韩梅 作品数:27 被引量:52 H指数:4 供职机构: 湖南师范大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 湖南省教育厅科研基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 自动化与计算机技术 更多>>
转录因子AP-2β与SLP-2的蛋白相互作用 被引量:1 2010年 AP-2β是转录因子AP-2家族中的重要一员.AP-2是一个与哺乳动物的发育、细胞生长、分化、凋亡和肿瘤发生都有密切联系的重要的转录因子家族.最近的研究表明,AP-2能通过与其他蛋白的相互作用来调控AP-2下游基因的转录活性.采用免疫共沉淀结合质谱鉴定的方法筛选与AP-2β相互作用的蛋白.结果筛选到Stomatin like protein2(SLP-2)蛋白可能与AP-2β相互作用.免疫共沉淀实验证实外源过表达和内源的SLP-2蛋白都能与AP-2β蛋白相互作用.而且,细胞免疫荧光实验发现外源表达的Myc-AP-2β蛋白与内源的SLP-2蛋白在MCF-7细胞的胞质中有共定位.此外,免疫印记实验结果表明过表达SLP-2能上调AP-2β的蛋白水平,这就表明SLP-2与AP-2β相互作用后,SLP-2可能使AP-2β蛋白更稳定.这些研究结果为进一步研究这两个基因的功能提供了新的切入点. 王义军 徐甜 胡翔 向双林 周建林 张健 韩梅关键词:相互作用蛋白 SLP-2 免疫共沉淀 转录因子AP-2基因家族功能研究与应用 张健 周建林 胡翔 韩梅 刘如石 向寿莲 AP-2是一个重要的有DNA结合特异性的转录因子家族,在胚胎发育、细胞分化和肿瘤发生方面都有重要的调控作用,在很多病毒和细胞中基因的启动子或增强子区域含有其结合位点。AP-2家族成员在转录激活域的序列有很大不同,所以在生...关键词:关键词:转录因子家族 稳定表达人Eps8基因的胶质瘤U251细胞系的建立 被引量:1 2010年 应用亚克隆方法构建pEGFP-C3/Eps8真核表达载体,经测序鉴定后,用脂质体进行胶质瘤U251细胞的转染,应用G418筛选出稳定表达pEGFP-C3/Eps8和pEGFP-C3的细胞系,最后通过Western blot和荧光定位证明Eps8在U251细胞中过量表达。本实验成功建立了稳定转染Eps8的U251细胞系,为进一步研究Eps8基因在胶质瘤中的功能奠定了良好的实验基础。 周芳亮 胡翔 杨子剑 韩梅 丁小凤关键词:真核表达载体 U251细胞 人TNFAIP1基因在常见细胞系中的表达 被引量:7 2006年 TNFAIP1蛋白是第一个被鉴定受肿瘤坏死因子α诱导的蛋白,TNFAIP1蛋白可能参与DNA复制、合成、细胞凋亡以及人类各种疾病的发生等重要过程,但对该基因确切功能和作用机制研究不多。该文利用实时定量PCR的方法检测该基因在几种常见细胞系的表达情况,发现在COS7以及NIH3T3细胞系中高表达,而在HeLa、HepG2、SW480、PanC1、MCF7等癌细胞系中低表达。由此推测TNFAIP1可能在癌症的发生中起到一定的作用。如果把TNFAIP1基因克隆到真核表达载体pCMV-Myc中,转染到HeLa细胞系中,发现过表达TNFAIP1可促进HeLa细胞的凋亡。 杨利平 周爱冬 李红 张文峰 吴艳阳 张健 韩梅关键词:肿瘤坏死因子Α 实时定量PCR WESTERN-BLOT 人TRAF2新剪切体的鉴定与表达分析 被引量:1 2011年 目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析。方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在。再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析。结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子。通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势;而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRATΔ6剪切体表达占优势;在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达;在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近。