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郑大利: 作品数：45 被引量：133H指数：8; 供职机构：上海交通大学更多>>; 发文基金：福建省重大科技项目福建省教育厅资助项目福建省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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低表达bcl-2对神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡的影响: 2006年; 目的观察无血清条件下bcl2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法通过脂质体介导的基因转染,建立稳定转染表达反义bcl2mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2(HepG2antibcl2)并鉴定,采用AOEB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,分光光度法测定Caspase3活性。结果终浓度50μmol/LC2神经酰胺作用24h,可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2vector细胞及HepG2antibcl2细胞发生凋亡。AOEB染色可见典型的细胞凋亡表现。流式细胞仪检测显示C2神经酰胺作用12,18,24h,HepG2antibcl2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2vector细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。终浓度50μmol/LC2神经酰胺作用12h,HepG2antibcl2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带,而HepG2细胞及HepG2vector细胞作用24h出现DNA梯状条带。HepG2细胞和HepG2vector细胞Caspase3活性随C2神经酰胺(50μmol/L)作用时间延长而增强,HepG2antibcl2细胞Caspase3活性始终维持较高水平。结论低表达bcl2可通过增加Caspase3活性从而促进C2神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡。; 高永琳郑大利许云禄; 关键词：神经酰胺类

基于功能基因组策略的肝癌发病新机制研究: 韩泽广1黄健1邓庆2郑大利; 我国每年新增原发性肝癌46.6万例，占世界新发肝癌病例一半以上，多与乙型肝炎病毒（HBV）感染有关。原发性肝癌易转移，治疗效果不佳，死亡率高。主要是临床缺乏有效的诊疗手段，更深层的原因是对肝癌发病机制认识不清。该项目...; 关键词：; 关键词：肝癌乙型肝炎病毒感染基因表达肿瘤治疗

秩和比法对A型选择题的质量分析和筛选被引量：2: 2000年; 试题质量分析是题库建设和考试分析中的一个关键环节.本文采用难度、区别度和错选答案分布指数三个指标,用秩和比法对64道A型选择题的质量进行综合分析,并结合聚类分析方法将试题按质量等级分为三类,为试题的筛选提供了客观的依据.; 林德馨郑大利廖之君; 关键词：选择题试题质量题库建设文采考试分析; 全文增补中

弓形虫P^(30)的克隆表达及其对巨噬细胞凋亡的影响: 2004年; 目的　获得能表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆并观察内源性表达的P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法　通过PCR扩增获得P3 0 基因片段 ,定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1/Hygro(- )中 ,利用酶切、DNA序列分析鉴定阳性克隆 ,采用脂质体将重组质粒转染到RAW 2 6 4 .7巨噬细胞中 ,通过Hygromycin筛选和PCR、免疫组化鉴定 ,用流式细胞术DNA倍体分析计算稳定转染和瞬时转染P3 0 基因的巨噬细胞的凋亡率。结果　 1.PCR、酶切、连接的产物经电泳鉴定 ,均与预期设计相符合 ,DNA序列分析发现重组质粒中的目的基因序列与文献报道相符。2 .PCR和免疫组化鉴定发现转染P3 0 重组质粒的巨噬细胞能稳定地复制质粒并表达弓形虫P3 0 蛋白。 3.P3 0 稳定转染的细胞凋亡率均在 2 %左右 ,不同细胞之间没有区别。 4 .瞬时转染空载体和P3 0 重组质粒的巨噬细胞其凋亡率均在 6 %左右 ,没有区别。结论　 1.获得了含P3 0 基因的重组质粒以及能稳定表达弓形虫P3 0 蛋白的小鼠巨噬细胞克隆。2 .无论是稳定转染还是瞬时转染 ,均不能引起巨噬细胞的凋亡 ,说明内源性表达的弓形虫P3 0 蛋白对小鼠巨噬细胞的凋亡没有影响。; 郑大利黄清玲章涛林建银; 关键词：弓形虫基因克隆巨噬细胞凋亡

67kD层粘连蛋白受体促进肝癌侵袭转移的子机制研究: 层粘连蛋白是细胞外基质(ECM)重要的成分之一.67 kD层粘连蛋白受体(67LR)是层粘连蛋白的一个非整合素受体，与层粘连蛋白相互作用，调节肿瘤的增殖、粘附、血管形成，促进肿瘤的侵袭转移.本实验室前期发现67LR的高表...; 薛会丽郑大利黄清玲

肝癌患者乙型肝炎病毒全基因组结构分析被引量：13: 2004年; 目的　研究肝细胞癌患者乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)全基因组的结构及特点。方法　PCR扩增并克隆乙型肝炎病毒表面抗原 (HBsAg)阳性肝癌患者血清中HBV全基因组DNA ,测序并进行基因结构分析。结果　获得不同肝癌患者来源的 2 2株HBV全基因组DNA ,均属于C或B基因型和adr或adw2血清型。与标准株相比 ,肝癌患者来源的HBV在表面抗原、核心抗原的B/T细胞表位、X蛋白的反式激活区及增强子Ⅱ、核心启动子区发生了一些有意义的共有变异。结论HBV的基因型与基因变异可能与HBV相关性肝癌的发生发展有关。; 林旭徐晓郑大利林建银; 关键词：肝癌乙型肝炎病毒基因组基因结构克隆

