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雌激素调控的绿色荧光蛋白在酵母细胞中的表达被引量：1: 2006年; 采用绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,用酵母细胞构建环境雌激素(EEH)的评价体系,可敏感、快速、方便地筛选出EEH化合物。通过分子生物学技术,将GFP基因插入到pM P 206/ERE启动子CYC 1的下游,用GFP取代L ac Z基因,并转化于酵母细胞。DNA测序发现ERE-CYC 1-GFP框架正确。对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因(hER cDNA)和GFP基因特异条带,说明hER cDNA和GFP已重组于酵母细胞。荧光显微镜下发现大量的绿色荧光颗粒,表明GFP基因在酵母细胞中成功表达。酵母细胞经不同浓度雌二醇作用后,与GFP表达量有剂量效应关系。与其他酵母评价体系相比,以GFP为报告基因评价EEH不需要破坏细胞壁,也不需要底物,可在96孔板中完成,这为高通量筛选EEH化合物奠定了基础。; 李湘鸣罗方妮陈春波张唯立吴玉娟祝娉婷; 关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组绿色荧光蛋白

转虫荧光素酶基因细胞在亲电性化学污染物监测中的应用研究被引量：2: 2007年; 目的用亲电性反应元件(EPRE)调控的转虫荧光素酶基因细胞快速评价环境的污染程度。方法采用分子生物学的方法,将EPRE与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)的基因相融合,构建成EPRE调控的LUC稳定表达载体,将其转染于HeLa细胞,经G418筛选出稳定的细胞株。该细胞经不同浓度的亚砷酸钠(NaAsO2)、氯化镉(CdCl2)、氯化汞(HgCl2)和顺丁烯乙酸二乙酯(DEM)作用后,用荧光素酶试剂盒物测LUC的表达量。结果DNA测序显示,EPRE调控的LUC稳定表达载体结构框架正确;LUC的表达量与受试物具有一定的剂量-效应关系,其中DEM的剂量-效应关系最明显。结论EPRE调控的转LUC基因细胞构建成功。; 李湘鸣罗方妮陈春波陈秀云吴玉娟李华玲; 关键词：环境污染物虫荧光素酶转基因细胞

重组酵母细胞快速筛选环境雌激素系统的建立被引量：12: 2006年; 目的建立环境雌激素的体外快速筛选方法。方法通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)插入LacZ(β-半乳糖苷酶)报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。观察了不同浓度的β-雌二醇(1×10-8、1×10-6、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10、100nmol/L)作用4和8h对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,以及3种重组酵母细胞细胞壁破碎法——冰冻法、超声波破碎法、氯仿化学裂解法对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,观察了不同浓度的苯甲酸雌二醇(200、1000、5000、25000、125000nmol/L)、β-雌二醇(0.0001、0.001、0.01、0.1、10、100、1000nmol/L)和双酚A(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10nmol/L)对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响。结果经PCR鉴定,雌激素调控的LacZ基因重组酵母细胞构建成功。重组酵母细胞暴露于β-雌二醇4和8h,时间-剂量-效应关系无明显变化;超声波破碎法对酵母细胞破碎效果最好,呈“S”型剂量-效应曲线;用超声波破碎法对3种受试物试验发现,β-雌二醇活力最强,双酚A次之,苯甲酸雌二醇活力最低。结论经雌激素受体介导的环境雌激素酵母评价系统成功建立且比较稳定。; 李湘鸣罗方妮陈春波; 关键词：雌激素酵母细胞内分泌干扰物

快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究被引量：6: 2005年; 通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)基本序列插入β-半乳糖苷酶的LacZ报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。结果表明:当环境雌激素作用于酵母细胞时,会使ER发生变构效应,与ERE结合使LacZ基因得以表达,其表达量与环境雌激素的污染程度具有剂量效应关系,通过检测β-半乳糖苷酶的活性,可反映环境雌激素的污染程度;与双酚A和苯甲酸雌二醇活性相比较,β-雌二醇活性最强,但双酚A活性明显高于苯甲酸雌二醇。; 李湘鸣罗方妮陈春波; 关键词：环境雌激素酵母雌激素受体

环境雌激素调控的β-半乳糖苷酶酵母细胞的建立被引量：6: 2005年; 为建立环境雌激素的酵母评价体系,将人工合成的雌激素效应元件插入pM P 206质粒的上游,并将该质粒转入人雌激素受体基因重组酵母细胞,使L acZ基因置于雌激素的调控之下,以构建可用于评价环境雌激素的酵母细胞。结果表明:经DNA测序发现pM P 206/ERE-L acZ报告质粒DNA框架正确,对转化子进行PCR鉴定,发现有雌激素受体基因和pM P 206/ERE-L acZ报告质粒的特异性条带,说明雌激素受体基因和受雌激素调控的L acZ报告基因已重组于酵母细胞,从而证明以L acZ为报告基因的环境雌激素酵母评价细胞重组成功。; 陈春波罗方妮李湘鸣; 关键词：环境雌激素酵母细胞基因重组

人雌激素受体cDNA在酵母细胞中的表达被引量：9: 2005年; 根据人全长雌激素受体cDNA序列,用RT-PCR方法使乳腺癌细胞MCF-7株扩增人雌激素受体基因(hERcDNA),通过pGEM-T/hER载体克隆到酵母表达载体中,并转化到酿酒酵母细胞中,用Westernblot法和免疫组化法检测hERcDNA的表达。结果表明:hERcDNA在酵母细胞中成功表达,可用于建立环境雌激素的酵母细胞检测体系。; 李湘鸣罗方妮陈春波陈秀云朱网娣; 关键词：环境雌激素酵母雌激素受体基因表达

基因重组细胞监测重金属污染物的实验研究被引量：1: 2007年; 研究用基因重组细胞快速评价重金属污染物对健康的危害,采用分子生物学方法,将亲电性化学反应元件(EPRE)与TK基本启动子和编码虫荧光素酶(LUC)基因相融合,构建成EPRE调控的LUC报告载体,将其转染于HeLa细胞.并将该细胞作用于不同浓度的NaAsO2、CdCl2和HgCl2,用荧光素酶试剂盒物测量LUC的表达量.结果表明,EPRE调控的LUC报告载体框架正确;LUC的表达量与3种受试物具有明显的剂量效应关系,细胞对3种受试物敏感性为As3+>Cd2+>Hg2+.; 李湘鸣罗方妮陈春波吴玉娟李华玲; 关键词：重金属污染物虫荧光素酶

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陈春波