王松豪
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划甘肃省高层次人才科技创新创业扶持行动项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 新型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株全长cDNA克隆的构建与分析
- 2013年
- 为了获得高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)弱毒株的全基因组序列和病毒基因组全长cDNA克隆,根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株(EF635006)和经典CH-1a株(AY032626)全基因组序列设计并合成特异引物,进而用RT-PCR分6段扩增了HP-PRRSV弱毒株的全基因组。将扩增的各个cDNA重叠片段分别克隆到pMD20-T载体中,建立了PRRSV弱毒株的初级cDNA克隆,并对基因组cDNA序列进行了测定。根据测序结果,选择特异的酶切位点,将各个亚克隆产物逐段亚克隆入经过改造的低拷贝pOK12载体中,通过引入MluⅠ和EcoRⅠ酶切位点将聚合酶Ⅱ、Ⅰ和T7启动子序列及榔头锤酶基因置于病毒基因组的5′端,引入NotⅠ和FseⅠ将聚合酶Ⅱ、Ⅰ终止子序列及戊型肝炎病毒核酶基因置于病毒基因组的3′端,结果得到了病毒基因组全长cDNA克隆ppAPRRSVOK12。测序结果表明,该毒株基因组全长15 319bp[不包括poly(A)尾];全基因序列比对结果显示,该毒株属于北美洲型毒株,与HuN4的同源性高达99.5%。测序及酶切鉴定结果证实,HP-PRRSV弱毒株基因组全长cDNA克隆已构建成功。
- 王松豪郑海学杨帆曹伟军刘芳张艳刘华南郭建宏
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆
- 猪流行性腹泻病毒N基因的原核表达与鉴定被引量：1
- 2013年
- 为了克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因,根据GenBank中登录的PEDV(CV777株)的N基因序列设计1对特异引物,提取阳性临床样品的总RNA,通过RT-PCR方法获得PEDV的N基因。将N基因定向克隆至表达载体pET-28a-His-Sumo中,酶切和测序鉴定表明获得了阳性重组表达质粒pET-28a-His-Sumo-N。将阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,并进行IPTG诱导表达,用SDSPAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析。SDS-PAGE检测结果表明获得了60.0ku的表达产物,与目的蛋白大小符合;Western-blot结果显示,纯化后的目的蛋白能与PEDV阳性血清发生特异反应。表明成功对PEDV-N蛋白进行了原核表达,且纯化后的蛋白质具有良好的反应原性。
- 刘华南曹伟军杨帆张艳杨华王松豪郑海学
- 关键词：猪流行性腹泻病毒N基因原核表达纯化
- Asia 1型口蹄疫病毒抗原表位突变株的构建及其生物学特性分析
- 2015年
- 为了研制口蹄疫抗原表位突变标记疫苗,本研究以含有Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)c DNA全长的感染性克隆p Asia 1-FMDV作为骨架,将3D蛋白中第27位氨基酸的H和31位的氨基酸N分别突变成Y和R,从而突变3D蛋白的一个抗原表位,将构建的带有突变表位的重组质粒转染BHK-21细胞,成功拯救出一株突变FMDV。经比较后发现,重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。病毒中和试验结果显示,抗重组病毒的血清与亲本病毒有良好的反应性。Western blotting结果表明重组病毒诱导的抗体能与突变的表位合成肽反应而不与野生型病毒的表位合成肽发生反应,从而区分重组病毒与亲本病毒。综上所述,这株抗原表位突变FMDV有望作为口蹄疫标记疫苗候株进一步评估。
- 张岩胡永浩杨帆杨波王松豪朱紫祥郑海学
- 关键词：口蹄疫病毒
- 口蹄疫反向疫苗研究进展
- 利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰,可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良,能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株,进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负...
- 杨波杨帆王松豪张岩曹伟军郑海学
- 关键词：口蹄疫标记疫苗
- 口蹄疫反向疫苗研究进展
- 利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰，可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良，能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株，进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负...
- 杨波杨帆王松豪张岩曹伟军郑海学
- 关键词：口蹄疫标记疫苗
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒体内拯救系统的建立
- 猪繁殖与呼吸综合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）俗称猪“蓝耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus, PRRSV）引起的以怀孕母猪繁殖障碍...
- 王松豪
- 关键词：感染性分子克隆细胞系
- 文献传递
- 口蹄疫反向疫苗研究进展被引量：1
- 2014年
- 利用反向遗传技术对口蹄疫病毒基因的改造和修饰,可以实现对疫苗种毒的生产性能、抗原匹配性、抗原稳定性、免疫应答能力、生物安全性等特征的改良,能够迅速获得预期生物学特性的疫苗候选株,进而可以减少和避免流行毒株驯化环节带来的负面影响。不仅改变了对流行毒株筛选驯化受病毒自然属性制约、费时费力、成功率低的缺陷,而且可以实现更为主动有效的疫苗毒株的设计,对整体提升疫苗品质和效力具有重大意义。本文以口蹄疫病毒为例,从改良疫苗毒株的生物学特性方面进行了综述,为相关研究提供参考和借鉴。
- 杨波杨帆王松豪张岩曹伟军殷宏郑海学
- 关键词：口蹄疫标记疫苗
- 组氨酸标签标记的口蹄疫重组病毒的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 为了鉴定口蹄疫病毒(FMDV)插入位点并获得标记的重组病毒,本研究利用口蹄疫病毒反向遗传操作技术,在RGD基序后第9位和第10位氨基酸处(+9)引入组氨酸(His)标签,获得了含有His标签的FMDV全长cDNA克隆(命名为prAsia1-9His)。将prAsia1-9His质粒转染BHK-21细胞后,能够出现典型的细胞病变,对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光进行鉴定,结果证实,成功拯救了含His标签的重组病毒(命名为rAsia1-9His),该重组毒株能够稳定表达His标签。最后,比较测定了其对BHK-21细胞和乳鼠的致病性,结果表明,该重组毒株与亲本毒株(rAsia1)具有相似的生物学特性。含有标签标记的口蹄疫病毒的成功拯救,为深入研究口蹄疫病毒的致病机制以及分子标记疫苗奠定了基础。
- 杨波杨帆王松豪张岩岳城郑海学殷宏
- 关键词：口蹄疫标签标记疫苗
