姚二梅
- 作品数：11 被引量：39H指数：4
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家攀登计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白的基因结构及同源分析被引量：2
- 1997年
- 从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２株，经常规方法提取其病毒核酸后，构建了限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库。对其中ＨｉｎｄⅢ－Ｆ片段（５２．９～５８．９ｍｕ）的正反２条链的序列测定发现，其反链存在１个编码容量为３８７个氨基酸（ａａ）的开放读码框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ），经Ｇｅｎｅｂａｎｋ／ＥＭＢＬ同源搜寻后证实其编码产物为ＥＤＳＶ的ＤＮＡ结合蛋白（ＤＢＰ）。与其他腺病毒ＤＢＰ的氨基酸序列进行同源比较，其Ｎ端同源性在１９．０％～４６．２％之间，Ｃ端同源性在２７．７％～６０．４％之间。腺病毒ＤＢＰ的３个保守序列ＣＲ１，ＣＲ２，ＣＲ３在ＥＤＳＶＤＢＰ中有较大变化，但ＥＤＳＶＤＢＰ的锌指框架（Ｚｎ２＋ｆｉｎｇｅｒｍｏｔｉｆ）却保留了对其功能必需的残基。
- 曾力宇金奇章金钢李茂祥姚二梅殷震侯云德
- 关键词：鸡减蛋综合征病毒DNA结合蛋白核苷酸序列
- 通用型腺病毒伴随病毒载体的构建被引量：3
- 1998年
- 目的构建含腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）基因组两端的反向重复序列（ＩＴＲｓ）和表达必须元件如启动子、多克隆位点和ＰｏｌｙＡ信号的通用型载体质粒ｐＡＣＲ－Ｎｅｏ，并获得重组ＡＡＶ（ｒＶＶ／ＡＣＲ－Ｎｅｏ）。方法通过ＤＮＡ重组技术，将ＳＶ４０ＰｏｌｙＡ、Ｎｅｏ基因、ＣＭＶ－ＩＥ启动子和多克隆位点组成表达盒子，取代含ＡＡＶ全基因组质粒ｐＳＳＶ９中ＡＡＶ结构基因部分，构建成质粒ｐＡＣＲ－Ｎｅｏ。用ｐＡＣＲ－Ｎｅｏ转染５型腺病毒（Ａｄ５）感染的重组ＡＡＶ包装细胞系ＡＥ１２０１，能获得重组病毒ｒＡＡＶ／ＡＣＲ－Ｎｅｏ。提取ｒＡＡＶ／ＡＣＲ－Ｎｅｏ感染细胞的染色体，用Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析重组病毒基因组在感染细胞中的存在情况。结果质粒ｐＡＣＲ－Ｎｅｏ转染包装细胞系后所得ｒＡＡＶ／ＡＣＲ－Ｎｅｏ滴度为４．２×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，并且ｒＡＡＶ／ＡＣＲ－Ｎｅｏ能在转导细胞内实现其基因组与细胞染色体的整合。结论成功地构建了通用型ＡＡＶ载体，为今后的ＡＡＶ载体研究。
- 姚二梅冯泽华郑毅侯云德
- 关键词：腺病毒伴随病毒
- 腺病毒伴随病毒载体介导的I型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转移及其杀肿瘤效应被引量：3
- 1998年
- 目的研究腺病毒伴随病毒（ＡＡＶ）载体介导杀肿瘤基因的转移及其在肿瘤治疗方面的应用。方法应用作者构建的腺病毒伴随病毒载体，克隆Ｉ型单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶＩ－ＴＫ）基因，构建质粒ｐＡＣＴＫ－１９。用ｐＡＣＴＫ－１９转染５型腺病毒（Ａｄ５）感染的重组ＡＡＶ包装细胞系ＡＥ１２０１，获得重组病毒ｒＡＡＶ／ＡＣＴＫ。再用此重组病毒感染肺癌细胞系Ａ５４９，并联合丙氧鸟苷（ＧＣＶ）作用，研究其体外对肺癌细胞的杀伤作用。结果重组ｒＡＡＣ／ＡＣＴＫ的滴度为３４×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，感染肺癌细胞系Ａ５４９，实现了ＴＫ基因的转移及与细胞染色体的整合和表达，对Ａ５４９细胞具有杀伤作用。
- 姚二梅冯泽华吴小兵颜子颖侯云德
- 关键词：腺病毒伴随病毒胸苷激酶基因杀瘤效应
- 痘苗病毒天坛株基因组旁侧区结构及开放读码框架的分析被引量：8
- 1997年
- 本文分析了我国痘苗病毒天坛株基因组两端的ＨｉｎｄⅢ－Ｃ和－Ｂ片段所编码的多肽，并与其他痘苗病毒株和正痘病毒进行了比较。结果表明，天坛株基因组ＨｉｎｄＩＩ－Ｃ和－Ｂ片段共有４６个主要的开放读码框架（ＰＲＦｓ），其中一个ＯＲＦ属于痘苗病毒基因组中第一次发现的与天花病毒相似的基因编码区。此外，天坛株基因组丝氨酸蛋白酶抑制剂Ⅱ的编码区由于移码变异而分成两个不同ＯＲＦｓ。与其他痘苗病毒株相比，天坛株基因组有多个ＯＲＦｓ的缺失，以上现象提示，天坛株在生物学性状上与其他毒株的差异可能与此有关。
- 金奇陈南海姚二梅黄静侯云德
- 关键词：痘苗病毒基因组开放读码框架
- 鸡减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因的序列分析被引量：18
- 1997年
