陈一平
- 作品数：14 被引量：73H指数：5
- 供职机构：上海医科大学附属华山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 聚合酶链反应对结核杆菌DNA重复序列的检测被引量：4
- 1993年
- 本文用聚合酶链反应(PCR)检测结核杆菌(TB)DNA,在TB染色体DNA中的一个片段多次重复出现,将此片段作为靶DNA,用PCR技术进行扩增。引物的DNA核苷酸序列为5’CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG3’和5’CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG3’在反应中用94℃变性,68℃退火延伸,43个循环可将1fgTBDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其特异性产物,此产物在作为对照的其他细菌中不能检出,加入100ng人基因组DNA对检测效果无影响。本方法为快速、敏感、特异地检测临床标本中的TB打下了基础。
- 陈一平翁心华唐榕毛裕民徐肇玥傅奇
- 关键词：聚合酶链反应结核杆菌DNA
- 聚合酶链反应检测日本血吸虫5D基因的实验研究被引量：12
- 1998年
- 目的：寻找一种有效的日本血吸虫病诊断及疗效考核方法。方法：以血吸虫的成虫、虫卵、尾蚴ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对日本血吸虫编码免疫原性毛蚴抗原的５Ｄ基因进行扩增，检测其敏感性与特异性。结果：用ＰＣＲ检测日本血吸虫的成虫、虫卵、尾蚴ＤＮＡ，均出现明显特异性条带。通过引物１、引物２单扩增，即能检测到单个虫卵、单个尾蚴或针尖大小的成虫组织。采用Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ和非同位素探针能将敏感性进一步提高。常见的肠道细菌及人基因组ＤＮＡ无交叉阳性出现。结论：ＰＣＲ方法检测日本血吸虫基因的敏感性与特异性均满意。
- 陈一平翁心华沈雪芳岑屹
- 关键词：聚合酶链反应日本血吸虫
- 聚合酶链反应检测结核杆菌DNA实验研究的近况被引量：5
- 1994年
- 聚合酶链反应检测结核杆菌ＤＮＡ实验研究的近况上海医科大学华山医院传染病教研室（２０００４０）陈一平，翁心华，徐肇ｈ聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）又称体外基因扩增法，是八十年代中期Ｍｕｌｌｉｓ［１］提出的一种新的...
- 陈一平翁心华徐肇?
- 关键词：聚合酶链反应结核杆菌DNA
- 肽核酸及其应用
- 1999年
- 肽核酸(PNA)是一种人工合成的核苷酸类似物。它具有杂交特性,可选择性结合于双链DNA,并可通过链置换形成(PNA)_2-DNA三聚体。肽核酸在分子生物学和微生物学研究中具有广泛的用途,如作为杂交引物、DNA绘图、PCR clamping、前凝胶杂交及反义药物等。
- 王宝林陈一平
- 关键词：肽核酸生物学特性核苷酸类似物
- 聚合酶链反应对胃活检标本中幽门螺杆菌DNA的检测被引量：17
- 1994年
- 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对幽门螺杆菌（ＨＰ）特异性的尿素酶Ａ基因进行扩增，４０个循环可以检测出１０个ＨＰ，加用非同位素地高辛探针杂交，可以检出单个ＨＰ。用本法对１００例胃镜活检标本进行ＰＣＲ检测，其阳性率达８２％，而尿素酶水解试验，细菌涂片及培养的阳性率则分别为６８％、４６％、１８％。ＰＣＲ方法能快速、敏感，特异地检测出临床标本中ＨＰ，对于研究ＨＰ与上消化道疾病之间的关系，指导抗菌治疗均具有重要意义。
- 陈一平翁心华林庚金徐肇
- 关键词：聚合酶链反应幽门螺杆菌
- 建立检测嗜肺军团菌mip基因的PCR-微孔板反向探针杂交法被引量：2
- 1999年
- 近年来随着对军团菌基因水平的深入研究和聚合酶链反应（ＰＣＲ）及其相关技术的不断发展，为军团菌检测提供了一个快速、敏感、特异的诊断方法，并已用于环境水和临床标本中的军团菌检测，具有较好的检测效果［１］。但是，要使之成为常规的临床诊断方法，尚需不断完善和...
