肖昌 作品数:35 被引量:72 H指数:6 供职机构: 西南大学生物技术学院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 理学 更多>>
亨得拉和尼帕病毒结构蛋白的表达及抗原表位研究 为有效防治亨得拉病毒(Hendra virus HeV)和尼帕病毒(Nipah virus NiV)在我国的发生和流行,本研究首先利用原核表达系统成功地表达HeV N、NiV N基因以及NiV G一段主要抗原区基因GC,... 肖昌关键词:尼帕病毒 结构蛋白 抗原表位 文献传递 猪瘟病毒E2基因在昆虫细胞中的分泌表达及活性检测 被引量:6 2005年 The glycoprotein E2 contains major antigenic determinants and involved in inducing neutralization antibodies.A truncated form of the CSFV glycoprotein E2 was expressed in baculovirus.The signal sequences of E2 gene were replaced with the honeybee melittin signal sequence,allowing efficient entrance into the secretory pathway in insect cell.In addition,the hydrophobic transmembrane anchors at the carboxyl termini of E2 proteins were removed to enable secretion rather than maintenance in the cellular membranes.Recombinant E2 protein was purified from the supernatant of infected cells by employing Ni2+ affinity chromatography.Protein purified was recognized by at least three anti-E2 pig sera and WH211 monoclonal antibody.WH211 monoclonal antibody couldn′t recognize the protein expressed in E.coli,indicating that it retain native structure.Thus,E2 expressed in insect cells can be used as a tool for diagnostic tests as well as obtaining material that could be suitable for X-ray crystallography studies. 查云峰 徐兴然 肖昌 余兴龙 涂长春关键词:猪瘟病毒 E2基因 杆状病毒表达系统 分泌表达 树鼩CD127全长编码序列的克隆及分子特征分析 2012年 目的树鼩可作为多种人类疾病研究的良好模型,但其免疫系统各类细胞表面标志、功能以及在疾病发生、发展过程中的作用和意义尚无系统研究。研究以获得树购调节性T细胞(Tr)相关分子CD127为目的,以分析其分子特征。方法提取树胸外周血总RNA反转录,经巢式PCR扩增获得目的片段,进而以DiscoveryStudio等生物软件进行分析。结果扩增得到全长为1392bp的树鼩CD127编码序列,确定了现有数据库中缺失的一处未知片段。树鼩CD127与人、黑猩猩亲缘关系较近,其氨基酸序列具有较高保守性,蛋白质三维结构整体与人相似,但N糖基化位点数目以及电荷分布存在差异。结论所得序列能够编码具有正常功能的蛋白,全长序列为后续单克隆抗体制备奠定了基础,有助于鉴定树鼩Treg细胞以及相关疾病机理的研究。 田巍威 高跃东 郭彦 黄京飞 肖昌 李作生 张华堂关键词:树鼩 CD127 单克隆抗体 牛病毒性腹泻病病毒Changchun184株E2基因的克隆及在大肠杆中的高效表达 被引量:10 2005年 根据GenBank已发表的多个BVDV_1序列的比较分析结果设计引物 ,应用RT_PCR及套式PCR克隆得到包含Changchun184 (CC_184 )株E2基因的片段F2 /R2 ,克隆、测序分析结果表明该片段大小为 1391bp ,软件分析结果表明CC_184株E2基因长度为 112 2bp(GenBankaccessionnumber:AF5 2 6 380 )。通过基因操作构建得到表达完整E2蛋白和去除E2蛋白C_端疏水区的重组质粒 pET2 8a_BE2和 pET2 8a_BE2m ,转化大肠杆菌并诱导目的蛋白表达 ,SDS_PAGE检测结果表明重组菌能表达目的蛋白 ,其表达量分别占菌体总蛋白的 6 2 5 %和 35 7%。 徐兴然 涂长春 余兴龙 肖昌 张青婵 张丽颖 查云峰 史子学关键词:E2基因 克隆 尼帕病毒和亨得拉病毒核蛋白基因在杆状病毒表达系统的表达及反应原性鉴定 被引量:3 2006年 利用改造的昆虫杆状病毒表达系统转移载体,成功地对尼帕病毒(NiV)和亨得拉病毒(HeV)的核蛋白基因进行了分泌表达。