目的观察不同时期不同疗程高压氧(HBO)对局灶性脑缺血大鼠脑室室管膜下区(SVZ)、海马齿状回(DG)内源性神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型。将105只大鼠按抽签法随机分为假手术组(SS)、缺血再灌注模型组(IR)、缺血再灌注模型后1 d HBO治疗组(IR1d+HBO)、缺血再灌注模型后7 d HBO治疗组(IR7d+HBO)、缺血再灌注模型后14 d HBO治疗组(IR14d+HBO)和缺血再灌注模型后28 d HBO治疗组(IR28d+HBO)。造模后第2、4、6、8周分别采用免疫荧光BrdU/Nestin双标法检测SVZ、DG区内源性NSCs。结果DG BrdU/Nestin阳性细胞数在造模后2周时,SS组21.20±2.58,IR组56.40±4.51,IR1d+HBO组82.80±7.19,IR7d+HBO组70.00±5.09;4周时SS组21.00±2.92,IR组37.20±3.27,IR1d+HBO组70.60±5.12,IR7d+HBO组57.20±3.56,IR14d+HBO组45.80±4.32;6周时SS组20.20±1.92,IR组26.40±2.74,IR1d+HBO组48.00±3.16,IR7d+HBO组40.60±3.36,IR14d+HBO组31.60±2.41,IR28d+HBO组26.60±2.30;除第8周外,同期各组间DG BrdU/Nestin阳性细胞数差异均有统计学意义(P<0.01)。进一步两两比较显示,与SS组比较,各时间点IR组大鼠DG BrdU/Nestin阳性细胞数均增多(P<0.05);除第8周外,各时间点IR1d+HBO、IR7d+HBO及IR14d+HBO组大鼠DG BrdU/Nestin阳性细胞数均多于IR组(P<0.05);各组均在第2周/最初测量点时DG BrdU/Nestin阳性细胞数达到最多(P<0.05)。SVZ BrdU/Nestin阳性细胞数在造模后2周时,SS组25.20±2.86,IR组66.40±2.96,IR1d+HBO组90.40±6.50,IR7d+HBO组75.00±4.58;4周时SS组24.20±1.48,IR组49.80±4.32,IR1d+HBO组72.40±4.92,IR7d+HBO组57.80±6.46,IR14d+HBO组43.80±3.56;6周时SS组24.40±2.41,IR组28.80±2.77,IR1d+HBO组51.00±4.30,IR7d+HBO组42.00±3.39,IR14d+HBO组34.80±2.58,IR28d+HBO组31.30±3.41;SVZ BrdU/Nestin阳性细胞数在同期各组间差异均有统计学意义(P<0.05);进一步两两比较显示,与SS组比较,除第8周,各时间点IR组大鼠SVZ BrdU/Nestin阳性细胞数均增多(
目的:本研究以健康人外周血单核细胞为前体细胞,体外诱导其为树突状细胞(DC),负载直肠癌细胞株Lovo细胞冻融抗原,产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs),探讨其对Lovo细胞的杀伤作用。方法:联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α及rhsCD40L等细胞因子,密度梯度离心法、贴壁法从外周血获取单核细胞并进行诱导扩增,培养出DC,用冻融抗原冲击致敏DC。实验分3组:冻融抗原致敏DC组(Ⅲ组),未致敏DC组(Ⅱ组),T细胞组(Ⅰ组),观察CTL对Lovo细胞的杀伤作用。结果:冻融抗原致敏DC激活CTL的能力显著高于未致敏的DCs组,两组CTLs对Lovo细胞的杀伤率差异有统计学意义(50.9%vs24.7%,P<0.05)。结论:冻融细胞抗原致敏树突状细胞后活化CTLs,有抗肿瘤活性。
