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杨冠恒: 作品数：14 被引量：6H指数：1; 供职机构：上海交通大学附属儿童医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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小鼠胎肝单个核细胞行骨髓腔内注射重建造血系统的效果被引量：2: 2019年; 目的·观察用小鼠胎肝单个核细胞悬液行骨髓腔内注射以重建小鼠造血系统的效果。方法·用Ficoll分离技术获取胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞悬液,采用磁珠分选的方法获得造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)并计数。以骨髓腔内注射的方法对137Cs辐射清髓后的小鼠胫骨进行小鼠胎肝单个核细胞移植。对移植后的受体小鼠通过血常规检测、血涂片及骨髓涂片镜检的方法观察造血系统的重建情况。对受体小鼠移植后1年骨髓中的供体HSC进行流式细胞检测。结果·胎龄13.5 d的小鼠胎肝单个核细胞中HSC占0.171%。小鼠胎肝单个核细胞移植后1周,外周血即能探测到供体细胞来源的血细胞;移植后第3周受体小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白基本恢复至辐照前水平;第5周外周血中供体细胞来源的血细胞比例趋于稳定;移植后1年受体小鼠骨髓中的HSC基本来自供体细胞。结论·小鼠胎肝单个核细胞通过骨髓腔内注射的移植方法能高效重建小鼠造血系统。; 伊庆福迟亚男刘光辉杨冠恒龚秀丽龚秀丽曾凡一; 关键词：造血干细胞骨髓腔内注射胎肝

唐氏综合征模型小鼠iPS细胞的制备及其全基因组甲基化谱分析: 目的:制备唐氏综合征模型小鼠(Tc-1)来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS),并分析其全基因组甲基化谱的变化。方法:采集Tc-1小鼠尾尖,并培养成纤维细胞。采用四因子...; 杨冠恒”席姣姣邱家俊刘艳娜颜景斌曾凡一

用诱导性多能干细胞进行临床治疗的安全考量: 2013年; 诱导性多能干细胞(iPSCs)和胚胎干细胞(ESCs)具有高度相似性。在理论上,iPSCs避免了ESCs无法回避的免疫排斥和伦理问题,为再生医学提供重要的细胞资源,具有广阔的临床治疗前景。然而,为实现其在临床上的应用,还须克服诸多问题,如已发现iPSCs具有潜在的致瘤性和免疫原性,以及iPSCs在重编程和传代培养过程中发生基因组变异和表观遗传改变的可能性等。就iPSCs临床应用所面临的主要问题进行总结并探讨可能的解决方法。; 张斯敏杨冠恒张敬之; 关键词：诱导性多能干细胞免疫原性基因组变异表观遗传变异致瘤性

如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠被引量：1: 2012年; 目前,嵌合体技术已成为胚胎干细胞(ES细胞)和诱导多能性干细胞(iPS细胞)研究不可或缺的一部分,嵌合体小鼠模型主要用于基因功能、调控机制、致病机理等各方面的研究。要安全可靠地进行ES细胞和iPS细胞的各种应用性研究,首先需要验证细胞在体内向各种组织定向分化的能力,特别是生殖系传递的能力。而高效制备多能性干细胞生殖系传递的嵌合体小鼠,需要在分子水平、细胞水平、动物个体水平以及制备方法等各方面全面综合地分析考虑,才能达到实验设计的最优化。制备嵌合体小鼠主要有注射法和聚集法2种方法,各有利弊,在整个制备过程中,需要考虑不同发育阶段以及不同小鼠品系胚胎的分化潜能、选用远交系和杂交系的胚胎作为受体,同时要考虑ES细胞的遗传背景,选择低代次的远交系和杂交系的ES细胞或者iPS细胞,以及优选KSR培养体系。对于操作者,需根据实际情况,全方位地综合考虑,从而制定出合理的操作方案。; 杨冠恒施皖生曾凡一; 关键词：嵌合体

piggyBac转座子在哺乳动物中的应用被引量：1: 2013年; 转座子(transposon)是存在于生物体基因组中的可移动的DNA片段,能够影响基因的结构和功能,广泛存在于生物演化过程中。转座子通过切离和粘贴机制介导外源基因的插入,是研究基因功能,制备转基因动物及基因治疗的优良载体。目前在哺乳动物中转座活性较高且研究最多的是"睡美人"转座子和piggyBac(PB)转座子。前者是目前临床前基因治疗研究中使用最为广泛的转座子,但存在剂量抑制效应和转座效率低等缺陷。而PB转座子可克服剂量抑制效应,且转座高效,转基因载量大,因此在哺乳动物中的应用越来越广泛。作者就PB转座子的作用机制、影响因素及在哺乳动物中的应用现状等进行报道。; 杨冠恒曾凡一; 关键词：PIGGYBAC 转座子转基因