重组蛋白表达的时效性分析结果显示,Sf9细胞感染重组病毒72~96h后,蛋白的表达量达到高峰,大规模表达可分别获得2.3~2.4mg/L纯化的目的蛋白。应用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)对两种重组N蛋白与兔抗NiV和HeV阳性血清的反应性进行鉴定,结果表明两种重组N蛋白和阳性血清有很好的反应性,并且在血清学上有交叉反应。该研究为今后开展流行病学调查和诊断试剂的研制打下了基础。 肖昌 徐兴然 查云峰 张玉静 宣华 涂长春关键词:尼帕病毒 核蛋白 杆状病毒 反应原性 猪瘟病病原生态学和分子流行病学研究 涂长春 王在时 吕宗吉 丘惠深 余兴龙 王琴 刘思国 赵耘 肖昌 宁宜宝 马钢 郎洪武 张茂林 宋立 张广川 猪瘟是危害我国养猪业的重要传染病。尽管常规的综合防制措施起到一定的防制作用,但该病仍在我国广大地区发生和流行,原来十分有效的疫苗常常不能诱导机体产生有效的免疫保护,给疫病免疫预防工作带来了诸多影响。同时,我们对国内猪瘟病...关键词:关键词:分子流行病学 病原生态学 猪瘟病毒 球虫和其他原虫(续) 2014年 若7~14日龄的仔猪出现腹泻且抗生素治疗无效,则暗示有猪等孢球虫感染。鉴别诊断时应考虑其他致病因子,如肠致病性大肠杆菌、传染性胃肠炎(TGE)病毒、轮状病毒、C型产气荚膜梭状芽孢杆菌和蓝氏类圆线虫(Strongyloidesransomi)等。 肖昌 何闪 David S.Lindsay Jitender P.Dubey Mónica Santín-Durán Ronald Fayer关键词:球虫感染 产气荚膜梭状芽孢杆菌 原虫 传染性胃肠炎 致病因子 通过基因组定量研究猪瘟病毒在细胞中的增殖特性 应用间接免疫荧光、Real-time PCR和病毒感染滴度(TCID50)测定技术,分别从病毒基因表达产物、病毒基因组RNA复制水平和病毒感染滴度变化三个方面,研究了猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖的特点,间接免疫荧光检测... 徐兴然 肖昌 查云峰 史子学 涂长春关键词:猪瘟病毒 增殖 文献传递 p15在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达 被引量:1 2009年 为探讨鸡p15蛋白的特性及其在细胞周期抑制通路中与其他蛋白的作用,本研究选用昆虫细胞表达系统来表达有活性的p15蛋白。为后期纯化的需要,对pFAST供体质粒的多克隆位点进行了重新改造,并成功构建带有TAP纯化标签的供体质粒pFAST-NMCS-N-TAP-p15和pFAST-NMCS-C-TAP-p15。将2个供体质粒转化到DH10Bac感受态菌中,对阳性转化子Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15进行反复涂板的去阴性单克隆纯化,提取大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15并进行转座鉴定。将纯化的大质粒Bacmid-N-TAP-p15和Bacmid-C-TAP-p15转染入sf9昆虫细胞中,72h后收集培养上清中的杆状病毒,并进行病毒的扩增和滴度测定,结果所获2株重组杆状病毒N-TAP-p15和C-TAP-p15的滴度分别为3.6×107,5.4×107pfu/mL。将2株高滴度的重组杆状病毒再感染新培养的sf9昆虫细胞进行重组p15蛋白的表达,结果与对照组相比,重组p15融合蛋白得到了有效的表达,表达量分别为4.32%和4.7%。Western blotting结果表明,所表达的重组p15融合蛋白只特异地与p15单克隆抗体和兔的IgG反应而未与其他细胞蛋白反应;说明带有TAP标签的重组p15融合蛋白在昆虫细胞表达系统中得到了有效表达。 艾永兴 肖昌 郝军元 胡薇 潘风光 郑梅竹 张玉静关键词:P15 TAP 杆状病毒 益生菌防控肉鸡坏死性肠炎的研究进展 被引量:2 2022年 肉鸡坏死性肠炎(necroticenteritis,NE)是产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)导致的严重肠道疾病,每年给养禽业带来巨大的经济损失。由于以前广泛使用饲用抗生素,该病得到了有效的控制,然而,近年来由于耐药性菌株的出现以及药物残留问题,世界各国相继出台了限制或禁用抗生素生长促进剂的监管法规。随着肉鸡无抗生产模式的推行,该病的发病率已逐年提高,严重影响肉鸡的生产,因而迫切需要找到能有效控制肉鸡坏死性肠炎的抗生素替代方案。益生菌是能在肠道中存活并抑制病原菌过度繁殖的有益细菌,研究证实益生菌在控制肉鸡坏死性肠炎方面确实有效,且生产成本相对低,故已成为控制肉鸡坏死性肠炎的研究热点。本文对近年来使用益生菌控制肉鸡坏死性肠炎的相关研究进展进行了总结,以深入了解益生菌的作用机理,同时也为无抗时代的肉鸡坏死性肠炎防控提供有益参考。 雷蕾 帅柯 杨汉博 肖昌关键词:肉鸡 坏死性肠炎 产气荚膜梭菌 益生菌