黄清玲
- 作品数：42 被引量：106H指数：7
- 供职机构：福建医科大学基础医学院分子医学研究中心更多>>
- 发文基金：福建省重大科技项目福建省教育厅资助项目福建省高等学校科技创新团队培育计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析被引量：2
- 2010年
- 目的 研究乙型肝炎病毒（hepatitits B virus,HBV）表面抗原大蛋白（large envelope protein,LHB）对HepG2细胞凋亡的影响,并以蛋白质组学方法探讨其机制.方法 以腺病毒表达载体pShuttle-IRES-hrGFP-1克隆HBV LHB基因,经重组、包装后获得重组腺病毒Ad-LHB,与空载体重组腺病毒Ad-GFP分别感染HepG2细胞,采用Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、JC-1细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒和碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡情况.Ad-LHB及Ad-GFP分别感染HepG2细胞,提取细胞总蛋白,各取600μg蛋白样品进行双相电泳,R350染色,以双相电泳图像分析软件ImageMaster 2D Platinum确定差异蛋白点,Ettan斑点自动挖胶系统切取差异蛋白,脱色酶解后进行MALDI-TOF-TOF MS鉴定并分析.结果 Ad-LHB感染导致HepG2细胞凋亡明显增加.双向电泳及扫描分析显示Ad-LHB与Ad-GFP感染的HepG2细胞共有39个蛋白差异.质谱分析并确定其中的33种共36个蛋白,这些差异蛋白质有9种与细胞凋亡密切相关,其中,CAPN2、eIF3K和PPP2CB在Ad-LHB感染HepG2细胞表达增高,SERPINH1、LASP1、PRDX1、DHRS2、LDHA和PSMA4在Ad-LHB感染HepG2细胞表达降低.结论 HBV LHB可致HepG2细胞凋亡,多种细胞凋亡相关蛋白参与此过程.
- 郑大利黄清玲吴云丽林建银林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒蛋白质组学双向凝胶电泳肝细胞细胞凋亡
- 67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响
- 为探讨细胞膜表面67kD层粘连蛋白受体(67kD laminin receptor,67LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用,从肝癌细胞中提取RNA,通过RT-PCR扩增67LR的前体37kD laminin recepto...
- 郑大利黄清玲蒋雪梅彭碧文林建银
- 文献传递
- 肝细胞癌患者B和C基因型乙型肝炎病毒X蛋白的变异特点被引量：8
- 2004年
- 背景与目的X蛋白是乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)最重要的致病因子之一,它在HBV相关性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的发生发展中起着重要作用。目前已知B、C基因型HBV相关性HCC的临床及病理表现不尽相同,但目前尚不清楚这种差别是否与B、C基因型HBVX基因之间的差别有关。因此本实验拟研究B、C基因型间HBVX蛋白氨基酸差异及其在HCC患者中的变异及特点,初步探讨其与HCC发生、发展的关系。方法PCR扩增22份乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性HCC患者血清HBVX基因,克隆、测序并以VectorNTI6.0软件分析其基因型。以DNAMAN软件对标准HBV及HCC来源的HBVX蛋白进行氨基酸同源分析。结果检测的22个HBVX基因片段均属于B或C基因型。B、C基因型HBVX蛋白之间存在14个氨基酸的差异,HCC患者来源的B、C型HBVX蛋白存在4个氨基酸的共有变异,C型HBVX蛋白尚有6个型特异性变异。这些差异或变异氨基酸均位于X蛋白B、T细胞表位或反式激活区及调节区内。结论B、C基因型HBVX蛋白之间存在氨基酸差异,且在HCC中发生基因型特异性变异,这些差异或变异氨基酸可能导致X蛋白免疫学功能及反式激活功能的不同。
- 徐晓陈婉南郑大利黄清玲林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因基因型肝细胞癌
- 晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列腺素合成的影响及可能机制被引量：1
- 2006年
- 目的探讨晚期糖基化终末产物对内皮细胞前列环素、前列腺素E2合成的影响及可能机制。方法不同浓度的晚期糖基化终末产物作用内皮细胞,酶联免疫吸附法测定前列环素的稳定代谢产物6-酮—前列腺素F1α和前列腺素E2的表达。逆转录聚合酶链反应、免疫细胞化学测定环氧合酶2 mRNA和蛋白表达的改变。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA对晚期糖基化终末产物刺激内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2的影响。结果晚期糖基化终末产物引起内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2增加(P<0.01),具有剂量依赖关系。晚期糖基化终末产物引起内皮细胞环氧合酶2的mRNA和蛋白表达增加(P<0.01)。晚期糖基化终末产物受体、核因子κB单/双基因反义RNA可减轻晚期糖基化终末产物刺激的内皮细胞分泌6-酮—前列腺素F1α、前列腺素E2(P<0.05或0.01),双基因的抑制效果更明显(P<0.05)。结论晚期糖基化终末产物可能通过晚期糖基化终末产物受体、核因子κB途径使内皮细胞的环氧合酶2表达增加,从而引起前列环素、前列腺素E2合成增加,这个机制可能参与了晚期糖基化终末产物所致的血管炎症损伤。
- 游捷黄清玲林旭刘礼斌林建银
- 关键词：病理学与病理生理学晚期糖基化终末产物环氧合酶2前列腺素合成反义RNA基因转染
- 提高医学生物化学教学质量的实践与体会被引量：3
- 2009年
- 生物化学是一门重要的医学基础课，也是一门较难掌握的课程。该文总结了在生物化学教学实践中，如何采用先进的教学手段以及多种教学方法来活跃课堂氛围，提高学生的学习兴趣，从而提高教学质量，培养学生的综合素质。
- 黄清玲何艳郑大利
