长、糖原代谢及细胞迁移等。Akt具有促心肌存活作用，成为目前治疗心肌缺血研究的热点。本研究首次将gfp-akt1融合基因克隆入pXZ208慢病毒载体，包装含GFP-Akt1的病毒感染心肌细胞，为揭示Akt促心肌存活的重要意义，以及心肌缺血治疗、缺血性心脏病基因治疗提供关键的实验手段。
- 陈丹李东野钱文浩朱红潘德锋吴培郎娅淞夏勇
- 关键词：细胞周期调节慢病毒载体家族成员
- pXZ208-EGFP—HO-1慢病毒表达载体的构建与鉴定
- 2011年
- 目的构建大鼠血红素加氧酶-1（HO-1）的慢病毒表达载体。方法应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定pXZ208-EGFP—HO-1表达载体，脂质体共转染法在包装细胞293FT中包装含有HO-1的慢病毒再感染大鼠原代心肌细胞。结果酶切出两条分别为egfp—ho-1片段大小约1640bp、pXZ208片段大小约为8583bp，酶切鉴定正确，包装出的慢病毒成功感染心肌细胞，感染效率可达60％以上。结论成功构建pXZ208-EGFP—HO-1的慢病毒表达载体，并建立高效稳定表达egfp—ho-1的慢病毒转染系统。
- 陶涛李东野陈丹吴皖灵徐通达朱红
- 关键词：血红素加氧酶-1慢病毒心肌肥大
- 红色荧光蛋白标记蛋白激酶B的慢病毒构建和表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建、包装并鉴定携带红色荧光蛋白（DsRed）标记的蛋白激酶B（aktl）的慢病毒。方法通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）扩增1488kbmouseaktl基因片段，通过TA克隆将akt1接入T载体，然后和IRES—dsred、pXZ208连接。酶切、测序鉴定正确的重组体（pXZ208-aktl—IRES—dsred）。三质粒系统经磷酸钙法包装病毒，荧光显微镜和流式细胞仪（FACS）检测病毒滴度。Westernblot比较病毒感染组与未感染组AKTl蛋白表达。pXZ208-akt1—IRES—dsred慢病毒和绿色荧光蛋白标记（GFP）的慢病毒共感染真核细胞，荧光显微镜观察两者的表达。结果经鉴定转移质粒构建正确，荧光显微镜观察293FT表达DsRed，FACS测得病毒滴度为（1．245±0．250）×10^7／ml。Westernblot证实病毒感染组与末感染组比较AKT1蛋白表达增高（P〈0．05）。与GFP标记的慢病毒共感染真核细胞，荧光显微镜观察到共同表达DsRed和GFP。结论DsRed标记akt1慢病毒构建和表达成功。DsRed和GFP标记慢病毒共感染真核细胞可观察到表达两种荧光蛋白。
- 罗园媛李慧娟李东野陈丹陶涛朱红徐通达夏勇
- 关键词：慢病毒蛋白激酶B红色荧光蛋白
- 构建pXZ208/gfp-akt1慢病毒表达载体促心肌细胞存活
- 目的构建携带GFP-Akt1融合基因的慢病毒真核表达载体pXZ208/gfp-akt1并鉴定目的蛋白,利用该慢病毒载体包装含Akt1蛋白的病毒感染心肌细胞,促心肌细胞存活。为揭示Akt促心肌存活的重要意义,以及心肌缺血损...
- 陈丹李东野潘德锋吴培郎娅淞
- 文献传递
- 携带人pax2、sfrp2干扰序列的慢病毒载体构建及体外表达
- 吴培李东野夏勇罗园媛陈丹潘德锋朱红徐通达
- 转染Akt1基因对大鼠缺血再灌注心肌线粒体通透性转换的影响
- 李东野王静夏勇罗园媛陈丹潘德锋朱红张卓琦徐通达
- 转染Akt基因对心肌细胞I/R损伤的机制探讨
- 2011年
- 目的探讨转染基因Akt对心肌细胞缺血/再灌注(I/R)损伤的机制。方法采用新生SD大鼠进行心肌细胞培养,建立模拟心肌I/R模型;提取人Akt质粒,用阳离子脂质体介导的基因转染法将人Akt质粒转染心肌细胞。实验分5组:空白对照组(Control组)、缺血/再灌注损伤对照组(I/R组)、转染Akt基因组(Akt组)、转染阳离子脂质体空载体组(Vehicle control组)和Akt抑制剂组(Akt blockade组);各组进行I/R后测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐比色法检测细胞活性、免疫印迹法(Western blot法)检测细胞内Akt、低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表达。结果 Akt组较I/R组、Ve-hicle control组和Akt blockade组其LDH含量明显减少(P<0.05),细胞活性高(P<0.05),Akt与HIF-1α蛋白表达增加(P<0.05)。结论转染Akt基因可减少缺血性心脏病心肌细胞I/R损伤,对缺血性心脏病具有保护作用。
- 张琳李东野朱红徐通达陈丹
- 关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶心肌心肌再灌注损伤