- 从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经非免疫鸭胚增殖后，用差速离心法纯化和蛋白酶Ｋ法抽提，获得全长约为３４ｋｂ的ＥＤＳＶ全基因组。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ酶解ＥＤＳＶ全基因，以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ为载体，构建了ＥＤＳＶ的ＨｉｎｄⅢ酶解片段的文库，并对其中的Ｄ片段（长为３．６ｋｂ）进行了序列测定及同源分析，结果提示该片段中唯一一个完整的开放读码框架（ＯＲＦ）（４３０～３１６２位）编码ＥＤＳＶ的六邻体蛋白，其特定氨基酸残基的排列组合和功能区的分布等与其他几个具有代表性的腺病毒的六邻体蛋白相似，它们之间的核苷酸序列同源性在４９．６％～７２．９％，氨基酸序列同源性在４６．３％～８３．９％。本研究为进一步阐明ＥＤＳＶ基因组的结构特点。
- 曾力宇金奇章金钢朱雷姚二梅李茂祥李富胜殷震侯云德
- 关键词：减蛋综合征病毒
- 新型系列病毒载体的研制和应用
- 颜子颖侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健姚二梅
- 1、将单纯疱疹病毒（HSV-1）扩增子载体应用微小病毒载体(AAV-2)包装系统。发明了一种既提供了AAV反式蛋白，又可充当辅助病毒的HSV-1混合毒种dvHSV/AAV，以此混合毒株生产重组AAV，与常规方法相比，简便...
- 关键词：
- 关键词：病毒载体基因导入基因治疗
- 腺病毒伴随病毒载体的研究进展
- 1997年
- 腺病毒伴随病毒载体的研究进展姚二梅冯泽华侯云德随着对人类基因愈加深入的了解，以及对真核基因改造和转移技术的发展，人类基因治疗已成为现实。基因治疗的关键问题就是要寻找有效的基因转移系统。在病毒介导和非病毒介导的两类基因转移系统中，感染性的重组病毒载体是...
- 姚二梅冯泽华侯云德
- 关键词：腺病毒病毒载体基因治疗AAV
- 减蛋综合征病毒100K蛋白基因的克隆与序列分析被引量：5
- 1998年
- 用常规方法提取减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）中国分离株（ＡＡ２株）病毒ＤＮＡ，分别构建了限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ、ＳｐｈⅠ、ＰｓｔⅠ水解片段的全基因文库，并对其中１００Ｋ蛋白基因的序列进行了分析。ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白基因位于减蛋综合征病毒基因组５５．７～６４．８物理图谱单位（ｍ．ｕ），共２０９１个核苷酸（ｎｔ），其编码产物由６９６个氨基酸（ａａ）组成，推测其分子量为７７．７ｋＤ。编码蛋白氨基酸同源性分析表明，ＥＤＳＶ１００Ｋ蛋白与人腺病毒（Ａｄ２、Ａｄ５、Ａｄ１２、Ａｄ４１）、Ⅰ群禽腺病毒（ＣＥＬＯ和ＦＡＶ１０）的同源性为３２．３～３４．４％之间，而与羊腺病毒（ＯＡＶ）的同源性达到５６．４％。
- 李茂祥金奇章金钢曾力宇姚二梅姚二梅侯云德
- 关键词：减蛋综合征病毒DNA克隆
- 鸡减蛋综合征病毒(EDSV-76)末端前体蛋白的基因结构分析被引量：7
- 1997年
- 从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了序列测定。同源比较分析证明：其Ｌ链含编码病毒末端前体蛋白，容量为５８０个氨基酸残基（ａａ）的开放读码框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点，如保守序列、核定位信号（Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ）。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与ＤＮＡ复制起始的机制提供了新的依据。
- 曾力宇金奇章金钢李茂祥姚二梅殷震殷震
- 关键词：鸡减蛋综合征病毒基因结构
- 以EBV复制子载体为基础的新型重组AAV载体包装系统被引量：2
- 1997年
- 重组腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体是能建立稳定表达的转导型表达载体,可用作基因治疗的外源基因荷载工具.与逆转录病毒相比,它具有高安全性、无致病性和能感染有丝分裂后细胞等的特点.目前重组AAV的制备,需要两种不同的重组AAV质粒,一种是含位于AAV基因组两端的为病毒复制和包装所必需的反向末端重复(Inverted ter-minal repeats,ITR)和外源基因的重组表达质粒载体;另一种质粒作为助手质粒,克隆了除两端ITR外的AAV全基因组DNA,它反式提供AAV复制和包装所需的病毒蛋白,当这两种质粒共转染宿主细胞时,如存在辅助病毒(腺病毒或单纯疱疹病毒)的感染,就能包装出含外源基因的重组AAV假病毒颗粒.
- 颜子颖姚二梅张桐舒跃龙侯云德
- 关键词：腺病毒
