郭焕平
- 作品数：18 被引量：17H指数：3
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- 犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型转移载体的构建及真核表达
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型(FHV1)转移质粒pBS-TK-NcAMA1,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,扩增犬新孢子虫AMA1基因,并将其亚克隆至重组质粒pBS-TK。通过转染试剂PEI将pBS-TK-NcAMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的小鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用间接免疫荧光试验和Western-blot对基因的表达情况进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-NcAMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白的分子质量为68ku。这一研究成果为犬新孢子虫AMA1基因的重组猫疱疹病毒1型载体疫苗的研制奠定了基础。
- 郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军
- 关键词：犬新孢子虫
- 牛源犬新孢子虫AMA1基因的原核表达及免疫原性分析被引量：4
- 2015年
- 为了解牛源犬新孢子虫AMA1基因蛋白特性及免疫原性,本试验以重组质粒PVAX1-NcAMA1为模板,PCR扩增NcAMA1基因,亚克隆至pGEX-4T-1表达载体;表达、纯化NcAMA1重组蛋白,并应用弗氏佐剂制备NcAMA1重组蛋白亚单位疫苗,接种BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清抗体水平,用ELISA方法检测IFN-γ、IL-4表达水平。结果显示,表达的NcAMA1重组蛋白相对分子质量约为94 000(GST约为26 000、NcAMA1约为68 000),NcAMA1重组蛋白亚单位疫苗接种BALB/c小鼠后,能够诱导BALB/c小鼠产生较高的体液免疫水平和细胞免疫水平。本研究为利用该重组蛋白建立免疫学诊断方法及制备抗犬新孢子虫新型亚单位疫苗奠定了基础。
- 王华松张蕾邓梦李丽郭焕平贾立军
- 关键词：犬新孢子虫免疫原性
- 牛源犬新孢子虫AMA1基因亚单位疫苗的制备及免疫原性分析
- 引言新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫（Neospora caninum）寄生于犬、牛、羊等多种哺乳动物细胞内而引起的一种原虫病[1]。全球范围内30多个国家都有发生[2],大多数牛场每年损失达2%5%...
- 郭焕平张守发李积旭李男礼贾立军
- 犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒I型转移载体的构建及真核表达
- 为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-I）转移质粒pBS-TK-AMA1,并在真核细胞中表达,本试验以pBS-TK重组质粒为载体,插入犬新孢子虫AMA1基因。其中pBS-TK重组质粒是含有FHV-1 T...
- 郭焕平张守发高洋贾洪林贾立军
- 关键词：犬新孢子虫
- 文献传递
- 犬新孢子虫SRS9基因真核重组质粒的构建及在Vero细胞中表达被引量：1
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫NcSRS9基因真核表达重组质粒,了解NcSRS9表面蛋白基因的生物学特性及其体外表达情况。本试验应用PCR技术获得目片段,构建克隆质粒pMD18-NcSRS9,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后构建真核表达重组质粒pVAX1-NcSRS9,利用脂质体介导法转染至Vero细胞,以间接免疫荧光方法(IFAT)检测NcSRS9基因在Vero细胞中的表达。结果显示,犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS9基因长度为1 191bp,与GenBank中(EF440644.1)发表的基因核苷酸序列同源性为99%,IFAT检测NcSRS9基因在Vero细胞中获得瞬时表达,为核酸疫苗研究奠定了基础。
- 李强贾立军郭焕平李男礼张守发
