管晓翔
- 作品数：9 被引量：36H指数：4
- 供职机构：南京医科大学基础医学院动脉粥样硬化研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 聚合酶链反应-单链构象多态性分析在家族性高胆固醇血症研究中的应用
- 2002年
- 目的：探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ－ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）在家族性高胆固醇血症（ｆａｍｉｌｉａｌｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＦＨ）研究中的应用价值。方法：提取ＦＨ患者外周血基因组ＤＮＡ，进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ序列分析。结果：对１家２例临床诊断为ＦＨ的患儿及其父母从基因水平明确了诊断。ＬＤＬ受体基因突变是位于第６外显子的移框突变。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可以从基因水平对ＦＨ患者明确诊断，并可对先证者家系成员早期诊断，以便提供咨询和指导。
- 郦明芳范乐明管晓翔李崇勇陈琪
- 关键词：家族性高胆固醇血症聚合酶链反应-单链构象多态性分析基因突变
- 1型糖尿病防治新方法:构建COX-2siRNA表达载体阻断COX-2基因表达被引量：7
- 2004年
- 目的:构建具有特异性阻断环加氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因功能的siRNA表达系统,为1型糖尿病的防治提供新的方法。方法:根据Genbank提供的mRNA序列,应用siRNA设计软件设计特异性的短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链siRNA片段,克隆到pSilencerTM1.0-U6siRNA载体中,用酶切方法和测序法对重组体进行鉴定;最后将构建的COX-2siRNA表达载体转染胰岛细胞,观察其对细胞COX-2基因表达的影响。结果:酶切和序列测定表明,成功构建了COX-2siRNA表达载体,COX-2siRNA能够抑制细胞内COX-2的表达。结论:本研究构建的COX-2siRNA表达载体,具有阻断COX-2基因表达的功能,为胰岛β细胞功能保护的研究和1型糖尿病的早期防治提供了有效的方法和手段。
- 凌家俭管晓翔陈琪范乐明韩晓
- 关键词：1型糖尿病COX-2SIRNA表达基因表达环加氧酶2
- 蛋白激酶C抑制剂Staurosporine对A类清道夫受体胞浆域结构去除后功能的影响被引量：4
- 2004年
- A类清道夫受体 (scavengerreceptor,SR A)是一种主要位于巨噬细胞膜表面的同源三聚体糖蛋白 ,能够结合和摄取多种配基并介导内移 .在清道夫受体胞浆域有几个潜在的磷酸化位点 ,有关这些磷酸化位点与受体功能之间的确切关系目前尚所知甚少 .为深入探讨A类清道夫受体胞浆域与磷酸化之间的关系 ,以及受体胞浆域磷酸化对受体功能的影响 ,实验以含有SR AcDNA质粒为模板 ,采用PCR方法扩增不含胞浆域序列的清道夫受体 ,同时扩增全长清道夫受体作为对照 .PCR产物经纯化酶切后 ,进一步亚克隆到PcDNA3 1/HisB中 ,测序结果表明 ,重组产物能够编码正确的氨基酸序列 .重组产物经脂质体Lipofectamine (LF2 0 0 0 )介导转化入CHO细胞中 ,在含G4 18选择性培养液中培养筛选 14天后 ,分离阳性克隆 ,继续培养 .采用流式细胞计数仪 (FACS)鉴定转化筛选后细胞能否表达具有功能的清道夫受体 .结果发现 ,转化的CHO细胞可以稳定表达SR A的蛋白质 ,但受体胞浆域去除后 ,摄取配基的能力明显弱于全长组 (1∶1 337) .用荧光DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI AcLDL) ,37℃孵育转化细胞 5h后 ,激光共聚焦显微镜下观察到 :全长受体转化组细胞荧光散在分布于细胞膜和细胞器 ,而去除胞浆域组荧光只局限于细胞膜 ,说明SR
- 管晓翔陈琪范乐明
- 关键词：A类清道夫受体磷酸化蛋白激酶C抑制剂巨噬细胞
- 家族性高胆固醇血症纯合子家系低密度脂蛋白受体功能检测及基因突变分析被引量：7
- 2003年
- 目的 分析家族性高胆固醇血症 (familialhypercholesterolemia ,FH)患者低密度脂蛋白受体(lowdensitylipoproteinreceptor ,LDLR)的功能改变及基因突变。 方法 分离FH患者外周血淋巴细胞 ,用流式细胞仪观察淋巴细胞结合和摄取荧光标记的低密度脂蛋白的情况。抽提FH患者外周血基因组DNA为模板 ,进行聚合酶链反应 单链构象多态性分析 ( polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymor phism ,PCR SSCP)及DNA序列分析。 结果 对一家两例临床诊断为FH纯合子的患儿及其父母的外周血淋巴细胞LDLR功能进行了分析 ,发现均表现为低密度脂蛋白 (LDL)摄取和结合障碍。进一步从基因水平进行了研究 ,发现LDLR基因突变是位于第 6外显子编码第 2 97位氨基酸的碱基发生缺失 ,导致移码突变并使得终止密码子TGA在第 3 69位提前出现 ,从而不能表达正常的LDLR ,体内胆固醇的代谢发生障碍。结论 对 1例家族性高胆固醇血症纯合子家系应用流式细胞仪方法初步发现LDLR功能缺陷 ,进一步结合PCR SSCP方法证实其LDLR存在新的突变类型。
- 管晓翔郦明芳范乐明陈琪
- 关键词：低密度脂蛋白受体聚合酶链反应-单链构象多态性基因突变
- A类清道夫受体胞浆域的功能特性
- 目的:清道夫受体(Scavenger receptor,SR-A)是一种主要位于巨噬细胞膜表面的三聚体糖蛋白,能够介导多种配基进行内移。有关SR-A内移的调控机制目前尚所知不多,一般认为其胞浆域部分不含引导内移的信号序列...
