孙鹏
- 作品数：21 被引量：8H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用。该方法包括如下步骤：灭活甲型副伤寒沙门氏菌的O抗原链长控制酶基因cld，得到O‑抗原链长控制酶基因cld缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；使鼠伤寒沙门氏菌O抗原链长控制...
- 吴军孙鹏刘波唱韶红巩新王恒樑朱力潘超冯尔玲
- 伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用
- 本发明公开了一种伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的蛋白的制备方法，包括将脑膜炎奈瑟球菌O‑寡糖转移酶PglL的底物蛋白与脑膜炎奈瑟球菌O‑寡糖转移酶PglL在O‑抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表...
- 王恒樑朱力彭哲慧潘超冯尔玲刘先凯吴军孙鹏曾明王斌
- 一种细菌多糖结合疫苗的载体蛋白及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白及其应用。本发明提供了一种多糖和蛋白的偶联物，由细菌多糖和重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白偶联而成；所述细菌多糖以O-糖苷键形式连接在所述重组霍乱毒素B亚单位...
- 吴军孙鹏王恒樑潘超刘波朱力唱韶红巩新曾明
- 伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用
- 本发明公开了一种伤寒糖蛋白的生物制备方法及其应用。本发明公开一种细菌多糖修饰的蛋白的制备方法，包括将脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL的底物蛋白与脑膜炎奈瑟球菌O-寡糖转移酶PglL在O-抗原连接酶基因缺陷的细菌中共表...
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- 可被O-糖基化修饰的多肽
- 本发明公开了可被O-糖基化修饰的多肽。本发明所提供的多肽为：a1)序列为W-P-Xn-S-Ym的多肽；a2)含有a1)所述序列的多肽；其中，Xn为1或2或3或4个氨基酸，Ym为1或2或3个氨基酸；所述氨基酸中的氨基酸为2...
- 王恒樑潘超朱力吴军冯尔玲刘先凯孙鹏王东澍曾明王斌
- 用大肠杆菌制备O157多糖-菌毛蛋白结合物的研究被引量：2
- 2013年
- 目的以大肠杆菌O157型多糖与菌毛蛋白PilE为模型,在大肠杆菌中重构脑膜炎奈瑟球菌的O-糖基化修饰系统,为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗技术提供基础。方法用Red重组技术敲除大肠杆菌W3110的O抗原连接酶基因waaL,构建CLM24菌株。在该菌株中共表达脑膜炎奈瑟球菌菌毛蛋白基因pilE、寡糖转移酶基因pglL,构建O-糖基化修饰系统。分别转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL与大肠杆菌O157型多糖表达载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,再利用Western印迹检测菌毛蛋白PilE的修饰情况。结果利用抗His-tag单抗进行Western印迹检测,16℃IPTG诱导条件下,转化大肠杆菌鼠李糖转移酶基因wbbL于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-wbbL-pglL与其他对照菌相比,不仅在相对分子质量为19×103处有特异性条带,而且在相对分子质量(40～60)×103处也出现了特异的梯状条带;转化大肠杆菌O157的O多糖基因簇克隆载体于构建了O-糖基化修饰系统的大肠杆菌,重组菌CLM24/pMMB66EHpilE-his/pETtac28-pglL/pACYC184-O157用抗O157多抗和抗His-tag单抗进行Western印迹检测,在相对分子质量(40～60)×103处均产生特异的梯状条带。结论在大肠杆菌中重建的O-糖基化修饰系统可以利用自身的O16型O多糖或异源的O157型O多糖修饰菌毛蛋白PilE,获得多糖-蛋白结合物。本研究为建立一步生物交联法制备多糖-蛋白结合疫苗提供了技术基础。
- 徐敏锐孙鹏张部昌刘波吴军
- 关键词：PILE大肠杆菌
- 一种细菌多糖结合疫苗的载体蛋白及其应用
- 本发明公开了一种细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白及其应用。本发明提供了一种多糖和蛋白的偶联物，由细菌多糖和重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白偶联而成；所述细菌多糖以O‑糖苷键形式连接在所述重组霍乱毒素B亚单位...