- 关键词：犬新孢子虫真核表达
- 犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及其真核表达被引量：2
- 2014年
- 为构建犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,PCR扩增了NcAMA1基因,以此构建了pMD18T-NcAMA1重组克隆质粒;对该重组克隆质粒进行双酶切鉴定后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体pCR259中。应用脂质体介导转染法将经PCR鉴定和酶切鉴定正确的pCR259-NcAMA1重组穿梭质粒转染293细胞,应用IFAT和Western-blot技术检测了AMA1基因在293细胞中的表达情况。结果显示,扩增的NcAMA1基因长度为1 695bp,构建的重组腺病毒穿梭质粒pCR259-NcAMA1能在293细胞中获得瞬时表达,表达蛋白的分子质量约为68ku。
- 郭焕平贾立军于龙政薛书江高洋李男礼张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 犬新孢子虫AMA1基因的生物信息学分析及原核表达载体构建
- 2015年
- 为了解新孢子虫AMA1基因的生物信息学特性,并构建重组原核表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。本试验对牛源犬新孢子虫吉林株AMA1基因进行分子克隆,利用生物信息学软件对该基因进行编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析,并将该基因片段亚克隆至原核表达载体p GEX-4T-1,构建了重组表达质粒p GEX-4T-1-Nc AMA1。结果显示,克隆的Nc AMA1基因片段长1 695 bp,与GenBank(AB265823.1)上发表的基因序列同源性99.9%;Nc AMA1基因编码蛋白等电点为5.43,在其N端及C端分别存在一个跨膜区,为不溶性蛋白,且Nc AMA1蛋白抗原指数较高,有潜在疫苗研究价值。
- 李男礼贾立军郭焕平李积旭张守发
- 关键词：犬新孢子虫NC原核表达载体
- 吉林省猪主要病毒性传染病疫苗接种效果调查被引量：2
- 2014年
- 为了解吉林省2011—2013年猪主要病毒性传染病疫苗接种后的免疫效果,本试验应用ELISA方法对吉林省八个县市的435份猪血清样品随机进行了猪瘟、口蹄疫、猪圆环病毒病及伪狂犬病等猪主要病毒性传染病疫苗接种后的抗体抽检调查。结果表明,猪瘟病毒抗体阳性率为71.24%(270/379);猪O型口蹄疫病毒抗体阳性率为91.83%(326/355);猪圆环病毒抗体阳性率为66.67%(202/303);猪伪狂犬病病毒抗体阳性率为55.87%(119/213)。说明,吉林省8个县市的猪主要传染病疫苗接种后均取得了不同程度的效果,其中猪O型口蹄疫病毒疫苗接种效果最好,而猪圆环病毒和伪狂犬病毒疫苗的接种效果较差。本试验为吉林省猪主要病毒性传染病的疫苗接种提供了科学依据。
- 李积旭张守发丁德郭焕平贾立军
- 关键词：疫苗
- 牛源犬新孢子虫AMA1基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的制备及动物免疫
- 新孢子虫病是由犬新孢子虫引起牛和其它动物的重要的原虫病，该病可引起牛的流产、死胎及神经系统障碍疾病，已给养牛业造成了严重的经济损失。对新孢子虫病的防控目前尚无有效的方法。目前，以病毒为载体的疫苗得到了广泛研究，其中腺病毒...
- 郭焕平
- 关键词：核酸疫苗重组腺病毒疫苗动物免疫
- 文献传递
- 牛源犬新孢子虫NcSRS9基因的生物信息学分析及原核表达被引量：1
- 2014年
- 为了解新孢子虫NcSRS9基因的生物信息学特性,本试验对牛源犬新孢子虫吉林株NcSRS9基因进行分子克隆,利用生物信息学软件对该基因进行编码蛋白等电点、信号肽、跨膜区、糖基化位点及疏水性分析,并将该基因片段亚克隆至原核表达载体pET-28α,构建了重组表达质粒pET-28α-NcSRS9,转化至大肠杆茵BL21中并诱导表达。结果显示,克隆的NcSRS9基因片段长969bp,与GenBank(EF440644.1)上发表的基因序列同源性100%。NcSRS9基因编码蛋白等电点为5.12,在其N末端存在一个跨膜区。SDS-PAGE和Western-blotting分析显示,NcSRS9基因在大肠杆菌内得到高效表达,表达的NcSRS9重组蛋白相对分子质量约为43 000(His约为7 000,NcSRS9约为36 000),可被牛抗新孢子虫阳性血清识别,说明表达的蛋白具有一定的反应原性。
- 郭焕平张守发于龙政薛书江李积旭贾立军
- 关键词：犬新孢子虫原核表达