- 关键词：生物化学教学方法教学质量
- 67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响被引量：7
- 2004年
- 探讨细胞膜表面 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7kDlamininreceptor ,6 7LR)在肝癌细胞侵袭转移中的作用 ,从肝癌细胞中提取RNA ,通过RT PCR扩增 6 7LR的前体——— 37kD层粘连蛋白受体前体(37kDlamininreceptorprecursor,37LRP)基因并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1 myc His(- )A ,采用脂质体将重组质粒转染到HepG2肝癌细胞中 ,通过G4 1 8筛选和RT PCR、流式细胞术鉴定 ,获得了细胞膜表面 6 7LR高表达 (阳性率为 6 9.2 % )和低表达 (阳性率为 1 1 .7% )的细胞克隆 ,采用体外细胞侵袭实验测定不同细胞的侵袭能力 ,发现膜表面 6 7LR高表达的细胞侵袭能力明显高于低表达及不表达细胞 ,说明 6
- 郑大利黄清玲蒋雪梅彭碧文林建银
- 关键词：层粘连蛋白受体肝癌细胞克隆
- 蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16细胞蛋白质表达谱的影响被引量：5
- 2011年
- 目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析。结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调。这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等。Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致。基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关。结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用。sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体。
- 齐元麟纪明开谢群黄清玲林建银
- 关键词：蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂黑色素瘤
- 67ku层黏连蛋白受体促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究分析67ku层黏连蛋白受体(laminin receptor,67LR)与肝癌细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)表达的关系,探讨67LR促进肝癌细胞体外侵袭能力的分子机制。方法以67LR转染HepG2的稳定细胞株及其对照细胞为材料,采用半定量RT-PCR分析目前已知的23种MMPs和4种TIMPs的表达及变化情况,对表达有变化的基因采用荧光定量PCR进行验证,采用明胶酶谱分析MMP活性的变化。结果半定量RT-PCR和荧光定量PCR发现,67LR高表达的LR4细胞,其MMP2,9的表达比67LR低表达的LR6及对照组pcD-NA-1细胞明显升高,明胶酶谱分析也揭示,LR4细胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性明显上升。结论67LR可以促进肝癌细胞MMP-2和MMP-9的表达和分泌,从而促进肝癌细胞体外侵袭能力。
- 黄清玲薛会丽郑大利林建银
- 关键词：肝癌细胞层黏连蛋白受体基质金属蛋白酶组织金属蛋白酶抑制剂
- 双剪接型2．2 kb乙型肝炎病毒基因组剪接变异体编码蛋白的反式激活作用被引量：5
- 2006年
- 目的研究双剪接型2．2 kb乙型肝炎病毒(HBV)剪接变异体编码的新蛋白的功能。方法PCR扩增双剪接型2．2kb HBV剪接特异性新基因并克隆于哺乳动物细胞表达载体pcDNA3．1/ HisC。以FuGENE6将此重组载体(pcDNA3．1/HisC-TPds)转染Huh7细胞,采用融合表达的多肽表位(X- press表位)抗体,通过Western blot检测目的蛋白在不同时间段的表达。pcDNA3．1/HisC-TPds分别与β-半乳糖苷酶报告载体psv-β-galactosidase(含SV40启动子/增强子)或pCMVβ(含CMV即刻早期启动子)共转染Huh7细胞,转染后48h裂解细胞并检测胞内β-半乳糖苷酶活性,实验数据以SPSS11．5软件分析。结果克隆420bp双剪接型2．2kb HBV剪接变异体新基因,Western blot显示其在Huh7细胞中表达相应蛋白,以转染后48h为最高。在含有CMV即刻早期启动子或SV40启动子/增强子的报告载体与pcDNA3．1/HisC-TPds质量比为1：10～1：50范围内,共转染有报告载体及pcDNA3．1/HisC-TPds的Huh7细胞内β-半乳糖苷酶活性均大于相应的pcDNA3．1/HisC空白载体对照组,且在1：10～1：40范围内存在剂量-效应关系。结论双剪接型2．2kb HBV剪接变异体编码的新蛋白可反式激活CMV即刻早期启动子及SV40启动子/增强子,提示其可能与HBV致病有关。
- 陈婉南黄清玲林建银王林郭丹华林旭
- 关键词：乙型肝炎病毒RNA剪接反式激活
- 尖锐湿疣中乳头瘤病毒感染与P53和ki-67表达的关系被引量：3
- 2002年
- 目的 探讨尖锐湿疣中乳头瘤病毒 (HPV)感染与 P5 3和 ki- 6 7的关系。 方法 采用免疫组织化学方法对 82例尖锐湿疣的 HPV感染、P5 3和 ki- 6 7的表达进行观察。 结果 HPV阳性者 2 4例 (2 9.3% ) ,P5 3阳性表达 2 0例 (2 4 .4 % ) ,ki- 6 7阳性表达 2 1例 (2 5 .6 % )。2 4例 HPV阳性者中 ,P5 3阳性表达 10例 (41.7% ) ,ki- 6 7阳性表达 11例 (45 .8% ) ,经关联分析 ,皮损中 HPV感染与 P5 3(χ2 =4 .2 4 7,P<0 .0 5 )和 ki- 6 7(χ2 =5 .6 8,P<0 .0 5 )阳性表达均有显著关联 ;而 P5 3与 ki- 6 7两者均阳性者仅有 6例 (χ2 =0 .98,P>0 .0 5 ) ,无明显关联。 结论 在尖锐湿疣中 HPV感染伴随 P5 3和 ki- 6
- 王育英黄清玲张声
- 关键词：乳头瘤病毒感染尖锐湿疣KI-67抗原P53基因
