张永芳
- 作品数：8 被引量：45H指数：5
- 供职机构：宁夏医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金宁夏回族自治区自然科学基金更多>>
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- 单次热应激对小鼠睾丸增殖细胞的影响被引量：2
- 2015年
- 目的明确单次热应激对小鼠睾丸增殖细胞的影响。方法 6周龄雄性C57小鼠36只,随机分为热处理组和对照组。小鼠热处理组单次43℃水浴,干预15 min,于1、7和14 d取材,HE染色观察睾丸结构形态,免疫组织化学染色检测增殖细胞定位及变化,Western Blot检测Ki67蛋白表达,并进行统计学分析。结果应激处理组生精小管排列疏松,曲细精管中细胞数量明显减少甚至消失,细胞散落在曲细精管中;免疫组化可见,增殖细胞呈现动态变化过程,单次热应激处理后1 d增殖细胞显著减少,第7、14天增殖细胞数量开始慢慢恢复;Western Blot可见KI-67表达量在热应激处理后7 d表达量显著降低,第14天表达量慢慢恢复,且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠睾丸经43℃水浴单次热应激15 min后,增殖细胞的动态恢复是后期精子生成的结构基础。
- 田洪成马文智马会明蒲静杨晓霞张永芳王永峰王蒙蒙李昕马良宏裴秀英王燕蓉
- 关键词：热应激睾丸增殖细胞
- 生长分化因子-9下调对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力的影响被引量：5
- 2016年
- 目的探讨生长分化因子-9(GDF9)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力基因周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶抑制因子27(p27kip1)表达的影响。方法利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;使用流式细胞术、Real-time PCR和Western blot法验证GDF9 siRNA的干扰效率;采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞增殖cyclin A、cyclin D1和p27kip1 mRNA和蛋白表达情况。结果 GDF9 siRNA显著抑制颗粒细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P<0.05);Real-time PCR和Western blot法检测结果显示GDF9 siRNA显著下调小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9 mRNA及蛋白的表达(P<0.01);Realtime PCR法检测结果显示,细胞cyclin A、cyclin D1 mRNA表达降低,p27kip1 mRNA表达增强;Western blot法结果显示,GDF9 siRNA可促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1的表达,同时下调G2/M期调控蛋白cyclin A、cyclin D1的表达。结论靶向抑制小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9的表达,下调细胞cyclin A、cyclin D1的表达,上调P27 kip1的表达,显著抑制细胞的增殖。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昀伽蒲静于佳王燕蓉裴秀英徐仙
- 关键词：GDF9SIRNA卵巢颗粒细胞小鼠
- α-硫辛酸对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤和凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨α-硫辛酸对小鼠颗粒细胞培养过程中抗氧化水平和抗凋亡水平的影响。方法收集经PMSG处理的小鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24h后,添加终浓度为100μmol/L的α-硫辛酸继续培养24h,测定氧化水平SOD、MDA和GSH-Px参数,评价抗氧化能力,采用Trizol法提取各组细胞的RNA,进行RT-PCR法检测α-硫辛酸对caspase-3和caspase-9基因的表达情况的影响,同时利用细胞免疫荧光和ELISA法检测caspase-3和caspase-9蛋白表达,并分析α-硫辛酸降低细胞凋亡的作用。结果分离培养的小鼠卵巢颗粒细胞α-硫辛酸添加后,SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低(P<0.05);经过RT-PCR扩增技术获得长度为180bp的特异性caspase-3产物,获得长度为152bp的特异性caspase-9产物,α-硫辛酸添加可显著性降低caspase-3和caspase-9mRNA的表达(P<0.05);免疫荧光细胞化学染色显示颗粒细胞caspase-3和caspase-9蛋白阳性染色定位于细胞胞质,分别呈现绿色荧光和红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;ELISA结果显示α-硫辛酸添加后caspase-3和caspase-9酶活性显著下调(P<0.05)。结论小鼠颗粒细胞培养过程中添加α-硫辛酸可明显改变细胞抗氧化能力,对卵巢颗粒细胞培养过程中的氧化应激诱导的细胞凋亡起到一定的保护作用。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昕王永峰田洪成裴秀英王燕蓉
- 关键词：Α-硫辛酸氧化应激卵巢颗粒细胞小鼠
- 二甲双胍对多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞胰岛素受体底物-1及其磷酸化表达的影响
- 目的： 1.体外分离培养多囊卵巢综合征（PCOS）和非PCOS患者黄素化颗粒细胞并用卵泡刺激素受体（FSHR)免疫荧光鉴定;2.探讨二甲双胍（Met）对PCOS黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物-1（IRS-1）及p-ser...