67kD层粘连蛋白受体促进肝癌侵袭转移分子机制研究: 层粘连蛋白是细胞外基质(ECM)重要的成分之一。67 kD层粘连蛋白受体(67LR)是层粘连蛋白的一个非整合素受体,与层粘连蛋白相互作用,调节肿瘤的增殖、粘附、血管形成,促进肿瘤的侵袭转移。本实验室前期发现67LR的高表...; 薛会丽郑大利黄清玲; 关键词：层粘连蛋白受体基质金属蛋白酶 MMP 组织金属蛋白酶抑制剂分子机制; 文献传递

乙型肝炎病毒剪接蛋白在大肠埃希菌中的表达和纯化: 2012年; 目的高效表达并获得高纯度的乙型肝炎病毒剪接蛋白(hepatitis B splicing protein,HBSP)。方法将HBSP编码基因克隆入原核表达载体pET43.1a(+),并在目的基因的C端引入StrepⅡ标签的编码序列,构建HBSP表达载体;将StrepⅡ标签的编码序列置于HBSP基因片段的N端,同时在StrepⅡ和HBSP之间引入终止密码子以构建对照载体。将以上质粒分别转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),以IPTG诱导,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达及其可溶性;通过Strep-Tactin系统亲和层析纯化蛋白,Western blot检测其反应原性。结果成功构建HBSP重组表达载体pET-43-HBSP-StrepⅡ及对照载体pET-43-StrepⅡ,经IPTG诱导后,分别在大肠埃希菌中高表达Nus-HBSP-StrepⅡ及Nus-StrepⅡ融合蛋白,且融合蛋白主要以可溶形式存在于细菌裂解上清液中。通过亲和层析获得纯度超过95%的Nus-HBSP-StrepⅡ及Nus-StrepⅡ融合蛋白,两融合蛋白均能被Strep.TagⅡ单抗识别。结论在大肠埃希菌中可高效、可溶性表达并获得高纯度的HBSP融合蛋白及对照蛋白,为HBSP功能研究打下良好基础。; 吴龙飞陈金烟焦伯延郑大利林旭; 关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接大肠埃希菌基因表达

HBx基因转染对Huh7细胞中基因转录的影响被引量：5: 2008年; 目的:研究HBx基因对肝癌细胞Huh7中基因表达的影响,为探讨HBx在肝癌发生发展中的分子机制提供依据。方法:以pcDNA3.1b质粒为载体,将HBx转入Huh7细胞中,同时将pcDNA3.1b作空白对照。用Western印迹法证实基因转染成功。应用Affymetrix公司的人类全基因组寡核苷酸基因芯片分析转染HBx基因前后,Huh7细胞的基因表达谱。随机选择转染前后有明显差异的6个基因(3个上调,3个下调),用荧光定量PCR技术进行验证。结果:从基因芯片结果分析中发现,与对照组相比,HBx转染后Huh7细胞中明显上调的基因有88个,下调的基因有111个,这些差异基因的功能涉及多个方面。结论:HBx基因对肝癌细胞的影响是双向的,既有转录激活的作用,同时又有转录抑制的功能。这些数据对于理解HBx基因在肝癌发生发展中的作用具有重要的参考意义。; 章莉郑大利黄健韩泽广; 关键词：寡核苷酸序列分析 HBX基因

SMMC-7721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化被引量：5: 2002年; 分离纯化肝癌细胞的 6 7kD层粘连蛋白受体 (6 7LR) ,以便进一步研究 6 7LR的结构、功能及其在肝癌浸润、转移过程中的作用 .以SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞为材料 ,采用13 1I标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力 ;亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体 ,用SDS PAGE、放射自显影及体外竞争结合实验进行鉴定 .在相同条件下SMMC 772 1肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量为 17 5 4± 0 4 9ng 10 5细胞 ,而L 0 2正常肝细胞与层粘连蛋白的特异结合量为 8 36± 0 4 8ng 10 5细胞 .经过亲和层析 ,从SMMC 772 1肝癌细胞和L 0 2正常肝细胞均可获得纯化受体 ,SDS PAGE显示为单一条带 ,分子量为 6 7kD ,放射自显影及体外竞争结合实验表明其具有较强的与层粘连蛋白结合的活性 .体外竞争结合实验表明 ,SMMC 772 1肝癌细胞层粘连蛋白受体 (772 1LnR)的抑制率可达到 96 2 7± 2 2 9% ,而L 0 2正常肝细胞层粘连蛋白受体 (L 0 2LnR)的抑制率为 4 8 71± 3 79% ,这说明 772 1LnR与层粘连蛋白的亲和力明显高于L 0 2LnR(P <0 0 0 1) .结果表明 ,与L 0 2肝细胞比较 ,SMMC 772 1肝癌细胞具有与层粘连蛋白较强结合能力的特异受体 ,并从肝癌细胞膜上分离纯化到与层粘连蛋白有较强亲和力的 6; 郑大利林建银; 关键词：SMMC-7721 肝癌细胞分离纯化

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