- 吴军孙鹏王恒樑潘超刘波朱力唱韶红巩新曾明
- 一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用
- 本发明公开了一种O抗原糖链延长的甲型副伤寒沙门氏菌及其应用。该方法包括如下步骤：灭活甲型副伤寒沙门氏菌的O抗原链长控制酶基因cld，得到O-抗原链长控制酶基因cld缺陷的甲型副伤寒沙门氏菌；使鼠伤寒沙门氏菌O抗原链长控制...
- 吴军孙鹏刘波唱韶红巩新王恒樑朱力潘超冯尔玲
- 大肠杆菌N~α-乙酰基转移酶RimI对人胸腺素α原N末端乙酰化修饰的影响
- 2011年
- 目的:研究大肠杆菌Nα-乙酰基转移酶RimI对人胸腺素α原(ProTα)N末端乙酰化修饰的影响。方法:在大肠杆菌中共表达ProTα与大肠杆菌Nα-乙酰基转移酶RimI,同时设置只表达ProTα的对照菌,分别提取纯化ProTα,利用HPLC检测其发生乙酰化修饰的程度。结果:ProTα的乙酰化修饰发生在翻译后水平,有无RimI的过表达、诱导时间的长短以及这两个因素之间的交叉效应均对ProTα的乙酰化程度有影响,其F值分别为53.8、89.22及16.28,P值均小于0.0001;无论有无RimI过表达,乙酰化的ProTα所占比例在诱导6 h后逐渐升高(P<0.0001);在过表达Ri-mI的菌株中,乙酰化的ProTα在诱导12 h后占37.4%,而在无RimI过表达的菌株中占64.3%;RimI对ProTα乙酰化的抑制作用从诱导6 h后开始显现(P=0.0007)。结论:在大肠杆菌中,过量的Nα-乙酰基转移酶RimI可抑制人胸腺素α原的乙酰化修饰。
- 孙鹏巩新唱韶红马清钧吴军刘波
- 关键词：大肠杆菌
- 病原菌多糖基因簇在大肠杆菌中的克隆
- 2014年
- 目的：构建稳定的外源病原菌多糖基因簇克隆载体，为在糖基工程大肠杆菌中利用外源性多糖O-糖基化修饰靶标蛋白奠定基础。方法：PCR扩增大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973和铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇，将多糖基因簇与细菌人工染色体pCC1BAC连接后，分别转化O-多糖合成缺陷的大肠杆菌W3110，并用相应多糖抗血清ELISA检测重组大肠杆菌是否利用外源O-多糖生成脂多糖（LPS），从而验证外源多糖基因簇克隆载体在大肠杆菌内是否能够生成相应的O-多糖；在此基础上，将构建的3种外源多糖基因簇克隆载体分别转化表达O-寡糖转移酶和蛋白底物菌毛蛋白PilE的糖基工程大肠杆菌，用相应的抗血清进行Western印迹检测，以验证克隆的O-多糖能否修饰蛋白底物PilE。结果：与阴性对照菌相比，带有大肠杆菌O157的O-多糖合成基因簇克隆载体和带有甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌ELISA呈阳性，提示大肠杆菌O157和甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇在大肠杆菌中被利用生成了相应的LPS；而带有铜绿假单胞杆菌CMCC10110的O-多糖合成基因簇克隆载体的重组菌W3110/BAC-10110则ELISA呈阴性。West？ern印迹结果显示，只有带有O157型大肠杆菌O-多糖合成基因簇克隆载体的糖基工程大肠杆菌CLM24/pMMB66EH-pilE-his/pETtac28-pglL/BAC-O157在相对分子质量40×103~58×103处出现了特异条带，表明菌毛蛋白PilE被大肠杆菌O157型O-多糖O-糖基化修饰。结论：建立了大肠杆菌O157、甲型副伤寒沙门菌CMCC50973的O-多糖合成基因簇大片段的克隆载体，克隆的O157型O-多糖合成基因簇可实现O157型多糖对菌毛蛋白PilE的修饰，从而为在大肠杆菌中建立稳定的利用外源病原菌多糖修饰靶标蛋白的糖基工程大肠杆菌提供了技术基础。
- 王雯孙鹏徐敏锐徐威吴军
- 关键词：细菌人工染色体
