郦明芳
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：南京大学医学院附属鼓楼医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 家族性高胆固醇血症纯合子家系低密度脂蛋白受体功能检测及基因突变分析被引量：7
- 2003年
- 目的 分析家族性高胆固醇血症 (familialhypercholesterolemia ,FH)患者低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinreceptor ,LDLR)的功能改变及基因突变。 方法 分离FH患者外周血淋巴细胞 ,用流式细胞仪观察淋巴细胞结合和摄取荧光标记的低密度脂蛋白的情况。抽提FH患者外周血基因组DNA为模板 ,进行聚合酶链反应 单链构象多态性分析 ( polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymor phism ,PCR SSCP)及DNA序列分析。 结果 对一家两例临床诊断为FH纯合子的患儿及其父母的外周血淋巴细胞LDLR功能进行了分析 ,发现均表现为低密度脂蛋白 (LDL)摄取和结合障碍。进一步从基因水平进行了研究 ,发现LDLR基因突变是位于第 6外显子编码第 2 97位氨基酸的碱基发生缺失 ,导致移码突变并使得终止密码子TGA在第 3 69位提前出现 ,从而不能表达正常的LDLR ,体内胆固醇的代谢发生障碍。结论 对 1例家族性高胆固醇血症纯合子家系应用流式细胞仪方法初步发现LDLR功能缺陷 ,进一步结合PCR SSCP方法证实其LDLR存在新的突变类型。
- 管晓翔郦明芳范乐明陈琪
- 关键词：低密度脂蛋白受体聚合酶链反应-单链构象多态性基因突变
- 超声介导白蛋白微泡破裂法促进增强型绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞的表达被引量：4
- 2003年
- 基因治疗的研究已取得不少进展 ,但要成功地应用于临床仍存在许多困难 ,安全、有效的基因载体及良好的靶向性就是其中最重要的难点之一。本研究根据超声介导白蛋白微泡破裂可以增加真核细胞膜对大分子 (如DNA)通透性的原理 ,探讨一种新的转基因方法 ,以便安全有效和定向地转移目的基因。实验中选择绿色荧光蛋白C3基因为标记基因 ,以白蛋白微泡为载体 ,用超声介导微泡破裂的方法在体外进行中国仓鼠卵巢细胞的基因转化 ,同时以脂质体为对照 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞计数仪分别定性和定量观察细胞转化效率。台盼蓝染色观察细胞的活性。体外试验发现 0 .8MHz、1.0W cm2 、10 %脉冲周期、60s超声介导 10 %白蛋白微泡破裂可以有效稳定转化增强的绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞表达 ,平均转化阳性率可达 5 6.2 % ,活性实验证明对细胞无毒副作用 。
- 管晓翔范乐明陈琪郦明芳李肖蓉邵力正
- 关键词：病理生理学超声分子生物学实验绿色荧光蛋白
- 聚合酶链反应-单链构象多态性分析在家族性高胆固醇血症研究中的应用
- 2002年
- 目的：探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）在家族性高胆固醇血症（ｆａｍｉｌｉａｌｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＦＨ）研究中的应用价值。方法：提取ＦＨ患者外周血基因组ＤＮＡ，进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ序列分析。结果：对１家２例临床诊断为ＦＨ的患儿及其父母从基因水平明确了诊断。ＬＤＬ受体基因突变是位于第６外显子的移框突变。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可以从基因水平对ＦＨ患者明确诊断，并可对先证者家系成员早期诊断，以便提供咨询和指导。
- 郦明芳范乐明管晓翔李崇勇陈琪
- 关键词：家族性高胆固醇血症聚合酶链反应-单链构象多态性分析基因突变
- 家族性高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因新的突变类型一例被引量：4
- 2002年
- 目的 分析一例家族性高胆固醇血症患者的低密度脂蛋白受体基因突变位点。方法以患儿的基因组DNA为模板 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增该基因的 18个外显子。用单链构象多态性(SSCP)方法分析检测PCR产物 ,对电泳结果异常者进行DNA测序。结果 单链构象多态性分析发现患儿第 10外显子存在一异常条带。DNA测序证实患儿第 10外显子发生N5 15S纯合错义突变。结论该病例为一个新的LDLR突变位点 ;聚合酶链反应 单链构象多态性分析 (PCR SSCP)可用于该突变位点的诊断。
- 庞庆丰郦明芳陈琪范乐明
- 关键词：低密度脂蛋白受体基因DNA突变分析PCR技术
- 低密度脂蛋白受体功能与基因突变的关系被引量：3
- 2002年
- 目的 分析家族性高胆固醇血症低密度脂蛋白受体 (LDLR)功能变化 ,寻找基因突变位点 ;阐明该基因突变类型对LDLR功能的影响。方法 患儿及其父系、母系三代共 30人检查血脂和临床表现 ,作系谱分析 ,确定该患儿符合家族性高胆固醇血症纯合子的诊断 ;培养患儿皮肤成纤维细胞 ,用受体的放射性配体结合技术 ,定量测定细胞的LDLR的功能 ;提取外周血基因组DNA对LDLR基因的相应外显子进行PCR SSCP及DNA序列分析。结果 系谱分析发现 11个杂合子及 1个纯合子 ;纯合子患儿LDLR结合功能基本正常 ,但其内移和降解功能只有正常人的 3 6 %及 1 7%;DNA测序结果证实患儿第 17外显子的第 5 99和 6 0 0密码子间插入一个碱基G ,导致框移突变 ;第 84 2密码子发生CCA→CCG的无义突变。结论 首次报道了一个新的LDLR突变位点 ;初步明确该突变位点对患者的影响较为显著。
- 庞庆丰郦明芳胡维诚陈琪李晓宇范乐明
- 关键词：高胆固醇血症家族性基因
