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小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体的表达及活性检测: 2015年; 目的构建小鼠AChR(m97-116)肽段-CD205融合单链抗体原核表达载体,表达融合单链抗体(m97-116-scFv205),检测其对未成熟树突状细胞(iDC)的亲和力,为通过iDC诱导AChR特异性免疫耐受提供实验基础。方法分离培养小鼠原代骨髓祖细胞,经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)10ng/mL和白细胞介素4(IL-4)10ng/mL刺激培养,经脂多糖(LPS)1ng/mL诱导24h后,高倍显微镜及扫描电镜观察细胞形态;流式细胞术(FCM)检测细胞表面相关分子表达,对iDC表型进行鉴定;构建原核表达载体m97-116-scFv205-pET22b(+),0.1 mmol/mL异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)18℃诱导表达18h,镍(Ni)柱纯化,SDSPAGE和Western blot检测融合单链抗体m97-116-scFv205表达及纯化;FCM检测其与iDC的亲和力。结果形态学观察提示培养细胞为DC,FCM结果显示培养细胞符合iDC表型;SDS-PAGE和Western blot在上清中检测到m97-116-scFv205可溶性表达;亲和力检测显示m97-116-scFv205与iDC具有较高亲和力。结论成功构建并表达m97-116-scFv205融合单链抗体,该抗体与iDC具有较高的亲和力,为下一步靶向iDC诱导AChR特异性免疫耐受治疗重症肌无力奠定了良好的实验基础。; 孙超袁媛郑鹏飞高星赵元琳李乐常婷李柱一; 关键词：重症肌无力未成熟树突状细胞

膜性肾病小鼠模型的建立与鉴定被引量：6: 2013年; 目的建立小鼠膜性肾病模型。方法取6周龄健康雄性BALB/c小鼠20只,分为对照组和模型组。模型组小鼠皮下注射0.2 mg阳离子牛血清白蛋白(C-BSA)和等体积的完全弗氏佐剂,对照组皮下注射生理盐水和完全弗氏佐剂。2周后,模型组小鼠尾静脉注射阳离子牛血清白蛋白,每周3次,隔日注射,对照组使用生理盐水代替。模型的鉴定则采用血液生化检查和病理检查(PASM染色、IgG免疫荧光染色、透射电镜)等方法。结果 8周后12只模型组小鼠出现高蛋白尿、低蛋白血症和高胆固醇血症;PASM染色显示出类似于早期膜性肾病,IgG免疫荧光染色显示出沿毛细血管壁呈颗粒状物沉积,透射电镜下有足突的广泛融合。结论 C-BSA尾静脉注射小鼠可成功构建小鼠膜性肾病模型。; 王慧王净李静李乐袁媛王超叶菁李青; 关键词：膜性肾病动物模型小鼠

白藜芦醇对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响被引量：3: 2012年; 目的:探讨不同浓度白藜芦醇(Res)对小鼠原代肝细胞脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达水平的影响。方法:采用胶原酶灌注方法,分离培养小鼠原代肝细胞;利用200μmol/L油酸(OA)刺激小鼠原代肝细胞12 h后,加入0、20、50、100μmol/L白藜芦醇,培养12 h后,采用Bodipy493/503染色,荧光显微镜观察肝细胞内脂滴的形态和数量;采用Folch法抽提细胞内脂类,采用定量试剂盒测定甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot法分析脂滴表面蛋白perili-pin、adipophilin、TIP-47的表达水平。结果:与空白对照相比,采用20、50、100μmol/L白藜芦醇处理后均能够降低原代肝细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,但以50μmol/L浓度效果最为显著。Western blot结果显示,白藜芦醇能够降低原代肝细胞中perilipin、adipophilin和TIP-47的表达水平,其中以perilipin下降最为明显。结论:白藜芦醇能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,以50μmol/L浓度效果最为显著。可能通过调节细胞内脂滴表面蛋白的表达水平,从而影响脂滴的储积。; 王超袁媛李乐张秀敏李静胡沛臻李增山叶菁; 关键词：白藜芦醇原代肝细胞油酸

原发性肾病综合征高脂血症发生机制的研究进展被引量：15: 2014年; 原发性肾病综合征高脂血症主要表现为血浆总胆固醇(Ch)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-Ch)明显升高,甘油三酯(TG)和极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-Ch)升高。高密度脂蛋白胆固醇(HDL-Ch)浓度可降低或不变,但HDL的亚型分布异常,即HDL3增加而HDL2减少。这提示我们HDL3转变为富含CH的HDL2成熟障碍。不过,关于高脂血症在肾病综合征的发生机制较为复杂,还不十分清楚。但是目前有关该机制的观点主要集中在(1)低白蛋白血症刺激肝脏合成胆固醇、甘油三酯、脂蛋白增加,(2)外周脂蛋白的清除障碍,(3)高密度脂蛋白(HDL)的成熟障碍,本文就此做一综述。; 郑秉暄李金存王慧李乐袁媛; 关键词：肾病综合征高脂血症

重组人神经生长因子rh-β-NGF真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达被引量：3: 2015年; 为大量制备β-NGF,构建了一种稳定、高效表达重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rh-β-NGF)的真核表达载体及含该重组载体的HEK293细胞株。首先,构建重组质粒p CMV-β-NGF-IRES-dhfr并转染至HEK293细胞系,用MTX加压筛选和有限稀释法进行选择,获得高效表达rh-β-NGF的单克隆重组细胞株;随后逐步降低血清培养,最终使细胞株完全适应无血清培养基并稳定表达rh-β-NGF;SDS-PAGE分析该表达产物,可见相对分子质量约13 k Da的条带,纯度大于50%,经质谱法测定得到其肽图谱与理论序列完全匹配,接着利用离子交换层析和分子筛层析纯化rh-β-NGF;最后进行重组细胞株表达效率和表达稳定性检测,表明重组细胞株可稳定、高效表达rh-β-NGF,其分泌效率大于20 pg/(cell?d),并能诱导PC12细胞的分化,具有良好的生物学活性。; 李景传薛博夫袁媛马墨朱林Rebecca Milburn李乐胡沛臻叶菁; 关键词：神经生长因子真核载体 HEK293细胞活性鉴定

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李乐