王笑笑
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中国农业科学院院长基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪白介素18基因在BHK细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础.
- 王笑笑宗瑞谦吕转萍窦永喜宋世斌景志忠
- 关键词：转染BHK细胞真核表达
- 猪IL-18在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：4
- 2007年
- 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中扩增出IL-18基因并构建真核融合表达载体pPIC9K-IL-18,电激法转化入毕赤酵母GS115,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,并将表达蛋白用凝胶层析柱纯化后,用MTT法检测其生物学活性。实验结果表明重组的GS115酵母菌株可表达分泌pIL-18,其表达在72h时达高峰,分泌量可达160mg/L,纯化的重组pIL-18蛋白具有显著的促进淋巴细胞增殖的活性,说明本试验已在毕赤酵母中在国内首次成功表达了具有生物学活性的pIL-18。
- 宋世斌景志忠陈国华王笑笑宗瑞谦
- 关键词：毕赤酵母纯化生物活性
- 猪干扰素-γ和白介素-18基因在哺乳动物细胞中的表达与活性分析
- 干扰素-γ（Interferon-γ,IFN-γ）是一种具有广泛抗病毒、抗细胞内寄生菌及寄生虫、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子,在机体免疫系统中发挥重要作用。白介素18（Interleukin-18,IL-18）是一种新...
- 王笑笑
- 关键词：BHK细胞CHO-K1细胞生物活性分析
- 文献传递
- 猪白介素4在CHO-K1细胞中的重组表达及生物学活性分析被引量：2
- 2008年
- 将猪白介素4（Porcine interleukin4，PIL-4）基因亚克隆到真核表达载体pEGFP～N1中，构建重组表达质粒pEGFP—PIL-4，利用脂质体法转染CHO-K1细胞，采用荧光显微镜实时观察、RT—PCR和Western-blot分别检测CHO细胞转录表达目的分子的情况，通过MTT法检测所表达蛋白的生物学活性。结果在将重组质粒转染CHO-K1细胞中24、48h后的均观察到绿色荧光；经G418筛选14～20d后转染的细胞形成了阳性细胞集落，用RT-PCR扩增出约339bp的目的基因片段；经Western—blot检测到约为39000的特异蛋白分子条带，并证明在转染重组质粒的细胞中表达了高生物活性的重组蛋白。
- 陈国华景志忠房永祥王笑笑窦永喜蒙学莲宋世斌
- 关键词：白介素4真核表达CHO细胞生物活性
- 猪带绦虫dUTPase基因真核载体的构建及其在BHK细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 采用PCR技术从重组克隆载体pGEM-dUTPase中扩增出猪带绦虫六钩蚴dUTPase基因,与表达载体pGFP-C1相连接,构建重组表达质粒pGFP-C1-dUTPase,转化大肠埃希菌DH5α,经测序证实,基因序列完全正确。用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR技术确定目的蛋白的表达情况。结果表明,在转染重组质粒48 h后能观察到绿色荧光,表明在BHK细胞中成功地表达了猪带绦虫dUTPase与pGFP-C1的融合蛋白,为下一步重组dUTPase酶活性的研究奠定了基础。
- 张艳乔军才学鹏景志忠骆学农王笑笑
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴DUTPASE重组质粒
- 猪IL-18在毕赤酵母中分泌表达条件的优化被引量：1
- 2008年
- 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0-8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高.
- 宋世斌陈国华王颖王笑笑宗瑞谦景志忠
- 关键词：毕赤酵母摇瓶发酵