- 管晓翔陈琪范乐明陈秀英蒋莉李晓宇
- 文献传递
- 超声介导白蛋白微泡破裂法促进增强型绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞的表达被引量：4
- 2003年
- 基因治疗的研究已取得不少进展 ,但要成功地应用于临床仍存在许多困难 ,安全、有效的基因载体及良好的靶向性就是其中最重要的难点之一。本研究根据超声介导白蛋白微泡破裂可以增加真核细胞膜对大分子 (如DNA)通透性的原理 ,探讨一种新的转基因方法 ,以便安全有效和定向地转移目的基因。实验中选择绿色荧光蛋白C3基因为标记基因 ,以白蛋白微泡为载体 ,用超声介导微泡破裂的方法在体外进行中国仓鼠卵巢细胞的基因转化 ,同时以脂质体为对照 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞计数仪分别定性和定量观察细胞转化效率。台盼蓝染色观察细胞的活性。体外试验发现 0 .8MHz、1.0W cm2 、10 %脉冲周期、60s超声介导 10 %白蛋白微泡破裂可以有效稳定转化增强的绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞表达 ,平均转化阳性率可达 5 6.2 % ,活性实验证明对细胞无毒副作用 。
- 管晓翔范乐明陈琪郦明芳李肖蓉邵力正
- 关键词：病理生理学超声分子生物学实验绿色荧光蛋白
- A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失对功能的影响被引量：5
- 2005年
- 目的确定A类清道夫受体胞浆域中的信号序列,探讨其对于受体功能的影响。方法构建A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的表达质粒,并将其经脂质体介导瞬时转染入CHO细胞中。用Westernblot检测A类清道夫受体在细胞中的表达,并用流式细胞仪定量检测转染后的蛋白表达效率。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白与转染的细胞共孵育,激光共聚焦显微镜下观察乙酰化低密度脂蛋白在细胞内的分布,并进行荧光定量分析。结果A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体可大量表达于转染细胞膜和细胞浆。在高浓度乙酰化低密度脂蛋白刺激下,A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的细胞内定位发生变化,也可存在于转染细胞核内。A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体摄取DiI标记乙酰化低密度脂蛋白的能力较全长相比下降约60%,细胞粘附能力较全长A类清道夫受体相比则下降约8.9%。结论A类清道夫受体的N端第1～27位氨基酸结构对于A类清道夫受体在细胞内的定位表达、结合和摄取配体以及调节细胞粘附的功能具有重要的作用。
- 陈耀宇管晓翔王晓花乐珅柏惠陈秀英季勇范乐明陈琪
- 关键词：病理学与病理生理学A类清道夫受体粘附
- 新型白蛋白微泡经超声介导破裂促进EGFP基因在Cos-7细胞的表达被引量：9
- 2003年
- 目的 根据超声介导白蛋白微泡破裂空化效应可以增加真核细胞膜对大分子 (如DNA)通透性的原理 ,探讨一种新的转基因方法 ,以便安全有效和定向地转移目的基因。方法 实验中选择绿色荧光蛋白基因EGFP为标记基因 ,以自制的白蛋白微泡为载体 ,用超声介导微泡破裂的方法在体外进行Cos 7细胞的基因转化 ,同时以脂质体为对照 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞计数仪分别定性和定量观察细胞转化效率。锥虫蓝染色观察细胞的活性。结果 体外试验发现 0 .8MHz、1.0W /cm2 、10 %占空比 (dutycycle)、60s超声介导 10 %白蛋白微泡破裂可以有效稳定地转化EGFP基因在Cos 7细胞表达 ,且对细胞无毒副作用。结论 自制白蛋白微泡是一种安全、有效的新型基因载体 ,在一定超声条件控制下 ,能增强基因的转导与表达 ,有良好的靶向性 ,提示该技术有应用于临床基因治疗的广阔前景。
- 李肖蓉邵力正王强羊镇宇管晓翔范乐明陈琪
- 关键词：EGFP基因转基因基因治疗
- 泡沫细胞形成的分子基础
- 动脉粥样硬化是心脑血管疾病发生发展的主要病理学基础,泡沫细胞的形成则在动脉粥样硬化的发病机制中起关键作用。已知A类清道夫受体(SRA)和CD36是介导脂质在细胞中过度积聚的两种主要受体,但其实现脂质摄取的分子基础尚有许多...
- 陈耀宇管晓翔陈琪
- 文献传递
