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王玺: 作品数：12 被引量：55H指数：5; 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划甘肃省科技攻关计划国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生理学化学工程更多>>

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多糖-蛋白结合疫苗的结合化学与检测方法被引量：10: 2008年; 多糖-蛋白结合疫苗是用化学方法将多糖抗原与载体蛋白共价结合,从而实现多糖抗原类型的转变;随着合成化学应用的日趋成熟,多种结合方法已被用于多糖-蛋白的结合,而且这些方法克服了最初无序接合反应的多种缺点,与此同时,也有多种新的检测方法应用于结合疫苗的纯化与分析。本文对结合疫苗的结合方法、分离纯化及检测方法作一综述。; 王玺沈荣; 关键词：结合疫苗纯化

18～60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平调查被引量：2: 2016年; 目的了解18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平,为肺炎链球菌性疾病的预防与控制提供参考依据。方法选取甘肃、宁夏健康献浆员为调查对象,分为18~30、31~40、41~50、51~60岁4个年龄组,共调查347人。采用WHO推荐的标准化酶联免疫吸附试验检测12种肺炎链球菌血清型IgG抗体水平,并计算IgG抗体阳性率和几何平均浓度（Geometric mean concentration,GMC）。结果质控血清QC907的IgG抗体浓度均值与参考值之间的误差百分数均未超过±40%,测定值符合其参考值范围,各血清型抗体浓度检测结果的CV均〈30%。347份血清样品肺炎链球菌IgG抗体总阳性率为64.8%~96.0%,GMC为0.37~2.24μg/m L。不同血清型间IgG抗体GMC差异具有统计学意义（P〈0.05）。不同年龄组同种血清型IgG抗体阳性率及GMC均无统计学意义（P〉0.05）。除19F型外,不同地区同种血清型IgG抗体阳性率均有统计学意义（P〈0.05）;除4、7F、14和18C型外,不同地区同种血清型IgG抗体GMC间差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平普遍较高,对肺炎链球菌主要流行血清型均具有一定的保护力。; 张轶熊明郁张新庄任珍芸刘倩张丽芝任克明王玺陈晓航王剑虹沈荣; 关键词：肺炎链球菌抗体水平酶联免疫吸附试验

响应面法优化14型肺炎链球菌荚膜多糖的超滤工艺被引量：1: 2013年; 目的利用响应面法优化14型肺炎链球菌荚膜多糖的超滤工艺。方法选择跨膜压力、切向流量及多糖浓度为自变量,膜包处理能力为响应值,采用Box-Behnken设计分析各自变量及其交互作用对膜包处理能力的影响;利用Design Expert软件对数据进行回归分析,得到回归方程的预测模型,取3批14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液,对优化的工艺参数进行验证;按照最佳超滤工艺对3批14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液进行等体积透析,确定超滤终点;并对纯化的荚膜多糖进行各项检定。结果优化的14型肺炎链球菌荚膜多糖超滤工艺为:跨膜压力12.8 Psi,切向流量66 L/h,多糖浓度0.86 g/L,最适透析倍数为5倍,在该条件下,膜包处理能力的理论值为91.7 g/(h·m2),实际值为91.9 g/(h·m2)。3批纯化的14型肺炎链球菌荚膜多糖水溶液的多糖组分均符合《欧洲药典》7.0版相关规定,均未检出残余脱氧胆酸钠和乙醇,3批多糖的相对分子质量均大于420 000,抗原性良好,且抗原物质成分无差异。结论响应面法优化的14型肺炎链球菌荚膜多糖超滤工艺显著提高了工作效率,降低了生产成本,为14型肺炎链球菌荚膜多糖的规模化生产提供了实验依据。; 任克明张轶王剑虹王玺白贵杰沈荣; 关键词：肺炎链球菌多糖超滤响应面