在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势。结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA,而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性。 罗红雨 张波 严杰 李玲 尹抗抗 韩梅关键词:TRAF2 剪切体 PCR 运用染色质免疫沉淀技术筛选出AP-2α的靶基因GALK1 2008年 在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域。与其他方法相比,染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)是一种近来研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法之一。本研究利用ChIP克隆方法,找出了AP-2α所调控的新的下游靶基因GALK1,并应用Lucifer-ase assay和RT-PCR实验进行了初步的验证。这一新发现,有利于我们进一步研究转录因子AP-2α的功能。 肖湘文 贺爱兰 周畅 任道龙 胡翔 韩梅 张健关键词:靶基因 AP-2Α SLP-2基因在乳腺癌细胞系中的表达及对MCF-7细胞增殖的影响 被引量:3 2014年 人的SLP-2基因在乳腺癌组织的高表达与病人的存活率相关.为了研究SLP-2在乳腺癌中的功能,应用免疫印记的方法检测SLP-2在不同乳腺癌细胞中的蛋白表达水平,发现随着细胞癌化程度的增强其表达也增强.成功构建p CMV-Myc-SLP-2重组质粒,证明了其在MCF-7细胞的表达,MTT实验结果表明SiRNA转染乳腺癌细胞MCF-7可以抑制细胞增殖,同时发现SLP-2在乳腺癌细胞系中表达量与HER2/nue呈负相关.这些结果为深入研究乳腺癌的发生和发展奠定了基础. 谢贵娥 黄招琴 李莉 徐甜 张航 韩梅 向双林关键词:乳腺癌 SLP-2 免疫印记 细胞增殖 EPS8蛋白的表达、多克隆抗体制备及其亚细胞定位 被引量:3 2008年 EPS8(EGFR pathwaysub strate 8)是epidermal growth factor receptor(EGFR)重要的激酶活性底物之一,近年有研究表明其与神经胶质瘤密切相关.为了对该基因进行深入的功能研究,成功地将EPS8基因构建于原核表达载体pGEX-4T-2,转化BL21(DE3)获得融合表达产物,用GST-EPS8(-10-230aa)免疫新西兰大白兔获得兔抗EPS8多克隆抗体.采用Western Blot,用该抗体检测EPS8基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针对EPS8蛋白的专一性,可用于对EPS8的结构和功能研究.同时,用该抗体通过荧光免疫细胞对4种神经胶质瘤细胞系进行定位分析发现,EPS8蛋白主要分布于胶质瘤细胞的细胞质中. 罗畅 丁小凤 孙一兵 韩梅关键词:亚细胞定位 小鼠Shh蛋白N端基因的克隆与原核表达 2008年 从小鼠(C57BL/6)10.5 d胚胎中提取总RNA经RT-PCR扩增出编码小鼠Shh基因N端cDNA序列,克隆到大肠杆菌表达载体pQEN3构建重组表达质粒pQEN3-Shh-N.重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol/L IPTG诱导,在SDS-PAGE上检测到20kDa目的蛋白带,与Shh N端蛋白预期大小一致,其蛋白表达量达到了全菌总蛋白的约30%.重组蛋白经Western blot鉴定结果显示,在20kDa处出现单一的显色条带,说明表达的重组蛋白为ShhN端蛋白,为研究Shh蛋白N端与毛发生长的功能奠定了基础. 刘如石 任道龙 徐甜 韩梅 胡翔 肖鲜 张健关键词:SHH 基因克隆 原核表达 转录因子AP-2及其在癌症中的作用(英文) 2004年 本文综述了关于AP 2基因家族的最近期研究进展。AP 2是一个分子量为52 kDa的转录因子,有其独特的蛋白质分子结构,其N端是富含脯氨酸和谷氨酸的转录激活域,C端的helix span helix结构可以形成二聚体并与特异的DNA序列结合。AP 2家族都能以同源或异源二聚体的方式与一段保守序列5' GCCNNNGGC 3'结合。AP 2α是最早被鉴定和研究的家族成员,很多研究表明AP 2α是一个抑癌基因。 韩梅 钟英丽 张健关键词:AP-2Α 转录因子 抑癌基因