翁代慧
- 作品数：14 被引量：21H指数：3
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：中国肝炎防治基金国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建
- 2015年
- 目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。
- 赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠模型
- 2型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及其相互作用蛋白的纯化被引量：2
- 2015年
- 目的构建2型登革病毒(DENV2)非结构蛋白3(NS3)与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化(TAP)法获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV2基因序列,设计引物;以DENV2 c DNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体p CI-SF,获得重组表达质粒p CI-NS3-SF;将上述重组质粒通过转染试剂LipofectamineTM2000瞬时转染进入HEK293T细胞,Western blot法验证NS3融合蛋白的表达;通过TAP法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用TAP系统分离得到与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法可以有效的分离与DENV2 NS3相互作用的细胞蛋白。
- 翁代慧雷迎峰董阳超韩佩君叶传涛杨敬王媛尹文
- 关键词：登革病毒NS3串联亲和纯化
- 中国汉族人群2型糖尿病患者亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与同型半胱氨酸水平的研究被引量：4
- 2010年
- 目的 观察2型糖尿病患者亚甲基四氢叶酸还原酶基因单核苷酸多态性不同基因型间同型半胱氨酸水平的变化.方法 应用荧光标记单碱基延伸分型技术及寡核苷酸微阵列芯片杂交技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因的3个标签单核苷酸多态性;应用酶循环法检测血清同型半胱氨酸水平.结果 2型糖尿病组同型半胱氨酸水平（13.37±9.37 μmol/L）明显高于健康对照组（11.56±4.01 μmol/L）（P〈0.05）.rs6541003多态性AA基因型中2型糖尿病组血清同型半胱氨酸水平（13.80±10.35 μmol/L）显著高于对照组（11.45±4.11 μmol/L） （P〈0.05）.2型糖尿病组rs1801133（11.64±5.21 μmol/L vs 15.83±13.08 μmol/L）和rs9651118（9.47±5.22 μmol/L vs 14.31±11.09 μmol/L）多态性CC基因型患者血清同型半胱氨酸水平均显著低于同组TT型（P〈0.05）.结论 我国汉族人群2型糖尿病患者的3个标签单核苷酸多态性的基因型可能与亚甲基四氢叶酸还原酶酶活性及同型半胱氨酸代谢有关.
- 张阳东时磊于敏翁代慧刘晨
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶单核苷酸多态性同型半胱氨酸
- 丙型肝炎病毒河北株E2蛋白胞外核心区的真核表达及应用
- 2016年
- 目的真核细胞表达丙型肝炎病毒(HCV)河北株E2蛋白胞外核心区(E2c)并利用E2c蛋白检测HCV患者血清中特异性抗E2蛋白抗体水平。方法以HCV1b型(河北株)基因序列为基础,设计HCV1b E2c基因序列并通过基因拼接的方法合成;将含有组织型纤溶酶原激活物(t PA)信号肽的E2c扩增产物克隆入p CI-neo真核表达载体,获得p CI-tpa-1b E2c载体;将p CI-tpa-1b E2c真核表达载体转染HEK293T细胞,收集细胞上清后进行浓缩及纯化,Western blot法鉴定蛋白特异性;以获得E2c蛋白为抗原,建立基于雪花莲凝集素(GNA)的改良ELISA检测HCV患者血清特异性抗E2c抗体水平。结果成功利用真核表达系统表达获得E2c蛋白,建立了GNA改良ELISA检测HCV患者血清中抗E2蛋白抗体的方法。结论成功在HEK293T细胞表达HCV-1b E2c蛋白并进行了临床应用。
- 叶传涛边培育翁代慧张会杨敬张颖雷迎峰贾战生
- 关键词：真核表达
- 2型糖尿病患者外周血管家基因表达水平比较被引量：3
- 2011年
- 目的观察管家基因β-肌动蛋白（β-actin）、信号识别颗粒14（SRP14）和18S—rRNA在2型糖尿病（T2DM）患者和健康对照人群外周血中的表达差异。方法提取外周血白细胞RNA，经逆转录和聚合酶链反应，应用荧光标记技术及GenomeLabGeXP基因表达分析系统检测3个管家基因的表达水平。结果3个管家基因在T2DM组和健康对照组中SRP14表达的差异最小，β-actin次之，18S—rRNA的表达差异较大。结论管家基因SRP14和β-actin可作为检测T2DM相关基因表达水平的内部参考基因。
- 张阳东楚瑞雪时磊陈珂于敏翁代慧
- 关键词：管家基因2型糖尿病
- 分离胶真空采血管对常规生化指标测定结果的影响
- 目的观察分离胶管对常规生化标本测定结果的影响,为标本能否作近期复检提供依据。方法采用浙江拱东医用塑料厂提供,规格13×100m m的分离胶真空采血管。随机抽取使用分离胶真空采血管的血标本50份,检测常规生化项目,然后低温...
- 张阳东董书魁于敏马盈盈翁代慧
- 文献传递
- 表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。
- 乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒
- 2-型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及与其相互作用蛋白的亲和纯化
- 目的：构建2-型登革病毒(dengue virus-2,DENV-2)非结构蛋白NS3 与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)获得与NS3 相互作...
- 翁代慧吕欣张芳琳韩佩君尹文雷迎峰徐志凯
- 关键词：登革病毒NS3串联亲和纯化
- 中国汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与2型糖尿病的相关性研究被引量：11
- 2010年
- 目的观察中国汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因的单核苷酸多态性与2型糖尿病的相关性。方法提取受检者外周血有核细胞DNA，应用荧光标记单碱基延伸分型技术及寡核苷酸微阵列芯片杂交技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶基因的3个标签单核苷酸多态性rs6541003，rs1801133和rs9651118。结果2型糖尿病组rs6541003的AG基因型频率（0．202VS0．309）和G等住基因频率（0．135VS0．211）明显低于健康对照组（P〈0．05）。两组rs1801133和rs9651118的基因型频率及等位基因频率差异无统计学意义（P〉0．05）。由3个标签单核苷酸多态性构建的单倍型频率在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论中国汉族人群亚甲基四氢叶酸还原酶基因rs6541003多态性与2型糖尿病具有相关性。
- 张阳东时磊于敏翁代慧刘晨李晓宁
- 关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶2型糖尿病单核苷酸多态性单倍型
- 实时检测HCV RdRp酶活性的真核表达载体的的构建与功能检测
- <正>目的构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-(-)5′UTR-EMCV IRES-DsRed2-rvGLuc-(-)3′UTR并进行功能检测。方法设计含有HCV负链5′UTR序列、负链3′UTR序列、EMCVIRE...
- 韩佩君吕欣雷迎峰杨敬姚敏乔卿华翁代慧赵海卫党品香尹文
- 文献传递
