张秀方
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生轻工技术与工程经济管理更多>>
- 粪肠球菌ace基因缺失突变株的构建
- 2016年
- 本研究旨在构建粪肠球菌胶原蛋白黏附素基因(ace)缺失突变株,为进一步探讨该基因编码的毒力因子Ace的功能奠定基础。利用pK18mobSacB质粒作为基因敲除载体,构建粪肠球菌ace基因重组自杀质粒pK001,通过体内同源重组筛选成功敲除ace基因的突变株,然后对突变株细菌黏附体外培养猪肠上皮细胞IPEC-J2及其细菌生物被膜形成的情况进行了检测。结果显示,同源重组后,经过卡那霉素抗性筛选、PCR及Southern blot鉴定,成功获得了ace基因缺失突变株肠球菌△ace。细菌生长曲线测定试验表明,ace基因敲除对细菌的生长繁殖并无明显影响,但体外生物被膜测定试验显示基因缺失突变株肠球菌△ace的生物被膜形成能力有所降低。本研究证实了毒力因子Ace对猪源粪肠球菌与宿主黏附的重要作用,该基因缺失突变株的构建为进一步的理论研究和疫苗研发奠定基础。
- 陈丽颖李英英刘肖张秀方张留君胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌基因敲除生物被膜
- 双重PCR检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门菌方法的建立与应用被引量：2
- 2015年
- 目的建立生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的双重PCR检测方法,并初步调查生鲜猪肉中大肠杆菌和沙门菌的污染情况。方法以大肠杆菌O157∶H7 rfb E基因和沙门菌inv A基因为靶基因设计引物。通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立快速检测大肠杆菌和沙门菌的双重PCR法。在郑州市不同地区的综合性超市、冷鲜肉专卖店和农贸市场随机抽检144份生鲜猪肉样品,分别进行了PCR检测和常规微生物学检验。结果建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到10 pg/μl。在144份样品中检测出大肠杆菌的样品数为10份,检出率为6.94%;检出沙门菌的样品数为13份,检出率为9.03%;大肠杆菌和沙门菌同时检出的有2份,占总样品的1.39%。结论初步建立了同步、简便、快速、灵敏地检测生鲜猪肉中大肠杆菌、沙门菌的双重PCR方法;生鲜猪肉中存在致病菌的污染问题,将威胁到食品安全和人体健康,不容忽视。
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 关键词：沙门菌双重PCR食源性致病菌食品安全
- 检测生鲜猪肉中大肠杆菌O157∶H7和沙门氏菌的双重PCR方法建立与应用
- 引言几年来,食源性致病菌是食源性疾病的首要因素。其多数爆发案例是通过致病性细菌污染食品而引起的。其中,大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)是两种重要的致病菌。猪肉作为我国消费量最...
- 张秀方武二丽刘肖张伟强胡慧邵刘云王亚宾陈丽颖
- 检测猪源粪肠球菌抗体的间接ELISA方法建立
- 根据GenBank已发表粪肠球菌Ace基因(Genbank NO.AF260879)的核苷酸序列设计l对引物,通过PCR扩增ace基因保守序列A片段部分序列,将其克隆到pET-32a(+)裁体中,构建了原核表达载j-pE...
- 陈丽颖张祥刘肖张秀方武二丽张伟强胡慧王亚宾
- 关键词：粪肠球菌原核表达ELISA
- 动物源性肠球菌多位点序列分型及质粒检测
- 肠球菌是一类球形或卵圆形，不形成芽孢，常以成对或短链形式存在的需氧或兼性厌氧的革兰氏阳性球菌，且为条件性致病菌，广泛存在于水、土壤等环境中，是人和动物体胃肠道正常菌群之一，粪肠球菌和屎肠球菌是其优势菌种。临床上由于抗生素...
- 张秀方
- 关键词：动物医学肠球菌多位点序列分型
- 生鲜猪肉中致病性球菌的双重PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2014年
- 以金黄色葡萄球菌clfa基因和溶血性链球菌sdy基因为靶基因设计引物.通过对单个基因PCR和多重基因PCR扩增进行特异性、敏感性试验以及优化反应体系,建立了快速检测溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌的双重PCR方法.在郑州市不同地区随机抽检126份生鲜猪肉样品,分别进行了双重PCR检测和常规微生物学检验.结果表明,建立的双重PCR方法特异性好,抗干扰能力强,灵敏度可达到102ng·L-1.在126个样品中检测出溶血性链球菌的样品数为7份,检出率为5.55%;检出金黄色葡萄球菌阳性的样品数为8份,检出率为6.35%.
- 李英英邵刘云刘肖张秀方胡慧王亚宾陈丽颖
- 关键词：金黄色葡萄球菌溶血性链球菌猪肉双重PCR
