陈永强
- 作品数：20 被引量：94H指数：5
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- 三叶青水提取物对NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响被引量：10
- 2016年
- 目的探讨三叶青水提取物对人NK细胞杀伤胃癌BGC-823细胞的影响及机制。方法采用干细胞生长培养基（SCGM）体外扩增人外周血NK细胞,不同浓度三叶青水提取物作用于NK细胞后,采用CCK8法检测三叶青水提取物对NK细胞增殖率的影响,流式细胞术（FCM）检测NK细胞穿孔素（PFP）、颗粒酶B（Gra B）及CD107a的表达,乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性。结果三叶青水提取物作用人NK细胞48 h后,三叶青水提取物0.0003~78.125μg/ml浓度组的NK细胞增殖明显（P〈0.05）;三叶青水提取物0.305~4.883μg/ml浓度组人NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达高于对照组（P〈0.05）;三叶青水提取物0.305~19.531μg/ml浓度组人NK细胞对胃癌BGC-823细胞杀伤活性较对照组增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论三叶青水提取物能促进NK细胞的增殖,能增强NK细胞对胃癌BGC-823细胞的杀伤活性,这可能与三叶青水提取物上调NK细胞PFP、Gra B及CD107a表达有关。
- 袁雨朱炳喜刘军权周燏吕小婷周忠海陈永强杨阳
- 关键词：NK细胞胃癌BGC-823细胞杀伤活性
- 糖原合酶激酶-3β抑制剂TWS119对γδT细胞增殖及表型的影响被引量：7
- 2015年
- 目的：观察糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶（TWS119）对γδT细胞增殖和表型的影响。方法：从健康人外周血中分离单个核细胞,加入到γδT细胞完全培养基培养,分别于第1天和第8天时,加入TWS119（0~8.0μmol/L）诱导培养。培养到12 d后,用CCK-8法测定γδT细胞增殖能力;用流式细胞术检测γδT细胞纯度、CD45RA和CD62L的表达。结果：TWS119能够活化γδT细胞Wnt/β-catenin信号通路。在第1天加入TWS119诱导培养组中,随着TWS119浓度的增加,γδT细胞表面CD45RA和CD62L的阳性表达率逐渐升高,而对细胞的增殖及纯度呈抑制作用。在第8天加入TWS119诱导培养组中,TWS119能剂量依赖性促进CD62L的表达而对CD45RA表达无影响,同时在一定浓度范围能促进γδT细胞的增殖和提高纯度的作用。结论：TWS119在一定浓度范围内能促进γδT细胞增殖和提高γδT细胞纯度,并能活化γδT细胞Wnt/β-catenin信号通获得CD45RA＋CD62L＋γδT细胞和CD62L＋γδT细胞。
- 陈永强郑璐刘军权吕小婷周燏陈玲徐晶周忠海陈复兴
- 关键词：ΓΔT细胞细胞增殖表型
- TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达
- 2016年
- 目的：研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶（TWS119）促进γδT细胞趋化因子受体CCR5表达的分子机制。方法：用TWS119诱导从健康人外周血中分离培养获得γδT细胞48 h后,用流式细胞仪检测γδT细胞CCR5的表达;Western blot检测GAPDH和p-STAT3的表达。结果：培养10 d后的γδT细胞纯度达到85.79%±5.01%。TWS119浓度在0～8.0μmol/L范围内能显著促进趋化因子受体CCR5的表达,且剂量依赖性抑制STAT3的磷酸化。同时,用STAT3磷酸化抑制剂Stattic（0.5μmol/L）预处理γδT细胞也可以促进CCR5的表达,并能协同增强TWS119促进趋化因子受体CCR5的表达。结论：TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达。
- 徐晶孙蕾清陈永强郑璐吕小婷陈复兴刘军权周忠海
- 关键词：CCR5ΓΔT细胞STAT3
- 垂体肿瘤转化基因1在雄激素非依赖性前列腺癌发生过程中的表达变化被引量：4
- 2016年
- 目的:探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在前列腺癌由激素依赖性转化为激素非依赖性过程中的表达变化。方法:通过在去雄激素培养条件下长期培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P,建立并验证雄激素非依赖性亚系LNCa P-AI细胞模型,用Western印迹、RT-PCR方法每2周检测在去雄激素培养过程中PTTG1的表达改变。结果:经过3个月培养,成功建立雄激素非依赖性亚系LNCa P-AI细胞模型;在LNCa P细胞中,随着去雄激素培养时间延长,PTTG1的表达水平逐渐升高,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9表达有同步升高趋势。结论:PTTG1表达在雄激素非依赖性前列腺癌发生过程中逐渐增强,可能是晚期前列腺癌基因治疗的靶标之一。
