高玲
- 作品数：3 被引量：25H指数：3
- 供职机构：南京农业大学食品科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 芽孢杆菌产抗菌脂肽调控基因快速检测被引量：11
- 2016年
- [目的]本文旨在建立一种利用PCR技术鉴别抗菌脂肽类型和筛选抗菌脂肽产生菌的快速、准确、灵敏的方法。[方法]以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、淀粉液化芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)和多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)的典型菌株为研究对象,针对几种代表性脂肽的合成酶基因设计特异性引物进行PCR扩增,并通过测序法验证检测结果的正确性,推测芽孢杆菌生物合成抗菌物质的潜在能力。[结果]PCR结果表明:所有检测菌株均具有Surfactin合成酶调控基因;除P.polymyxa JSa-9外,其他菌株均检测到Fengycin合成酶基因的存在;而Iturin合成酶基因仅在B.amyloliquefaciens ES-2中检测得到;B.subtilis fmbj、B.subtilis fmbR、B.subtilis fmbR-2、B.amyloliquefaciens ES-2和P.polymyxa JSa-9-81均具有Bacillomycin D合成酶调控基因;B.subtilis fmbR、PB2、fmbj、PB198、fmb4、fmb2和fmb3菌株中发现了Subtilosin A合成酶基因的存在;而只有P.polymyxa JSa-9和P.polymyxa JSa-9-81检测到Polymyxin合成酶调控基因。[结论]基于PCR快速检测和测序相结合的方法,我们建立了一种抗菌脂肽产生菌快速识别、筛选和抗菌脂肽快速鉴定的方法,该方法具有快速、灵敏度高、特异性强等特点。
- 曲晓旭刘洪霞高玲陆兆新吕凤霞张充赵海珍别小妹
- 关键词：芽孢杆菌调控基因
- 多黏类芽孢杆菌JSa-9电转化方法的优化被引量：7
- 2014年
- 为建立多黏类芽孢杆菌JSa-9菌株的高效电击转化体系,本实验研究菌体培养时间、电场强度、电击缓冲液、质粒用量以及电击后复苏培养时间等因素对JSa-9菌株电转化效率的影响。结果表明:Paenibacillus polymyxa JSa-9培养至OD595 nm为0.3时,电转化效率最高,为0.12×103 CFU/μg DNA;用0.5 mol/L甘露醇、0.5 mol/L山梨醇以及10%甘油的电击缓冲液洗涤细胞,在电场强度17.5 kV/cm、电阻200Ω,电容25μF的电击条件下,加入1.0μg/100·mL质粒DNA,复苏培养时间18 h,电转化效率达到约为0.36×103 CFU/μg DNA;制备P.polymyxa JSa-9原生质体,在电场强度5.0 kV/cm的电击条件下,加入0.8μg/100·mL质粒DNA,电转化效率较感受态电转提高到约1.0×103 CFU/μg DNA。
- 高玲邓阳陆兆新吕凤霞别小妹
- 关键词：电转化
- Bacillus subtilis 168菌株产surfactin改造被引量：8
- 2014年
- 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168菌株基因组中含有编码surfactin合成酶系的srfA操纵子,却不产抗菌肽surfactin。运用同源重组的方法将外源的有活性的sfp基因(编码4'-磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶)整合入B.subtilis 168中,将其改造为产surfactin的菌株。通过分析多株枯草芽孢杆菌和解淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的sfp基因,从基因的上、下游找出较为保守的区域,设计引物,从枯草芽孢杆菌Nja-9中扩增sfp基因,将获得的sfp基因与P43启动子和终止子相连,构建了sfp基因表达框,并连接于枯草整合质粒pDG1730上,最终构建了枯草芽孢杆菌整合质粒pST-1730,利用pST-1730本身的淀粉酶E基因与B.subtilis 168菌株的基因组DNA进行同源重组整合,获得了产surfactin的重组菌株B.subtilis121。本研究为surfactin合成酶基因的改造和分析奠定了基础。
- 刘丽霞高玲别小妹陆兆新张充吕凤霞
- 关键词：同源重组BACILLUSSUBTILISSURFACTIN
