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王飞: 作品数：17 被引量：18H指数：3; 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金中国博士后科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>

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Am80和TSA对鸡Stra8基因启动子活性的调控作用: [目的]确定苏秦黄鸡Stra8 基因启动子的主要调控区域和预测调控元件的结合位点,探索用他米巴洛丁(Am80)或曲古抑菌素(TSA)诱导对Stra8 启动子活性的调控作用。[方法]将苏秦黄鸡Stra8 基因5'侧...; 王飞; 关键词：启动子活性调控元件 TSA

CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除被引量：8: 2016年; 本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。; 左其生王颖洁赵瑞丰程少泽汪怡临靳锴王飞纪艳芹路镇宇张文慧张亚妮李碧春; 关键词：基因敲除

如皋黄鸡功能未知基因C1EIP表达载体的构建及其抗小鼠血清制备被引量：1: 2017年; 为了深入研究鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程,基于RNA-Seq基础,筛选出功能未知且差异极其显著的关键基因C1EIP,PCR克隆得到其编码区全长序列409bp,构建其真核表达载体pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,实现C1EIP在真核细胞内的定位表达,并以PEI包裹pcDNA3.0-C1EIP后免疫小鼠制备抗血清。间接免疫荧光检测抗血清效价为1∶10,RT-PCR和Western blot证实C1EIP真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,为C1EIP基因在ESCs向雄性生殖细胞分化过程中的功能研究奠定了基础。; 李东王飞纪艳芹汪怡临王曼张晨王颖洁何娜娜靳锴路镇宇程少泽张亚妮李碧春; 关键词：如皋黄鸡真核表达抗血清

大白猪MYOD1、AKT3基因启动子区多态性及生物信息学分析被引量：3: 2019年; 为探究MYOD 1和AKT 3基因启动子区的多态性及其可能存在的影响基因表达的分子调控机制,试验采用PCR直接测序的方法对大白猪MYOD 1和AKT 3基因启动子区的多态性进行检测,同时利用生物信息学分析方法预测了大白猪MYOD 1和AKT 3基因的核心启动子区、CpG岛和转录因子结合域。结果显示,MYOD 1基因共预测到5个核心启动子区、1个CpG岛区域和10个转录因子结合域,且第5个核心启动子区位于CpG岛区域内;AKT 3基因共预测到6个核心启动子区,未发现CpG岛的存在。通过直接测序的方法检测到MYOD 1基因在G-361T处存在1个SNP突变,但在本试验群体中只发现1种基因型,同时该突变位点位于第1个核心启动子区内;AKT 3基因在启动子区T-1709C处存在1个SNP突变,包括TT、TC和CC 3种基因型,其中TT基因型为优势基因型,T为优势等位基因。遗传多态性分析提示,该突变位点多态信息含量(PIC)介于0.25~0.5之间,表现为中度多态。本研究初步探究了大白猪MYOD 1和AKT 3基因启动子区的多态性并预测了启动子区可能的调控因子和调控元件,为进一步研究MYOD 1、AKT 3基因对肌肉生长发育的调控机制及将突变位点作为遗传标记用于分子选育提供指导和依据。; 王飞宗秋芳慕京生吴圣龙包文斌; 关键词：MYOD AKT 启动子多态性生物信息学

鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选: 本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SS...; 李东纪艳芹王颖洁王飞路镇宇何娜娜靳锴汪怡临程少泽王曼张文慧张晨赵瑞丰张亚妮李碧春; 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因

鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定被引量：1: 2022年; 拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV)VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂。以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达。以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳性杂交瘤细胞;采用截短表达CIAV VP2基因方法鉴定mAb识别的抗原表位。结果显示:成功获得了1株能稳定分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的杂交瘤细胞株,并命名为CIAV-VP2-4A12;亚类鉴定结果表明,该mAb重链为IgG_(1)型,轻链为kappa链;Western blot结果显示,该mAb可以识别大肠杆菌,Sf9细胞和转染pCAGGS-VP2-Flag的DF1细胞中表达的VP2蛋白。使用原核表达截短蛋白进行表位鉴定,发现该mAb识别抗原表位序列是^(155)KTVRW^(159),序列比对发现该表位在CIAV中高度保守。本研究成功制备了针对CIAV VP2蛋白的特异性mAb,并精确鉴定了其识别表位,为VP2蛋白功能的研究以及CIAV的诊断方法研发提供了有效工具。; 汪铭锐吴俊花王飞邵红霞邵红霞钱琨叶建强; 关键词：鸡传染性贫血病毒 VP2蛋白单克隆抗体抗原表位

脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制的研究: [目的]探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据.[方法]采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonicstem cell,ESC)、原始生殖细胞...; 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春; 关键词：RNA-SEQ 雄性生殖细胞视黄酸脂代谢

TGFβ信号通路对鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用研究: 前言生殖细胞在有性繁殖的生物中肩负着将遗传信息在世代中传递的任务，并能代替胚胎干细胞(ESCs)用于治疗和遗传修饰，而不涉及伦理和免疫排斥问题。但是，如何在体外培养条件下获得大量的精原干细胞(SSCs)并使其能够产生具有...; 张亚妮施青青王颖洁左其生李东连超毕瑜林王飞纪艳芹路镇宇李碧春; 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化

CRISPR/Cas9介导CPED1基因敲除载体活性的验证被引量：2: 2017年; 试验旨在利用CRISPR/Cas9技术分别在鸡成纤维细胞DF-1和鸡胚胎干细胞(Em-bryomic stem cell,ESCs)上介导CPED1基因敲除,以期为后续研究CPED1基因功能提供技术依据。克隆CPED1基因全长;构建cas9/g RNA载体并转染DF-1和ESCs,经流式分选阳性细胞,采用T7E1酶切法选择活性最佳的敲除载体并分析其敲除效率;同时,对DF-1中的脱靶效率进行检测。结果成功克隆鸡CPED1基因,并构建3个cas9/g RNA载体;T7E1酶切结果表明cas9/g RNA1载体在DF-1阳性细胞中的敲除活性(37%)最佳,该载体也可定点敲除ESCs中的CPED1基因,敲除活性为25%,且在DF-1细胞中未发生脱靶。表明CRISPR/Cas9可有效介导鸡CPED1基因在DF-1和ESCs上敲除。; 王飞何娜娜王颖洁纪艳芹张亚妮李碧春

蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控被引量：1: 2016年; 【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相较于对照组细胞增殖缓; 李东汤贝贝王颖洁纪艳芹王飞路镇宇王曼张亚妮李碧春; 关键词：鸡胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞雄性生殖细胞

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