牟东珍
- 作品数：42 被引量：53H指数：4
- 供职机构：潍坊医学院临床医学院免疫学教研室更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)原核表达及初步应用
- 2009年
- 目的:克隆人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)基因并构建原核表达载体,用纯化的重组蛋白进行系统性硬化症(SSc)体外诊断应用研究。方法:从体外培养的HeLa细胞中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hnRNP I基因,构建原核表达载体pET-30a-hnRNP I,在原核表达系统E.coliBL21(DE3)中表达重组蛋白。重组蛋白纯化后作为抗原对包括系统性硬化症(SSc)、系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、混合型结缔组织病(MCTD)、未分化型结缔组织病(UCTD)、类风湿性关节炎(RA)、正常对照(control)在内的血清相应抗体进行ELISA检测。结果:成功构建了原核表达载体pET-30a-hnRNPI,在IPTG诱导下在E.coli BL21(DE3)中高效表达相对分子质量(Mr)为59600的重组hnRNP I蛋白,重组蛋白可以可溶蛋白和包涵体蛋白两种形式存在。hnRNP I蛋白抗体在SSc中阳性率(48.72%)明显高于其他各组(P<0.05)。结论:利用构建的原核表达载体成功表达出hnRNP I蛋白,此重组蛋白可用于SSc的临床诊断检测。
- 孙成涛冯帆王蕾刘培红牟东珍鞠吉雨
- 关键词：原核表达系统性硬化症
- 小鼠OX40原核表达载体的构建及表达
- 目的:构建小鼠OX40胞外段基因的原核表达载体,并进行初步诱导表达,为下一步蛋白纯化、单克隆抗体制备和进行与OX40／OX40L相关疾病的横向研究打下良好的基础。方法:①根据GenBank中登录的小鼠OX40 cDNA全...
- 林志娟冯永堂牟东珍苗乃法梁淑娟邸大琳吴国庆王丽娜魏兵杜雪梅
- 关键词：OX40原核表达融合蛋白
- 文献传递
- 小鼠HBsAg免疫耐受模型的建立及OX40L基因转染对其耐受的影响
- 目的:构建小鼠HBsAg免疫耐受动物模型并进行初步鉴定,将OX40L转染巨噬细胞并输入模型鼠体内,观察小鼠免疫状态的变化,探讨OX40L作为协同刺激分子对免疫耐受的影响。方法:取Babl／c新生乳鼠并随机分为三组,一组注...
- 许传武冯永堂牟东珍苗乃法梁淑娟邸大琳吴国庆魏兵王丽娜
- 关键词：免疫耐受动物模型HBSAGOX40L基因转染
- 文献传递
- 生物技术专业免疫学实验课教学改革的初步实践被引量：2
- 2009年
- 实验课是医学免疫学的重要部分,为了提高生物技术专业实验课的教学质量,适应社会需求,我们结合近几年来的实践教学经验,对免疫学实验课程体系进行了尝试性的改革,取得了较好的教学效果。
- 孙萍马晓君牟东珍梁淑娟
- 关键词：免疫学实验课教学改革
- 人异质性胞核核糖核蛋白Ⅰ原核表达载体构建、表达及初步应用
- 研究背景:系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)是一类以皮肤炎症、变硬、增厚和纤维化进而硬化和萎缩为特征的多系统损害的结缔组织病,其病因尚不明确。最近研究发现hnRNP家族的新成员hnRNPI(Mr...
- 孙成涛冯帆王蕾刘培红牟东珍鞠吉雨
- 文献传递
- IL-1β反义RNA在HepG2细胞的表达及对NK细胞杀伤活性的影响
- 2007年
- 目的:构建IL-1β反义RNA真核表达载体,转染HepG2细胞,探讨阻断IL-1β作用后对其NK细胞杀伤敏感性的作用。方法:RT-PCR方法扩增两段基因序列IL-1β1(17-331,315bp)和IL-1β2(246-505,260bp),经T-A克隆后构建反义RNA表达载体pcDNA3.0-antiIL1β1和pcDNA3.0-anti-IL1β2。采用阳离子聚合物(jetPEI)的方法转染HepG2肝癌细胞,RT-PCR方法检测反义RNA的表达水平,胞内因子染色的方法分析IL-1的表达水平,MTT方法分析NK-92细胞对HepG2杀伤活性的变化。结果:以LPS刺激的人PBMC总RNA为模板,RT-PCR扩增得到两个约315bp和260bp的基因片段,先构建克隆载体pMD18T-IL-1β1和pMD18T-IL-1β2,质粒PCR、XhoI酶切和DNA序列分析正确后,利用PfuDNA聚合酶进行PCR,产物纯化后经EcoRI、XhoI双酶切,反向插入pcDNA3.0,获得人IL-1β反义RNA真核表达载体pcDNA3.0-antiIL-1β1和pcDNA3.0-antiIL-1β2。PCR、PstI酶切和DNA序列分析正确后,将其分别转染HepG2细胞,RT-PCR检测显示HepG2细胞能够高水平表达两种反义RNA,胞内因子染色发现IL-1β的表达水平明显下降,同时该细胞对NK-92杀伤的敏感性明显升高,其中IL-1β1反义RNA的作用更为显著,效靶比10∶1时,NK细胞对HepG2的杀伤活性提高了约20%。结论:以促炎性细胞因子IL-1β为靶点进行干预,能够有效地下调肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗能力。
