邵志伟
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达C-Src激酶结合蛋白诱导Jurkat淋巴细胞表型改变和凋亡被引量：1
- 2015年
- 目的研究上调C-Src激酶结合蛋白(CBP)表达对Jurkat细胞超微结构及相关生物学功能的影响。方法构建CBP-EGFP融合蛋白过表达病毒载体,转染建立稳定的高表达CBP-EGFP融合蛋白的Jurkat细胞株。光学显微镜下观察细胞的基础生长状态,共聚焦显微镜观察病毒转染效率及CBP蛋白在细胞上的定位,电镜观察细胞内细胞器的复杂程度。流式细胞术检测细胞的基本参数及凋亡情况,实时定量PCR(qRT-PCR)检测CBP基因及信号转导通路中C-Src激酶(CSK)、原癌基因蛋白Vav(Vav oncoprotein)mRNA水平。结果光镜下发现转染CBP-EGFP病毒的Jurkat细胞皱缩细胞增多,大小均一性较差。共聚焦显微镜显示细胞转染效率达到100%,同时发现CBP定位于细胞膜上。电镜可见CBP组细胞内细胞器较Jurkat细胞复杂,有线粒体,并出现大量的溶酶体样结构。与阴性组相比,转染了CBP-EGFP病毒后,死亡细胞的数量大大增加,而qRT-PCR结果显示CBP组CSK表达上调,Vav则表达下调。结论在Jurkat细胞中,CBP蛋白高表达可以使细胞的均一性下降,凋亡细胞增多。
- 高美华丛蓓蓓王冰王丽娜邵志伟
- 关键词：细胞器
- 高表达衔接蛋白Src羧基端激酶结合蛋白对Jurkat细胞形态及功能的影响(英文)
- 2015年
- 背景:衔接蛋白分子的联动和协同有效调控T细胞的信号转导,形成级联放大或限制,最终实现T细胞复杂的免疫功能。蛋白分子Src羧基端激酶结合蛋白正是衔接蛋白的一种,其主要是通过负反馈调节Src家族激酶活性。而这种负反馈调节作用依赖于Src羧基端激酶结合蛋白的Y317,可能涉及Src羧基端激酶的SH2结构域。目的:探索衔接蛋白Cbp对Jurkat细胞形态及功能的作用。方法:构建仅表达增强绿色荧光蛋白的融合蛋白和Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的融合蛋白的病毒颗粒。将Jurkat细胞分为未转染组、阴性对照组和Src羧基端激酶结合蛋白组,后2组转染仅表达增强绿色荧光蛋白的病毒和转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白的病毒。结果与结论:细胞转染效率大于95%,Src羧基端激酶结合蛋白定位于细胞膜上。转染Src羧基端激酶结合蛋白-增强绿色荧光蛋白病毒的Jurkat细胞,皱缩细胞增多,大小均一性较差,细胞坏死凋亡的数量增加,细胞中Src羧基端激酶结合蛋白基因表达上调,Src羧基端激酶表达下降,而酪氨酸蛋白激酶表达增加。提示Jurkat细胞转染Src羧基端激酶结合蛋白后,可使细胞存活率下降,细胞信号转导功能减弱。
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- 关键词：SRCSRC酪氨酸蛋白激酶
- 脂筏微域内CD59趋引CBP蛋白介导T细胞下游信号的转导研究被引量：6
- 2015年
- 目的探讨Cbp(Csk-binding protein)在Jurkat细胞中的过表达对其生物学功能的作用以及GPI锚定蛋白CD59通过Cbp对细胞的效应机制。方法构建Cbp-EGFP慢病毒载体,转染建立稳定的过表达Cbp-EGFP的Jurkat细胞株。采用免疫荧光技术,通过共聚焦显微镜观察CD59、Cbp的表达及定位关系;检测CD59抗体刺激前后细胞的增殖效率及细胞凋亡情况;Western blot检测Jurkat细胞中信号转导通路相关蛋白分子的变化。结果共聚焦显微镜下可见CD59、Cbp定位于胞膜上,在抗体刺激后,Cbp组与对照组均出现明显的荧光高亮聚集现象。转染Cbp-EGFP后细胞增殖速率明显降低(P<0.05),而中晚期凋亡现象显著高于阴性对照组(P<0.05)。CD59单抗作用前后相比,酪氨酸激酶蛋白(Fyn、Lck、ZAP-70)的表达量均有所下降,而Csk的表达量增加。结论 Cbp过表达能有效抑制Jurkat细胞的增殖,GPI锚固蛋白CD59可通过Cbp分子调控细胞信号转导通路中重要蛋白酪氨酸激酶的表达,进而影响Jurkat细胞的生物学活性。
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- 关键词：CD59CBP