- 曹希亮宋晓明于文朝陈永强魏洋洋刘永亮鲁可权高江平
- 关键词：雄激素剥夺治疗LNCAP细胞基质金属蛋白酶-2
- AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响被引量：4
- 2019年
- 目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0. 3～10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。
- 郑璐孙蕾清陈复兴周遹吕小婷陈玲李莹周忠海陈永强
- 关键词：ΓΔT细胞凋亡杀伤功能
- 汉黄芩素对人NK细胞杀伤胃癌MKN45细胞的影响及其机制研究被引量：18
- 2014年
- 目的探讨汉黄芩素对人NK细胞杀伤胃癌MKN45细胞的影响及作用机制。方法淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞（PBMC）,在体外经rhIL-2诱导培养NK细胞;不同浓度的汉黄芩素分别作用于NK细胞24 h、48 h及72 h后CCK8法检测NK细胞增殖情况;不同浓度汉黄芩素作用NK细胞48 h后：流式细胞术（FCM）检测NK细胞GraB、IFN-γ、PFP、CD107a的表达;Western blot检测NK细胞p-Akt、β-catenin、Bcl-2、p-ERK的表达;乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测NK细胞对胃癌细胞株MKN45的杀伤活性。结果 0.2~50μg/ml的汉黄芩素作用NK细胞24 h、48 h及72 h后,NK细胞的增殖率增高;同一质量浓度汉黄芩素作用48 h后的NK细胞的增殖率最高且在12.5μg/ml时达最高峰;汉黄芩素3.1~12.5μg/ml作用NK细胞48 h后：NK细胞的GraB、IFN-γ、PFP、CD107a表达增加、NK细胞的p-Akt、β-catenin表达增加、NK细胞对胃癌MKN45细胞的杀伤活性增高。结论汉黄芩素能够促进NK细胞的增殖,其促进NK细胞的增殖可能与Wnt信号传导通路及PI3K/Akt信号通路有关;汉黄芩素增加NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性可能与汉黄芩素上调NK细胞GraB、PFP、IFN-γ及CD107a的表达有关。
- 许琳王营陈复兴刘军权吕小婷陈永强
- 关键词：汉黄芩素NK细胞杀伤活性
- TWS119对人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞活性影响及机制研究被引量：2
- 2016年
- 目的研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)体外抗肿瘤活性和对人γδT细胞活性的影响。方法用不同浓度的4,6-二取代吡咯并嘧啶分别作用于人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞24、48和72 h后,用CCK-8法测定4,6-二取代吡咯并嘧啶对人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞增殖的影响及γδT细胞对SGC-7901细胞杀伤能力;流式细胞术分析4,6-二取代吡咯并嘧啶对SGC-7901细胞凋亡的影响,Western blot检测4,6-二取代吡咯并嘧啶对Bcl-2、p-STAT3和p-ERK1/2表达的影响。结果 0~8.0μmol·L^(-1)4,6-二取代吡咯并嘧啶能抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导其凋亡,抑制Bcl-2的表达,促进p-ERK1/2和p-STAT3的表达。而在γδT细胞中,4,6-二取代吡咯并嘧啶在0~4.0μmol·L^(-1)时能促进其增殖和对SGC-7901细胞的体外杀伤活性,促进Bcl-2的表达,抑制pERK1/2和p-STAT3的表达。结论一定浓度的4,6-二取代吡咯并嘧啶能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖并诱导其凋亡,同时能促进γδT细胞增殖和对SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与4,6-二取代吡咯并嘧啶激活Wnt信号传导通路及其对p-ERK1/2、Bcl-2和p-STAT3表达的影响有关。
- 陈永强郑璐刘军权吕小婷孙蕾清徐晶周忠海陈复兴
- 关键词：ΓΔT细胞SGC-7901细胞增殖
- β-谷甾醇对人共刺激细胞杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制的探讨被引量：23