- 梁淑娟肖伟玲牟东珍吴慧娜王雪净
- 关键词：IL-1Β反义RNANK细胞天然免疫
- 肝癌组织特异性P_(afp)IRES2-EGFP表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建AFP最小启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体,观察其在小鼠H22肝癌细胞中的特异性表达。方法从H22细胞总DNA和荧光载体pIRES2-EGFP中分别PCR扩增AFP最小启动子区序列和CMV增强子(ECMV),利用重叠延伸PCR方法(SOE)获得AFP启动子驱动的嵌合调控序列,将其克隆入pIRES2-EGFP载体,进行菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列测定。通过jetPEI方法转染H22肝癌细胞和YAC1淋巴瘤细胞,荧光显微镜下观察其表达的组织特异性。结果从小鼠H22细胞DNA和pIRES2-EGFP中分别扩增得到229bp和324bp的片段,纯化后的PCR产物通过SOE扩增得到一537bp的条带,均与预期序列长度一致。SOE产物与pIRES2-EGFP连接,菌落PCR鉴定获得数个阳性克隆,质粒经Nde I+NheⅠ限制性酶谱分析酶解出537bp条带,DNA序列分析证实重组载体中的嵌合DNA与GeneBank中小鼠AFP启动子和ECMV序列完全一致。结论本研究成功构建了AFP启动子调控的小鼠肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达外源基因。
- 牟东珍梁淑娟刘艳艳王雪净吴慧娜李若葆
- 关键词：肝癌组织特异性表达AFP启动子
- PBL教学法在医学留学生免疫学教学中的应用被引量：4
- 2016年
- 目的:探讨PBL教学法在医学留学生免疫学中的应用效果。方法:教学对象随机分为2组,分别接受PBL教学和传统的授课方式。授课结束后比较两组学员免疫学实验课成绩与理论课成绩。结果:PBL组实验课成绩与理论课成绩均优于对照组(27.1±0.4vs23.8±0.7;60.1±1.1vs56.2±0.8),差异具有显著性(P<0.05)。结论:PBL教学法能有效提高医学留学生的免疫学授课效果。
- 邸大琳秦浩牟东珍孙萍魏兵王丽娜鞠吉雨
- 关键词：PBL教学法医学留学生免疫学
- IL-1β对RAW264.7细胞表达IL-4mRNA,GATA-3mRNA的影响被引量：1
- 2011年
- 目的 探讨IL-1β对RAW264.7细胞表达IL-4,GATA-3mRNA的影响.方法 常规培养RAW264.7细胞后进行干预,A组：IL-1β（0mg/L,1mg/L,10mg/L,20mg/L）刺激细胞1h,B组：IL-1β（10mg/L）刺激0h,30min,1h,3h,6h,C组：IL-1β（10mg/L）刺激0h,30min,1h,1.5h,2h,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测IL-4,GATA-3mRNA的表达.结果 IL-Iβ刺激RAW264.7细胞不同浓度、不同时间与空白对照组比较IL-4,GATA-3mRNA的表达增高（P＜0.05）;IL-1β（10mg/L）刺激RAW264.7细胞1h时,IL-4mRNA的表达量最高,1.5h时GATA-3mRNA的表达量最高.结论 IL-1β在RAW264.7细胞中促进IL-4,GATA-3mRNA的表达呈浓度、时间依赖性,提示IL-1β通过促进单核巨噬细胞分泌IL-4,GATA-3,诱导Th2型细胞分化,促进和加重哮喘的慢性炎症.
- 庄伟牟东珍林志娟孙萍祝仁军梁淑娟
- 关键词：IL-1ΒGATA-3RAW264.7细胞
- 卵白蛋白诱导的急性过敏性腹泻小鼠结肠组织的病理学特征
- 2011年
- 目的 建立急性过敏性腹泻模型,观察结肠组织的病理学特征.方法 5～6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组;用卵白蛋白（OVA）和完全弗氏佐剂对实验组小鼠隔1周2次腋窝皮下预致敏,第2次致敏1周后2组小鼠均每隔1d给予等量溶解在灭菌PBS的OVA灌胃;于第10次灌胃后处死小鼠,取血分离血清测OVA-IgE,取结肠近端组织行HE染色观察肠组织病理改变并在油镜下计数嗜酸性粒细胞.结果 与对照组相比,实验组小鼠结肠黏膜充血水肿,上皮排列不规则,腺区有大量炎细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞,血清OVA-IgE水平显著升高.结论 OVA 可诱导过敏性腹泻炎症,结肠黏膜组织以充血水肿和大量嗜酸性粒细胞浸润为特征.
- 徐灵芝冯永堂杨京玉邸大林牟东珍苗乃法王丽娜孙萍
- 关键词：卵白蛋白嗜酸性粒细胞