表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化: 2018年; 目的：慢病毒载体（lentiviral vector,LVV）是一种有效的基因治疗导入系统。拟用已研发的携带人的β-珠蛋白基因自删除慢病毒载体,优化其表达有效性和提高其病毒颗粒数。方法：比较三款不同的启动子预测软件的分析结果,分别构建三种不同长度启动子的表达β-珠蛋白基因（β-globin）的LVV,并对其Ⅱ号内含子进行部分删减;用经优化的LVV转导β-地中海贫血（β-地贫）的小鼠诱导性多能性干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSC）后,用此iPSC制备嵌合体小鼠模型;经RT-PCR、血涂片瑞氏吉姆萨染色等观察分析其功能性代偿的潜能。研究结果：经优化后的自删除慢病毒载体病毒对其病毒颗粒数的滴度影响不大（2.3×10^（11）LPs/ml）,可在嵌合体小鼠模型体内检测到正常人β-珠蛋白基因的功能性表达。结论：优化了表达人β-珠蛋白基因的自删除LVV。; 韩亚丽杨冠恒陈雁雯龚秀丽张敬之; 关键词：Β-地中海贫血基因治疗

基于实时荧光定量PCR技术的唐氏综合征嵌合体小鼠嵌合率检测和分析: 2018年; 目的·建立一种定量检测唐氏综合征嵌合体小鼠各脏器嵌合情况的方法,并初步探究其不同器官中的嵌合规律。方法·分别针对唐氏综合征模型Tc1小鼠细胞(三体细胞)内人源21号染色体(记为Hsa21)上SIM2基因和小鼠15号染色体(记为Mmu15)上Derl1基因设计引物,采用实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qPCR)技术对SIM2和Derl1进行检测来反映Hsa21和Mmu15的比例,并以此计算嵌合体小鼠各器官中Tc1小鼠细胞的嵌合占比。结果·所鉴定的小鼠中有3只为嵌合体小鼠。该3只小鼠心脏组织Tc1小鼠细胞嵌合率分别为8.98%、21.71%和57.70%,小脑组织分别为5.62%、20.17%和40.43%,大脑组织分别为8.48%、15.35%和20.45%,肝脏组织分别为2.66%、6.50%和16.84%,脾脏组织分别为1.73%、3.80%和11.80%。结论·基于qPCR技术对不同染色体上的基因进行定量分析的方法可用于唐氏综合征嵌合体小鼠中三体细胞嵌合率的定量检测。Tc1小鼠细胞在嵌合体小鼠的心脏、小脑、大脑、肝脏、脾脏均可发生嵌合,心脏组织的嵌合率偏向最高。; 孟晓伟杨冠恒王云杰马晴雯; 关键词：唐氏综合征嵌合体小鼠模型

iPSCs的潜在致瘤性及降低致瘤性方法的研究进展: 2015年; 自从2006年山中伸弥成功地将小鼠皮肤成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,i PSCs),i PSCs已成为科学家们研究的热点之一。而i PSCs在为基础研究和再生医学提供了无限可能的同时,相关争论焦点也随之产生,如i PSCs有可能导致肿瘤已成为其在临床应用前需要进一步证实、面对和解决的问题。目前已经有相关研究人员对i PSCs是否具有潜在致瘤性进行了探索。研究结果表明,i PSCs基因表达谱与癌细胞基因表达谱具有交集,重编程过程中积累了基因损伤,以及在培养过程中的基因突变都是其致瘤性产生的原因之一。研究人员目前已经找到很多减少i PSCs致瘤性的方法,比如优化促重编程因子、筛选表达载体、筛选细胞株等。文中对i PSCs致瘤可能性的原因和如何消除其致瘤性进行了综述。; 张丽萍杨冠恒张敬之; 关键词：IPSCS 致瘤性安全性

唐氏综合征模型小鼠iPS细胞的制备及其全基因组甲基化谱分析: <正>目的:制备唐氏综合征模型小鼠(Tc-1)来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS),并分析其全基因组甲基化谱的变化。方法:采集Tc-1小鼠尾尖,并培养成纤维细胞。采用...; 杨冠恒'席姣姣邱家俊刘艳娜颜景斌曾凡一; 文献传递

2类小鼠胎肝基质细胞的生物学特征及表达谱分析被引量：1: 2019年; 目的·探究不同类型小鼠胎肝基质细胞在细胞形态、分子特征和生物学功能上的差异。方法·通过体外贴壁培养的方式获取13.5 d小鼠胎肝基质细胞,根据细胞形态及其表面标志物CD44、CD29、CD106、CD45及Sca-1的表达差异,区分不同的细胞类型。使用小鼠基因组阵列4302.0基因芯片在P<0.05、差异倍数>3或<-2的标准下筛选差异基因,并使用IPA(ingenuity pathway analysis)软件对典型信号通路和生物学功能进行分析。结果·依据细胞形态的不同,分离出2类胎肝基质细胞,即短梭形细胞(CD45^+CD106^-CD29^+CD44^+Sca-1-)和成纤维样细胞(CD45^-CD106^+CD29^+CD44^+Sca-1^-)。前者共筛选出1485个高表达基因,主要参与免疫炎症相关的信号通路;后者共筛选出3374个高表达基因,主要参与细胞外基质形成及细胞间黏附。结论·小鼠胎肝基质细胞在生物学特征及功能上具有较强的异质性,在促进造血干细胞的增殖方面可能存在差异。; 王沄汉迟亚男杨冠恒范书玥马姬薛燕曾凡一; 关键词：胎肝基质细胞造血干细胞

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