鲁芳
- 作品数：9 被引量：3H指数：1
- 供职机构：北京林业大学理学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 双功能域β-折叠桶植酸酶提高土壤有效磷含量研究
- 2024年
- 农业生产中过度使用无机磷肥引发了土壤板结等一系列问题,因此有必要寻找一种替代的可持续的磷肥来源。土壤有机磷主要以植酸的形式存在,植物不能直接吸收和利用。植酸水解释放植酸磷可提供一个生态友好型的解决方案。通过向土壤中添加来自Bacillus sp.HJB17的双功能域β-折叠桶植酸酶(phyHT),研究其在土壤中的稳定性,探究phyHT提高土壤有效磷含量、改善土壤理化性质以及促进植物生长的作用效果。结果显示,在湿润土壤中,土壤微生物对phyHT影响很小,phyHT可在较宽的温度(20~40℃)和pH值(6.0~9.0)范围内稳定存在12 h并发挥高效催化功能。外源性添加phyHT后:(1)土壤植酸含量减少了17.00%,有效磷含量增加了22.52%;(2)土壤pH下降,电导率上升,CaCO_(3)含量降低了3.55个百分点,土壤有机质、铵态氮和速效钾含量分别增加了10.54%、18.38%和27.49%;(3)小麦幼苗生长长度、干物质积累量以及芽、根部组织全磷含量均显著增加。因此,外源性添加phyHT能够促进土壤植酸水解,增加土壤有效磷含量,提高土壤磷素有效性,同时,在一定程度上改善土壤理化性质,促进植物生长。
- 李江涛鲁芳王思齐张一彤任养杰国世阳王奔高伟
- 关键词：土壤磷有效性
- 双功能域β-折叠桶碱性植酸酶蛋白序列分析与酶学特性
- 2018年
- 【目的】表达、纯化来源于Bacillus sp.HJB17的双功能域β-折叠桶碱性植酸酶(phy HT),并对该酶进行蛋白序列以及酶学特征分析,为该酶的广泛应用奠定基础。【方法】应用生物信息学技术,对phy HT蛋白序列进行了生物信息学分析。表达、变复性、分离纯化得到具有酶活性的可溶性phy HT蛋白溶液,通过硫酸亚铁-钼蓝法对phy HT的酶学特性进行了研究。【结果】序列分析结果显示,phy HT由633个氨基酸组成,含有2个植酸酶结构域,属于典型的BPP植酸酶,相对分子量(MW)为69321.68 Da,理论等电点为5.37,为亲水性蛋白。二级结构中,phy HT中α-螺旋(helix)、β-片层(sheet)占主要的比例,高级结构以β片层形成的桶状结构为主。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为35°C,在45°C以下比较稳定。最适的p H为8.0,在p H为6.0–12.0条件之间比较稳定。低浓度的Ca^(2+)以及Mg^(2+)对酶活性有促进作用,Fe^(2+)、Mn^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)等金属离子对酶活性有抑制作用。【结论】本研究成功对phy HT进行了蛋白序列分析以及酶学性质研究,phy HT属于碱性植酸酶,酶活性高、稳定性好,在理论研究和工业生产方面均有很大应用价值。
- 鲁芳鲁芳张蓓刘永郭刚兴杨培龙杨培龙姚斌郭素娟
- 关键词：酶学特性
- 木聚糖酶XynB-E18的重组表达纯化及酶学性质测定被引量：1
- 2018年
- 为了测定木聚糖酶Xyn B-E18的活性以及酶学特征,采用大肠杆菌原核表达系统对来源于青贮饲料菌群的木聚糖酶Xyn B-E18进行重组表达纯化。在16℃180 r·min-1条件下表达,并通过Ni亲和层析和分子排阻层析的方法进行纯化,用DNS显色法测定其酶学性质。得到的重组蛋白能在大肠杆菌中获得高效表达,纯化后的蛋白溶液纯度达90%以上,蛋白分子量约为38k Da,酶活力可达1782 U,最适反应p H为6.5,在中性偏碱性条件下酶的稳定性较好,最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性保持较好。实验结果表明Xyn B-E18具有良好的稳定性,可具有更大应用潜力。
- 宋迎鲁芳严孝金张蓓刘永张立孟昆杨培龙姚斌高伟
- 关键词：分离纯化酶学特性
- 一种大量制备双功能域β-折叠桶植酸酶二体的方法
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种大量制备双功能域β-折叠桶植酸酶（二体）的方法。根据本发明的方法，首先利用PCR反应从phyH基因中获得双功能域β-折叠桶植酸酶基因，在大肠杆菌中的表达，变复性得到有活性的酶溶液，再分...