- 朱利平石尧忠陈一平陈一平钟平邬祥惠钟平
- 关键词：军团菌MIP基因聚合酶链反应
- 聚合酶链反应检测日本血吸虫DNA的探索被引量：9
- 1997年
- 为建立一种敏感、有效的日本血吸虫病诊断及疗效考核方法,利用单扩增聚合酶链反应(PCR)及套式-聚合酶链反应(NEST-PCR)检测急、慢性日本血吸虫病患者及动物模型标本中日本血吸虫5D 基因。结果从动物模型采取的肝、脾组织及大便标本均为阳性,而血吸虫病患者的血清标本及日本血吸虫感染鼠的血清、血浆及外周血单个核细胞标本均未检出阳性。这表明外周血中可能不含有日本血吸虫 DNA,使 PCR 方法应用于血吸虫病的诊断及疗效考核受到限制。
- 陈一平翁心华徐肇玥沈雪芳岑屹
- 关键词：DNA聚合酶链反应
- 缓症链球菌外毒素的致病性研究被引量：5
- 2001年
- 目的 从中毒性休克综合征爆发流行现场获取的病原菌 ,进行增菌培养 ,从病原菌分泌物中分离、纯化外毒素蛋白 ,以对其致病性进行实验研究。方法 将现场分离的缓症链球菌增菌培养后 ,所得上清液分别经 2 0 %、40 %、6 0 %、80 %硫酸铵盐析 ,进一步经快速蛋白液相色谱系统 (FPLC)最终纯化 ,分别皮下注射新西兰兔 ,观察有否发热。引起新西兰兔对大肠杆菌内毒素致死性休克的敏感性实验 :先给实验组新西兰兔皮下注射纯化的链球菌外毒素 10 μg ,4h后静脉注射 10 μg大肠杆菌内毒素 ,对照组仅注射 10 μg大肠杆菌内毒素。 结果 经FPLC最终纯化的 2 0 %硫酸铵盐析蛋白 (分子量 340 0 0 )有致热性 ,可使新西兰兔平均体温升高 1℃左右 ,病理见脾脏有丝分裂增加。纯化的链球菌外毒素可增加新西兰兔对大肠杆菌内毒素致死性休克的敏感性 :实验组动物出现休克的临床表现 ,分别于 16～ 2 9h内死亡 ;而仅注射 10 μg大肠杆菌内毒素的对照组动物无上述表现。
- 卢洪洲翁心华尹有宽陈一平姜夕南王华雨钱开成朱白彭宝珍龚祖埙
- 关键词：口腔链球菌脓毒性休克中毒性休克综合征
- 一种缓症链球菌毒素蛋白的分离纯化及其致病性的初步研究被引量：3
- 1999年
- 目的分离与纯化致中毒性休克综合征缓症链球菌外毒素蛋白，并对其致病性进行初步研究。方法将分离的缓症链球菌在ＢａｃｔＡＰＩ２０培养基增菌培养后，所得上清液分别用２０％、４０％、６０％、８０％硫酸铵分段盐析，进一步快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）最终纯化，分别皮下注射新西兰兔观察有否体温升高、耳部及粘膜充血、腹泻等致热性表现。结果增菌培养上清液２０％盐析段蛋白（外毒素）有致热性作用，可复制新西兰兔致热模型。结论缓症链球菌外毒素蛋白是一种新的链球菌致热性外毒素。
- 卢洪洲翁心华尹有宽石尧忠石尧忠姜夕南陈一平钱开成朱白
- 关键词：缓症链球菌中毒性休克综合征
- 结核分支杆菌katG蛋白的高表达与纯化被引量：4
- 2000年
- 目的 表达与纯化结核分支杆菌katG 蛋白,为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法 将含有katG 基因的pET24bkatG 表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) 菌株,在异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG) 诱导下表达,分别对不同诱导时间的表达产物进行SDSPAGE 以及考马斯亮蓝染色。获得稳定的高表达菌株后采用Xpress TM蛋白纯化系统对超声破菌液进行纯化。最后对纯化产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果 对诱导后的重组大肠杆菌菌液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE) 以及考马斯亮蓝染色后发现相对分子质量约为80 000 。表达蛋白量约占总蛋白量的17.7% 。对重组katG基因表达产物进行纯化的结果发现,以350 m mol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90 % 以上。对表达产物进行过氧化氢酶活性初步检测证明,重组的katG 基因产物具有过氧化氢酶活性。结论 通过pET24bkatG 表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的katG 高表达菌株,表达产物具有一定酶活性。
- 张文宏翁心华季朝能毛裕民陈一平陈澍邬祥惠
- 关键词：结核分支杆菌基因表达异烟肼
