- siRNA干扰技术联合高压氧对大鼠脑出血后脑水肿及凋亡的影响被引量：4
- 2017年
- 目的观察靶向水通道蛋白4（AQP4）的小RNA（siRNA）干扰技术联合高压氧对实验大鼠脑出血后脑水肿及凋亡的影响。方法将大鼠随机分为对照组、高压氧组、AQP-4 siRNA组及联合治疗组，每组24只；凝血酶Ⅶ注射诱发尾状核建立脑出血模型，构建沉默AQP-4 mRNA表达的siRNA质粒；提取第3天脑组织总RNA和总蛋白，用RT—PCR法检测AQP-4的mRNA表达水平；于湿比重法和Evans蓝法测定脑组织含水量及血脑屏障通透性改变；AnnexinV及TUNEL法检测脑细胞凋亡率，Western blot法检测AQP-4、基质金属蛋白2、9（MMP-2、MMP-9），B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bcl-2），半胱天冬酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平；第3天给予实验动物神经功能缺陷评分（mNSS）。结果AQP-4 siRNA减轻脑出血后脑水肿及沉默AQP-4方面优于高压氧（P〈0．05），二者联合应用在脑出血后降低脑水肿程度方面获最佳效果（P〈0．05）；与对照组比较各组均抑制神经细胞凋亡，以联合组（4．24±0．04）％最明显（F=13．76，P=0．001）；高压氧联合AQP-4 siRNA能降低AQP-4，MMP2、MMP-9，Caspase-3表达（P〈0．05），而增加Bcl-2表达（P〈0．01）。神经功能缺陷评分较对照组均有改善（P〈0．05），以联合组（4．7±1．1）分最理想（F=7．21，P=0．013）。结论靶向siRNA干扰技术联合高压氧可有效减轻脑出血后脑水肿并抑制神经细胞凋亡，促进神经功能恢复，其机制可能与减少AQP-4，MMP-2、MMP-9，caspase-3表达，增加Bcl-2表达有关。
- 潘强朱琳张帅李普贤刁兴涛宋纯玉高勇司锋李强岳晓
- 关键词：脑出血RNA干扰高压氧水通道蛋白-4
- 2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮改变替莫唑胺耐药细胞系耐药特性的体外研究被引量：3
- 2016年
- 目的 观察应用2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮（LY294002）对替莫唑胺耐药胶质瘤细胞株U251/TR细胞增殖、侵袭及耐药性影响,并探讨其机制.方法 应用LY294002作用于细胞株U251/TR细胞,通过噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Transwell法检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞周期,膜联蛋白V（Annexin V）法及原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡.Western blot法检测磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、核因子-κB（NF-κB）、B淋巴细胞瘤/白血病-2（bcl-2）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）、细胞周期素D1（Cyclin D1）等磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3 K/Akt）信号通路相关蛋白及O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）蛋白的表达.结果 LY294002组与空白对照组和二甲基亚砜（DMSO）组相比自培养第2天起细胞生存率明显下降（P＜0.05）.LY294002组Transwell穿过细胞数[（43.60±1.54）个]较空白对照组[（81.90±1.64）个]、DMSO组[（82.10±1.07）个]明显减少（P＜0.05）.LY294002组细胞周期被明显阻滞在G0/G1期（67.44％）,S期（30.56％）明显减少（P＜0.05）,细胞凋亡率明显增加（36.05±1.99）％ （P ＜0.05）.Western blot结果显示LY294002组能有效抑制p-Akt、MMP-2、MGMT、NF-κB、bcl-2及Cyclin D1蛋白的表达,而上调Caspase-3表达（P＜0.05）.结论 靶向PI3K/Akt信号通路的LY294002显著抑制了U251/TR细胞的增殖、侵袭,并促进细胞的凋亡,其机制可能与LY294002下调了PI3K/Akt信号通路中相关蛋白及MGMT蛋白的表达有关。
- 潘强朱琳刁兴涛宋纯玉刘秀云刘振瑞岳晓
- LY294002联合Ad-PTEN对肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的治疗作用
- 2014年
- 目的观察PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)抑制剂2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)联合Ad-PTEN(含PTEN基因的重组腺病毒)对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用,初步探讨其可能的作用机制,为临床有效治疗肺癌脑转移提供实验资料。方法将实验裸鼠24只随机分为4组,即DMSO对照组、空载病毒组、LY294002治疗组及LY294002与Ad-PTEN联合治疗组。肿瘤组织块直接皮下种植法建立肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,定期测量动物体重及肿瘤直径;应用Western blotting法检测肿瘤细胞的PTEN、p-Akt、PI3K、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2、9、p-FAK的表达水平;结果 LY294002与Ad-PTEN联合治疗组对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤抑制作用较对照组及LY294002治疗组均明显增强(均P<0.01);与对照组及LY294002治疗组比较联合治疗组Caspase-3、PTEN表达显著升高(均P<0.05),PI3K、p-Akt、CyclinD1、MMP2、9、p-FAK、Bcl-2的表达均显著下降(均P<0.05)。结论 LY294002与Ad-PTEN联合治疗可以显著提高对人肺腺癌脑转移裸鼠移植瘤的抑制作用。其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路下游蛋白有关。
- 潘强王泉相宋纯玉朱琳岳晓司锋高勇
- 关键词：脑转移PI3K抑制剂PTEN基因