- 转染Akt-1基因对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的保护作用研究被引量：2
- 2009年
- 目的通过观察转染Akt-1基因对大鼠心肌缺血-再灌注(I-R)损伤心脏功能及细胞凋亡相关蛋白的影响,探讨Akt-1基因对心肌I-R损伤保护作用的机制。方法使用结扎/松解左冠状动脉前降支法,结扎冠状动脉前降支30min,再灌注2h,建立大鼠在体心肌I-R模型。40只雄性SD大鼠随机分为五组:假手术组(S组),缺血-再灌注组(I-R组),转染Akt-1基因组(Gene组),空载体组(VC组),抑制剂组(AB组),每组8只。Gene组术前48h开胸心肌内直接分点注射脂质体Akt-1质粒复合物,S组和I-R组分别注射同等体积PBS,VC组注射等体积脂质体,AB组注射等体积脂质体Akt-1质粒LY294002混合物。所有大鼠经颈动脉插管至左心室记录HR、LVSP、LVEDP和±dp/dtmax变化,TTC染色法测定心肌梗死范围,TUNEL法原位标记凋亡心肌细胞,WesternBlot测定Akt-1、Casepase-3蛋白表达,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达。结果1.Gene组较I-R组、VC组和AB组左室心功能(HR、LVSP、LVEDP、±dp/dtmax)改善(P<0.05)。2.Gene组凋亡指数(AI)及心肌梗死范围较I-R组、VC组及AB组均显著减少(P<0.05),但仍高于S组(P<0.05);S组细胞凋亡阳性细胞几无表达,心肌细胞凋亡指数(AI)明显低于其余各组(P<0.05)。3.各组均可见Akt-1、Casepase-3蛋白表达,但S组中蛋白较其余各组减少(P<0.05);Gene组Akt-1蛋白表达较I-R组、VC组及AB组均增加(P<0.05);Gene组Casepase-3蛋白表达则较I-R组、VC组及AB组减少。4.S组Bcl-2和Bax表达较其余各组减少(P<0.05);Gene组较I-R组、VC组及AB组Bcl-2表达上调而Bax表达下调(P<0.05)。结论Akt-1基因转染对I-R心肌具有保护作用,该作用可能与促进Bcl-2表达,抑制Bax和Casepase-3表达从而抑制凋亡的发生有关。
- 李东野王静夏勇罗园媛陈丹潘德锋朱红宋建涛徐通达
- 关键词：心肌再灌注损伤基因细胞凋亡
- 冠心病人介入治疗前后凝血栓蛋白-1水平变化的初步探讨
- 刘怡李东野朱红夏勇罗园媛陈丹潘德锋徐通达
- 转染Akt1基因对缺血再灌注大鼠心肌线粒体通透性转换的影响被引量：11
- 2010年
- 目的:研究Akt1基因对缺血再灌注(I/R)损伤心肌细胞的保护作用,并探讨Akt1基因对心肌I/R损伤时线粒体通透性转换(MPT)功能的影响。方法:使用结扎/松解左冠状动脉前降支法,结扎冠状动脉前降支30min,再灌注120min,建立大鼠在体心肌I/R损伤模型。40只雄性SD大鼠随机分为5组,每组8只:假手术对照组(control组)、心肌缺血/再灌注组(I/R组)、转Akt1基因+I/R组(Ad-gene组)、空载体+I/R组(Ad-blank组)、转Akt1基因+I/R+Akt抑制剂组(Ad-inhibitor组)。Ad-gene组术前48h开胸心肌内直接分点注射脂质体Akt1质粒复合物,control组和I/R组分别注射同等体积磷酸盐缓冲液(PBS),Ad-blank组注射等体积脂质体,Ad-inhibitor组注射等体积脂质体Akt1质粒LY294002混合物。观察转染Akt1基因对大鼠I/R心脏乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)释放、心肌细胞凋亡、Akt1表达、线粒体和胞浆内细胞色素C(Cyc-C)表达以及MPT的影响。结果:Control组可见Akt1表达,但明显低于其余各组;与control组相比较,其余各组心肌细胞凋亡指数(AI)、LDH和CK均增高;与control组相比较,其余各组Cyc-C较胞浆表达增加而线粒体内表达减少。Ad-gene组Akt1蛋白表达较control组、I/R组、Ad-blank组及Ad-inhibitor组均增加;Ad-gene组AI、LDH和CK较I/R组、Ad-blank组及Ad-inhibitor组均显著减少,但仍高于control组;Ad-gene组Cyc-C较I/R组、Ad-blank组以及Ad-inhibitor组胞浆内表达减少而线粒体内表达增加;Ad-gene组较IR组、Ad-blank组和Ad-inhibitor组在540nm处吸光度值增高,但明显低于control组。I/R组、Ad-blank组以及Ad-inhibitor组Akt1、Cyc-C、AI、LDH和CK以及在540nm处吸光度值比较均无显著差异。结论:转染Akt1基因对I/R损伤心肌细胞具有保护作用,该作用可能与Akt1抑制I/R诱导的心肌线粒体膜通透性转换,从而保护线粒体的功能有关。
- 王静王静李东野夏勇罗园媛陈丹潘德锋朱红张卓琦
- 关键词：AKT1再灌注损伤线粒体通透性转换