- 高伟鲁芳李倩倩郭刚兴
- 胡杨CBL1蛋白溶液的DSC研究
- 2014年
- 胡杨CBL1蛋白是一类重要的钙信号转导蛋白,在植物应对干旱、低温、高pH等环境胁迫中发挥着重要作用。通过差示扫描量热法,研究胡杨CBL1蛋白在-30~0℃与20~95℃的温度条件下的热力学性质。结果表明,虽然胡杨CBL1蛋白在应对低温环境胁迫中发挥作用,但是胡杨CBL1蛋白本身并不具有抗冻性能,且其熔化过程中的冰晶含量与保留温度呈指数对应关系;而在加热过程中,胡杨CBL1蛋白在81.6℃左右不可逆变性,在变性之前胡杨CBL1蛋白的熵与焓增量逐渐减小,在变性之后熵与焓迅速增加,显示出胡杨CBL1蛋白具有较高的热稳定性。
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- 双功能域β-折叠桶植酸酶的特性及其在土壤与育苗中的应用研究
- 磷是植物必需的营养元素之一，土壤中的有机磷多以植酸等络合态存在，很难直接被植物吸收。通过酶解法可降解植酸，释放磷元素，有效解决这一难题。双功能域β-折叠桶植酸酶（phyHT）是一种新分离出的催化活性高，热稳定性好的植酸酶...
- 鲁芳
- 关键词：苗木培育酶学特性磷元素
- 文献传递
- 福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的晶体生长和初步晶体学研究（英文）
- 2017年
- 过氧化物酶是一类广泛存在于生物体内的抗氧化剂,清除有氧代谢过程中产生的活性氧,对于保护机体内的生物大分子有重要的生物学功能.福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶(SF2523)作为过氧化物酶家族的一员,通过清除福氏志贺菌体内的活性氧,在维持其活性和致病性上起重要作用.目前,SF2523的三维结构还没有得到解析,其具体的功能机制也尚不清楚.为了得到SF2523蛋白的三维结构,进而了解具体的功能机制,实验获得了均一稳定的可溶蛋白,验证具有体外活性,培养出可用于X射线衍射的蛋白质晶体.在中国科学院高能物理研究所同步辐射装置收到晶体的衍射数据供结构解析使用.SF2523晶体属于空间群P2_12_12_1,晶胞参数为a=35.80,b=50.63,c=88.52,α=β=γ=90.00°,每个晶体学不对称单位含有1个蛋白质分子,马修斯系数为2.03~3/u,溶剂含量为39.56%.
- 刘永鲁芳郭刚兴冯舵张蓓高伟毕汝昌
- 关键词：活性氧晶体
- 叶绿体分裂蛋白PDV2表达和纯化
- 2017年
- 叶绿体是植物光合作用的重要场所。PLASTID DIVISION2(PDV2)是叶绿体外膜上调控叶绿体分裂的关键蛋白之一。PDV2的N末端较大伸向细胞质,C末端较小伸向膜间隙,探索叶绿体分裂蛋白PDV2-213(N末端213氨基酸残基)胞质侧结构域可溶性表达获得高纯度的蛋白质,为叶绿体分裂过程中其结构与功能的研究提供依据。通过pET表达载体的构建,优化原核表达条件,实现PDV2-213蛋白的可溶性表达;运用镍柱亲和层析和分子排阻层析的方法,对目的蛋白进行分离纯化。本研究可溶性表达了PDV2-213胞质侧结构域蛋白质,通过表达条件和镍柱亲和层析的优化,降低杂蛋白对PDV2-213蛋白质纯化过程的影响,获得高纯度的蛋白质。PDV2-213胞质侧结构域的高效可溶性表达和纯化,为叶绿体分裂过程中其结构与功能的研究提供依据。
- 郭刚兴韩翠晓刘永鲁芳高宏波高伟
- 关键词：叶绿体分裂可溶性表达蛋白纯化
- 一种大量制备双功能域β‑折叠桶植酸酶二体的方法
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种大量制备双功能域β‑折叠桶植酸酶（二体）的方法。根据本发明的方法，首先利用PCR反应从phyH基因中获得双功能域β‑折叠桶植酸酶基因，在大肠杆菌中的表达，变复性得到有活性的酶溶液，再分...
- 高伟鲁芳李倩倩郭刚兴
- 文献传递
