王富敏
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：山东省立医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 心理因素对突发性耳聋伴失眠患者影响的相关性研究
- 刘振华王富敏汤明璐赵永俊王小婷
- 应用SOEing方法构建SOD1-G93A的真核表达载体被引量：1
- 2013年
- 目的构建铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn superoxide dismutase,SOD1)-G93A的真核表达载体。方法应用重叠区扩增基因拼接法(SOEing)分别扩增前段M1基因与包含突变位点的后段M2基因,然后将2段基因拼接起来,得到SOD1-G93A基因,并克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体上。结果成功扩增出SOD1-G93A基因,测序结果与GenBank完全一致;对重组质粒SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)进行双酶切鉴定,测序结果与预期完全一致。结论成功构建了SOD1-G93A-pcDNA3.1(-)真核表达载体。
- 陆玉成车峰远苏全平尤翠平王龙王富敏于继徐
- 关键词：点突变肌萎缩侧索硬化重叠区扩增基因拼接法
- Nrf2-ARE信号通路与肌萎缩侧索硬化的研究进展被引量：1
- 2014年
- 目前全世界肌萎缩侧索硬化(ALS)发病率约为(4～6)/100 000,临床主要表现为缓慢起病、进行性发展的肌肉无力、肌萎缩、肌束震颤、腱反射亢进和病理征阳性。患者一般多于发病3～5年后因呼吸肌麻痹、呼吸衰竭而死亡,只有10%的患者生存期超过10年〔1〕,目前暂无特效治疗办法〔2,3〕。根据其发病形式,可分为散发性ALS(sALS)和家族性ALS(fALS)。
- 王富敏于继徐车峰远
- 关键词：肌萎缩侧索硬化氧化应激
- 转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞内铁代谢相关蛋白表达的影响
- 2015年
- 目的探讨转染hSODl．G93A对NSC-34细胞内铁代谢相关蛋白表达的影响。方法常规体外培养未转染、转染pcDNA3．1（-）、hSODl-pcDNA3．1（-）和hSODl-G93A—pcDNA3．1（-）质粒的NSC-34细胞系；分为正常组、空转组、野生组和突变组。利用免疫组化染色法观察各组细胞的形态变化；通过检测丙二醛（MDA）含量观察各组细胞氧化应激水平；用逆转录聚合酶链式反应rRT．PCR）和Westernblotting分别检测各组细胞内铁代谢相关蛋白的基因和蛋白表达水平。结果突变组的细胞胞体变圆，突起减少、变短，细胞内MDA含量明显高于其他3组细胞，差异有统计学意义（P〈0．05）；各组细胞内的转铁蛋白受体（TfR）、二价金属离子转运体1（DMTI）、铁蛋白等基因在基因水平上表达差异无统计学意3L（P〈0．05）；各组细胞内的TfR、DMTl、铁蛋白等在蛋白水平上表达差异无统计学意义（胗O．05），但是突变组细胞铁蛋白表达较正常组细胞明显升高，差异有统计学意义（P，0．051。结论转染hSOD1-G93A对NSC-34细胞（突变组）内TfR、DMTl表达无明显影响．但可以使细胞内铁蛋白在蛋白表达水平明显升高。
- 王寿刚陆玉成黄丽梅尤翠平王龙王富敏苏全平于继徐车峰远
- 关键词：肌萎缩侧索硬化转铁蛋白受体
- 人SOD1-G93A对NSC-34细胞内Nrf2/ARE信号通路的影响
- 铜/锌超氧化物歧化酶(SOD1)突变是引起致死性神经变性疾病肌萎缩侧索硬化(ALS)的原因之一。研究发现在SOD1突变的病人及动物模型体内存在氧化应激增多的证据。Nrf2/ARE信号通路是机体对抗氧化应激的一个最主要的细...
- 王富敏于继徐车峰远蒋建章
- 文献传递
- G93A突变的hSOD1基因对Nrf2/ARE信号通路的影响
- 2015年
- 目的:探讨G93A突变的hSOD1(human Cu/Zn superoxide dismutase)基因在肌萎缩侧索硬化转基因细胞模型NSC-34细胞中对Nrf2/ARE信号通路的影响。方法:将构建好的质粒hSOD1-pcDNA3.1(-)、hSOD1-G93A-pcDNA3.1(-)和pcDNA3.1(-)转染至肌萎缩侧索硬化转基因细胞模型NSC-34细胞内,根据转染质粒的不同分为4组:正常组、空转组、野生组和突变组。通过检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量来判断细胞氧化损伤的程度;检测线粒体膜通透性;通过Western blotting检测细胞中Nrf2、抗氧化酶的蛋白表达水平,以反映Nrf2/ARE信号通路在各组的活化程度。结果:转染hSOD1-G93A-pcDNA3.1(-)的NSC-34细胞(突变组)内氧化应激水平增高,同时线粒体通透性增加,提示线粒体受损伤;且Nrf2以及Nrf2/ARE信号通路下游效应分子血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶-1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。突变组细胞胞浆中Nrf2表达明显减少(P<0.05),而突变组和野生组细胞核中Nrf2增多,突变组细胞更为显著(P<0.05)。结论:hSOD1基因的G93A突变使细胞Nrf2/ARE信号通路受损,降低了细胞的抗氧化能力,加重了线粒体损伤。
- 亓法英王富敏于继徐车峰远赵孔波
- 关键词：肌萎缩侧索硬化