- 2014年
- 目的探讨β-谷甾醇对用多种细胞因子和刺激分子联合诱导培养的人外周血单个核细胞（共刺激细胞）杀伤胃癌SGC-7901细胞的影响及其机制。方法分离健康者外周血单个核细胞（PBMC）在体外经多种细胞因子诱导为共刺激细胞,不同质量浓度的β-谷甾醇分别作用于共刺激细胞及胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h后,CCK8法检测共刺激细胞的生长,MTT法检测胃癌SGC-7901细胞的生长,FCM检测共刺激细胞PFP、GraB、CD107a、IFN-γ的表达;LDH释放法检测共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性;Western blot检测共刺激细胞中p-ERK1/2、Bcl-2的表达情况。结果培养10 d后,共刺激细胞增殖倍数达高峰。与对照组比较,质量浓度2.5~10μg/ml的β-谷甾醇作用后共刺激细胞的增殖率显著提高（P〈0.05）,质量浓度10~80μg/ml的β-谷甾醇对SGC-7901细胞生长抑制率显著提高（P〈0.05）,并且0.3~5μg/ml的β-谷甾醇作用后的共刺激细胞对SGC-7901细胞的杀伤活性明显增强（P〈0.05）,共刺激细胞中PFP、GraB、IFN-γ及p-ERK1/2、Bcl-2的表达较对照组显著增加（P〈0.05）。结论β-谷甾醇在一定质量浓度范围内能够促进共刺激细胞的增殖,并增强其对胃癌SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与β-谷甾醇上调共刺激细胞PFP、GraB、IFN-γ的表达,活化p-ERK1/2、Bcl-2有关。
- 王娟刘军权陈复兴周忠海陈永强李昳骆晓梅罗冠琴杨阳朱炳喜
- 关键词：Β-谷甾醇SGC-7901
- 水飞蓟宾对γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901的影响及其机制初探被引量：2
- 2015年
- 探讨水飞蓟宾对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901的影响及其作用机制。分离健康志愿者外周血单个核细胞，体外经多种细胞因子诱导培养为76T细胞；收集培养、扩增7d后的怕T细胞，将其用不同浓度的水飞蓟宾诱导24h、48h及72h，CCK-8法检测76T细胞增殖情况；流式细胞术（FCM）检测78T穿孔素（perforin，PFP）、细胞颗粒酶B（GranzymeB，GranB）及CD107a的表达；western-blot法检测78T细胞P—ERK1／2、Bcl-2、P—AKT、β-catenin的表达；乳酸脱氢酶（LDH）法检测γδT细胞对胃癌细胞SGC-7901的杀伤活性。结果发现浓度在1．6～100μg／ml的水飞蓟宾作用78T细胞72h后，76T细胞增殖率较对照组显著增加（P〈0．05），且在25μg／ml时达到最高峰；将6．25～100μg／ml水飞蓟宾诱导γδT细胞72h后，78T细胞的PFP、GranB及CD107a的表达以及P—ERK1／2、Bcl-2、P—AKT、β-catenin的表达与对照组比较均不同程度增加（P〈0．05），且对胃癌细胞SGC-7901的杀伤活性显著增强（P〈0．05）。以上实验结果提示一定浓度的水飞蓟宾对γδT细胞具有促进增殖作用，其机制可能与激活P—ERK1／2、Bcl-2、P—AKT及G—catenin信号通路有关。一定浓度的水飞蓟宾能够增加78T细胞对胃癌细胞的杀伤活性，其作用机制可能与水飞蓟宾能够增加78T细胞的穿孔素、GranB及CD107a的表达有关。
- 杜玉林王营刘军权陈复兴吕小婷陈永强
- 关键词：水飞蓟宾ΓΔT细胞胃癌细胞SGC-7901杀伤活性
- 槲皮苷对人γδT 细胞增殖及杀伤功能的影响被引量：5
- 2014年
- 目的：探讨槲皮苷（ quercitrin ）对人外周血γδT细胞体外增殖和功能影响及相关机制。方法从健康人外周血中分离单个核细胞（PBMC），加入到含有异戊烯焦磷酸和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养获得γδT细胞。用不同浓度的槲皮苷作用γδT细胞48 h后，用CCK-8法测定不同浓度槲皮苷组γδT细胞增殖和杀伤能力；采用流式细胞术检测各组γδT细胞颗粒酶B和穿孔素的表达；用Western blot法检测p-ERK、p-Akt和Bcl-2蛋白的表达。结果培养10 d后的γδT细胞纯度达到（88．94±2．36）％。槲皮苷浓度在10～80μg/ml时能显著促进γδT细胞的增殖及颗粒酶B、穿孔素的表达和对结肠癌HCT116细胞的杀伤能力。在蛋白水平p-ERK、p-Akt和Bcl-2的表达量均显著高于对照组，而内参GAPDH表达量无变化。结论槲皮苷可体外增强γδT细胞的增殖及杀伤功能，其机制可能通过p-ERK和p-Akt信号通路。
- 郑璐陈永强刘军权周忠海杨阳吕小婷朱云陈复兴
- 关键词：槲皮苷ΓΔT细胞细胞增殖颗粒酶B穿孔素