核磁共振氢谱分析法在肺炎球菌荚膜多糖疫苗质量控制中的应用被引量：3: 2015年; 目的：将一维核磁共振氢谱（~1H-NMR）法分析应用于肺炎球菌荚膜多糖（Pn Ps）的质量控制。方法：用~1H-NMR法检测供试品Pn Ps,对部分特征信号进行归属,判断供试品化学结构是否与文献公布结果一致。对图谱异常的Pn Ps22F、23F的1H-NMR图谱进一步分析,辨认其水解特征信号。分析样品中是否有C-多糖（3.23ppm）、乙酸盐（1.92ppm）和Tris（3.73 ppm）等残留。结果：~1H-NMR分析结果显示Pn Ps14,6B,1,12F和33F结构与分析文献公布结果一致,样品中均含有少量的C多糖残留。图谱异常的Pn Ps22F和Pn Ps23F分别有部分脱氧乙酰基和部分脱磷酸甘油酯基团。3型中含有Tris残留。结论：1H-NMR检定方法快捷、所需样品量少、结果直观,可用于Pn Ps的质量控制。; 王玺李阿妮张轶张新庄任克明王剑虹沈荣; 关键词：肺炎球菌荚膜多糖核磁共振

2种14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物的制备及免疫原性比较被引量：2: 2016年; 目的:以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)衍生的TT(TTAH)分别作为载体蛋白制备14型肺炎球菌多糖-蛋白结合物,比较2种结合物在小鼠体内的免疫原性。方法:以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作为缩合剂,介导TT与ADH反应,制备TTAH衍生物,2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)法测定TTAH的-AH衍生率;将14型肺炎球菌多糖(PS14)水解并用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶四氟化硼(CDAP)活化后直接与TT或TTAH结合,结合物经Sepharose 4 FF层析柱纯化后收集分配系数(KD)<0.2的样品并除菌过滤作为结合物原液,并对其生化指标、血清学特异性和小鼠免疫原性进行检测。结果:2种结合物原液游离糖含量均在1%以内,多糖回收率分别为PS14-TT:33.80%及PS14-TTAH:29.15%。与A组(多糖组)相比,2种结合物B组(PS14-TT)和C组(PS14-TTAH)能够诱导更高的抗PS14抗体水平(P<0.001)并具有剂次加强效应;与C组相比,B组能够诱导更高的抗PS14抗体水平且差异显著并具有统计学意义(P<0.05);2组结合物免疫3针后C组抗TT抗体水平高于B组,但差异无统计学意义,B组无剂次加强效应,而C组有剂次加强效应。结论:PS14-TT在小鼠体内诱导了较高的抗PS14抗体水平及较低的抗TT抗体水平,是较理想的多糖蛋白结合疫苗。; 刘爱萍任珍芸刘佳王欣茹王玺李阿妮李燕婷胡浩吴兵谢贵林; 关键词：肺炎球菌结合疫苗破伤风类毒素免疫原性

肺炎链球菌荚膜多糖分子大小及分子量分析方法的比较被引量：9: 2015年; 目的 3种方法分析10个血清型肺炎链球菌荚膜多糖（pneumococcal capsular polysaccharides,Pn Ps）样品的分子大小及分子量,并对这3种方法进行比较。方法采用Sepharose CL-4B凝胶排阻层析（SEC）技术检测1型、2型、4型、8型、9N型、12F型、14型、18C型、19A型和23F型Pn Ps各2～3批次样品在色谱柱中的分配系数（KD）和样品组分特征;采用高效凝胶排阻色谱-示差折光检测器（high performance size-exclusion chromatography with refractive index,HPSEC-RI）法建立Pullulan标准品分子量标准曲线,计算各Pn Ps样品的重均分子量（weight-average molecular weight,Mw）;采用高效凝胶排阻色谱-多角度激光光散射仪/示差折光检测器联用技术（high performance size-exclu-sion chromatography with multi-angle laser light scattering and refractive index,HPSEC-MALLS/RI）检测各Pn Ps样品的Mw、数均分子量（number-average molecular weight,Mn）、多分散水平（Mw/Mn）及均方根旋转半径（root mean square ratio of gyration,Rg）;对HPSEC-RI法和HPSEC-MALLS/RI法检测Pullulan分子量标准品的结果进行比较。结果 SEC技术不同化学方法检测的同批次Pn Ps样品的KD值十分接近,且主峰形态也比较近似,个别批次Pn Ps不同化学方法获得的峰形有差别。经HPSEC-RI检测Pullulan分子量标准品获得的回归方程为y=-0.278 x＋10.13,r2=0.998,各Pn Ps样品的分子量为1.812×105～1.246×106。HPSEC-MALLS/RI联用技术检测的各批Pn Ps样品的Mw分布于9.898×105～1.471×105,Rg为84.9～25.4 nm,同一血清型不同批次样品Rg间的大小关系与其Mw间的大小关系具有较好一致性。结论结合多种方法检测多糖样品的分子大小和分子量,可更客观、全面地了解Pn Ps分子的各种性质。; 张轶张新庄王玺刘倩陈晓航任克明白贵杰王剑虹沈荣; 关键词：分子大小分子量

