姚玉峰
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 结核杆菌MazG的酶学性质和功能研究
- 目的我们于2008年完成了与结核杆菌实验室致病株H37Rv同一来源的、丢失毒力的H37Ra菌株的全基因组测序。比较两者的基因组,发现H37Ra的MazG产生了一个A219E自发突变(MazG[A219E])。为了研究结核...
- 吕亮东范小勇赵国屏姚玉峰
- 文献传递
- 地中海拟无枝菌酸菌U32染色体特性的脉冲场电泳分析被引量：1
- 2003年
- 地中海拟无枝菌酸菌 (Amycolatopsismediterranei)U32是产力复霉素SV的工业生产菌株。采用脉冲场电泳分析发现 ,地中海拟无枝菌酸菌U32仅有一条约 1 0Mb的线性染色体 ,没有内源性质粒。利用Southern杂交法 ,对 1 1个编码力复霉素生物合成、相关初级、次级代谢关键酶以及调控蛋白的基因 ,在U32染色体DNA的PshBI酶切片段上进行了定位。分析发现在一条长度约 70 0kb的PshBI酶切片段上 ,分别存在着力复霉素合成基因簇 (rif)、氮代谢的亚硝酸还原酶小亚基基因 (nasD)、衔接初级与次级代谢的甲基丙二酰变位酶基因 (mcm)、脂肪酸代谢的乙酰辅酶A羧化酶生物素载体蛋白基因 (accA)以及一套核糖体RNA转录单元。同时还发现U32至少有 5套核糖体RNA转录单元。其余定位的基因均只出现单一杂交信号。
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- 关键词：地中海拟无枝菌酸菌基因组染色体构型基因定位
- 力复霉素产生菌地中海拟无枝菌酸菌U32丙氨酸脱氢酶基因克隆及表达被引量：1
- 2003年
- 丙氨酸脱氢酶 (EC 1 4 1 1 )可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和NADH。它是生物体内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶。在地中海拟无枝菌酸菌 (Amycolatopsismediterranei)U32中 ,丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象 ,其活力受KNO3全局效应的调控。根据结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis)和天蓝链霉菌 (Streptomycescoelicolor)的丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好 ,设计一对简并PCR引物。以此引物从地中海拟无枝菌酸菌U32中扩增到一 5 5 5bp的片段 ,并以此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌U32基因组cosmid文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢酶结构基因 (ald)。它编码了一个 371个氨基酸的蛋白质 ,基因的GC含量为 72 5 % ,符合链霉菌的基因结构特征。在起始密码子的上游 6个碱基处 ,有一典型的链霉菌核糖体结合位点(RBS) :AGGAGG ,第 75位的氨基酸为赖氨酸 ,是丙酮酸结合位点。以pET2 8b为载体 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中高效表达了ald基因。用IPTG在 2 2℃时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最高。用His Tag柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶。酶学性质研究表明该酶专一性以L Ala和NAD(H)
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- 关键词：地中海拟无枝菌酸菌丙氨酸脱氢酶克隆基因
- 地中海拟无枝菌酸菌U32中生物素羧基载体蛋白结构基因的克隆、表达及转录被引量：5
- 2003年
- 乙酰辅酶A羧化酶 (AcetylCoACarboxylaseEC 6.4.1 .2 ,ACC)催化依赖于ATP的乙酰辅酶A羧化形成丙二酸单酰辅酶A ,该反应是脂肪酸生物合成途径中的第一步 ,也是受到调控的关键一步。根据结核分枝杆菌 (M .tuberculosis)和天蓝色链霉菌 (S .coelicolor)中ACC -α亚基的氨基酸保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好 ,设计简并引物以U32基因组DNA为模板扩增出一条约 2 5 0bp的片段 ,并以此片段作探针成功地从U32基因组cosmid文库中克隆到相应的ACC -α亚基的编码基因accA。该基因对应的ORF长1 797bp,编码一个 5 98个氨基酸的蛋白 ,推算出的分子量是 63,71 4Da ;基因G +Cmol%含量为70 .1 % ,符合U32基因结构特征 ,距起始密码子GTG上游 6个碱基处有链霉菌典型的RBS序列AGGAGG ,并有生物素羧化酶特征的ATP结合区。利用pET2 8(b)系统构建表达载体 ,在E .coliBL2 1 (DE3)中实现了accA的诱导表达 ,产物大部分以可溶形式存在 ,并通过WesternBlot证明该蛋白上确有共价结合的生物素。NorthernBlot分析了各种氮源对accA基因转录水平的不同影响。
- 卢捷姚玉峰姜卫红焦瑞身
- 关键词：地中海拟无枝菌酸菌U32结构基因克隆转录