- 张永芳
- 关键词：二甲双胍胰岛素受体底物-1黄素化颗粒细胞多囊卵巢综合征磷酸化
- 文献传递
- EGF通过PI3K/AKT通路介导小鼠卵巢颗粒细胞增殖被引量：15
- 2014年
- 目的探讨表皮生长因子(EGF)介导,经PI3K/AKT信号通路调控小鼠卵巢颗粒细胞增殖的作用与机制。方法取分离纯化的小鼠卵巢颗粒细胞,添加10ng·mL-1的EGF对其培养24h后,然后再添加20μM浓度的P13K抑制剂LY294002处理细胞72h,利用CCK-8检测颗粒细胞增殖情况;应用Real-time PCR法检测AKT mRNA的表达;应用Western blot法检测体外培养小鼠颗粒细胞中总AKT(t-AKT)及磷酸化AKT Thr308位点(p-AKTThr308)蛋白的表达情况。结果 (1)10ng·mL-1的EGF对小鼠颗粒细胞增殖效应明显,能够显著提高AKT基因在颗粒细胞中的表达(P<0.05),能显著性促进t-AKT及p-AKTThr308蛋白的表达(P<0.05)。(2)PI3K特异性抑制剂LY294002明显抑制EGF促进颗粒细胞增殖的效应(P<0.05)。结论EGF能活化小鼠颗粒细胞的PI3K/AKT信号通路,促进颗粒细胞生长、增殖。
- 马会明黑常春张永芳蒲静于佳孙苗张宁曹秀琴冯秀珍马苗苗裴秀英王燕蓉
- 关键词：PI3K/AKT信号通路卵巢颗粒细胞小鼠
- 环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠模型的研究被引量：13
- 2015年
- 目的探讨化疗药物环磷酰胺(CTX)致大鼠卵巢早衰(POF)模型的血清生殖激素水平、卵巢细胞凋亡和间质损伤等特征。方法以10周龄雌性SD大鼠为研究对象,以50mg·kg-1的首剂量腹腔注射环磷酰胺,再以8mg·kg-1连续腹腔注射14d,建立POF模型。对照组为未注射CTX的雌性SD大鼠。观察并比较两组大鼠体重、血清激素水平、卵巢组织的形态学改变、卵巢间质损伤程度、卵巢颗粒细胞凋亡蛋白定位及半定量表达。结果 1模型组大鼠注射CTX后体重低于对照组和注射前(P<0.05);2模型组大鼠动情周期紊乱,间期持续或延长;与对照组比较,血清E2及AMH下降,FSH和LH升高(P<0.05);3卵巢间质纤维化,血管标记蛋白CD34染色卵巢血管减少;4模型组大鼠卵巢卵泡颗粒细胞Casepase3、Bax免疫组织化学染色阳性,Bcl-2呈弱阳性;5与对照组比较,模型组卵巢组织Caspase-3蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CTX致大鼠模型的血清生殖激素异常,卵巢间质纤维化,颗粒细胞凋亡,大鼠卵巢功能过早衰竭。
- 张永芳马会明王永峰李永丽梁蕾梁蕾王燕蓉裴秀英
- 关键词：卵巢早衰生殖激素凋亡环磷酰胺
- 雌激素对卵巢颗粒细胞雌激素受体-β和转录因子叉头蛋白3表达的影响被引量：6
- 2016年
- 目的探讨雌激素(E2)对雌激素受体-β(ER-β)与转录因子叉头蛋白3(FoxO3)的表达及其对卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的影响。方法利用添加1μmol/L的E2或100 nmol/L ICI182.780的TCM199培养基体外培养卵巢颗粒细胞;采用WST比色法检测不同培养条件下卵巢颗粒细胞的增殖;RT-PCR和Real-time PCR检测ER-β与FoxO3 mRNA的表达,采用细胞免疫荧光和Western blotting检测ER-β与FoxO3的表达。结果 E2能促进卵巢颗粒细胞增殖,而ICI182.780抑制卵巢颗粒细胞增殖;RT-PCR扩增结果与理论值符合,Real-time PCR结果显示,ICI182.780与E2比较,ER-βmRNA表达下调,FoxO3 mRNA表达上调(P<0.05);Western blotting法结果显示,ER-β和FoxO3蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),灰度值分析显示添加E2中ER-β蛋白表达升高,FoxO3蛋白下降(P<0.05),添加ICI182.780中的ER-β表达下调,FoxO3表达上调,与E2比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E2可提高ER-β的表达,降低FoxO3的表达,影响卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昕王永峰田洪成胡蓉王燕蓉裴秀英徐仙
- 关键词：雌激素雌激素受体-Β卵巢颗粒细胞
- 二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。
- 张永芳王蒙蒙李昕王永峰裴秀英王燕蓉马会明徐仙