14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中两种去除蛋白方法的比较被引量：6: 2013年; 目的苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除14型肺炎链球菌荚膜多糖中蛋白质的效果比较。方法将3批次14型肺炎链球菌发酵培养液经超滤、乙醇沉淀等方法初步纯化后,平分成两份,分别采用苯酚抽提法和脱氧胆酸钠沉淀法去除蛋白,通过比较多糖收获量、多糖组分检定结果、多糖分子质量、多糖抗原活性、多糖核磁共振图谱,以此评价这两种蛋白去除方法的效果。结果与苯酚抽提法相比,脱氧胆酸钠沉淀法制备的14型肺炎链球菌纯化荚膜多糖除收获量较高,蛋白和核酸杂质含量较低外,氨基己糖含量、多糖分子质量、抗原活性和多糖核磁共振图谱的检定分析结果无显著性差异(P>0.1)。结论作为14型肺炎链球菌荚膜多糖纯化工艺中的除蛋白方法,脱氧胆酸钠沉淀法优于苯酚抽提法。; 任克明王玺张新庄刘韵乐张轶白贵杰王剑虹沈荣; 关键词：肺炎链球菌苯酚纯化

肺炎链球菌发酵过程中质控方法的应用被引量：1: 2013年; 目的建立肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。方法应用革兰染色镜检与荚膜肿胀试验监测菌种的退化及发酵罐染菌情况,或用于退化菌种的复壮;应用发酵过程中测定培养液光密度(A600)的方法监测发酵状况、确定培养液初始浓度以及收获时间;应用血糖仪测定发酵过程中的葡萄糖含量,保证发酵过程中碳源的及时补充;应用渗透压仪检测发酵过程中培养液渗透压的变化,确定补料策略。结果确立了细菌革兰染色、荚膜肿胀试验、葡萄糖含量、渗透压、光密度(A600)等作为肺炎链球菌发酵过程中的质控方法。结论实验研究中建立的肺炎链球菌发酵过程质控方法能够较好地监测和评价肺炎链球菌的发酵过程。; 张新庄白贵杰张轶熊明郁任克明王玺沈荣; 关键词：肺炎链球菌发酵质控方法

评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验条件的优化被引量：2: 2010年; 目的优化评价肺炎链球菌多糖结合疫苗效力的调理吞噬试验(Opsonophagocytic assay,OPA)的条件。方法参考美国阿拉巴马大学的WHO指定实验室于2007年1月发布的A.02版实验规程,优化OPA的试验条件。分别以抗性和非抗性肺炎链球菌菌株作为靶细菌检测其对应型结合物受试血清的调理吞噬效价后,再与相应的ELISA效价比较,分析二者的相关性。结果 0.8%二甲基甲酰胺(DMF)诱导HL-60细胞分化4d后,细胞表面标志表达量分别为:CD11b和CD35≥55%、CD71≤15%,活细胞比例≥65%;各型肺炎链球菌工作种子批的复活率≥80%;补体的非特异性杀伤率为18%;各血清型均表现出良好的杀菌活性,且OPA法与ELISA法测定的血清抗体效价比较,相关系数和斜率非常接近。结论优化的OPA条件符合该试验要求,可用于肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗的效力评价。; 刘倩陈晓航任克明张轶王玺沈荣; 关键词：肺炎链球菌效力

1H-NMR用于肺炎链球菌荚膜多糖质量控制的尝试被引量：3: 2009年; 纯化的6B、18C血清型肺炎链球菌荚膜多糖用生化试验和免疫学试验检测分析后再用一维氢谱核磁共振波谱(1H-NMR)法分析。生化检测其相应多糖的主要化学基团含量是否合格,免疫学检测旨在了解多糖纯化工艺是否影响了多糖的抗原活性,并间接佐证纯化多糖的生化特性是否正确。在此基础上进行1H-NMR分析,可以对纯化多糖的特性有进一步的了解。结果表明,常规的生化检测试验和免疫学检测试验并联合应用1H-NMR分析法后可更好地控制纯化肺炎链球菌荚膜多糖的质量。; 张萍王剑虹陈晓航王玺刘爱萍沈荣; 关键词：核磁共振波谱

王玺

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