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杨毅: 作品数：13 被引量：139H指数：5; 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅重点项目湖南省研究生科研创新项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>

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新型猪圆环病毒疫苗的研究进展被引量：9: 2016年; 从20世纪90年代开始流行到现在,全球范围内暴发的猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)给世界各国的养猪业造成了巨大的经济损失。我国是世界的养猪大国和猪肉制品消费大国,PCVAD对我国的养猪业的发展产生了很大的影响。疫苗是预防PCVAD最直接有效的方法,文中对近年来国内外猪圆环病毒疫苗的研究进展进行综述。; 蔡杰呼高伟王乃东邓治邦王爱兵杨毅; 关键词：猪圆环病毒疫苗

非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单链抗体的制备及鉴定: 2024年; 为了获得特异性针对非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白单链抗体(scFv),本研究以CD2v阳性单克隆抗体杂交瘤细胞为模板,通过PCR扩增得到抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,利用Overlap-PCR在VH和VL基因间引入短肽(Gly4Ser)2连接形成scFv。将其插入原核表达载体p ET28a(+)中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经1 mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达,通过ELISA对复性scFv蛋白进行反应活性评价。结果显示,通过CD2v蛋白的阻断ELISA筛选出分泌阻断效果良好的单抗杂交瘤细胞株4B8,并成功扩增获得单克隆抗体4B8的重链可变区(VH,399 bp)、轻链可变区(VL,369 bp)及由GS Linker连接而成的4B8-scFv基因(744 bp);SDS-PAGE结果显示,4B8-scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,通过尿素变性及透析复性,得到纯度较高的4B8-scFv(相对分子质量约为34 ku);间接ELISA结果表明,4B8-scFv与CD2v蛋白具有良好的反应活性。; 杜晨暄邹亚文张颜王智勇李丹彤喻蓓蕾蒋一凡蒋一凡何庆杨毅王乃东; 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体单链抗体

猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测被引量：5: 2023年; 【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein,Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考依据。【方法】本研究对2019-2021年于湖南省6个地区收集的17份PCV2阳性组织样品进行PCV2全基因组序列扩增及测序分析,绘制系统进化树,利用生物信息学方法分析Cap蛋白氨基酸变异情况,并预测CTL表位。【结果】系统进化树显示,获得的17株PCV2全基因组序列中,1株PCV2a、7株PCV2b和9株PCV2d。Cap蛋白氨基酸序列比对分析发现,共有16个氨基酸残基突变位点位于病毒Cap蛋白表面,且有11个突变位点参与构象型表位的形成。此外,共预测出9个PCV2 Cap蛋白潜在的CTL表位,其中4个表位(16-24、28-36、136-144和179-187位氨基酸)在GenBank的1610株PCV2不同基因型毒株中高度保守。通过TCR-pMHC复合物3D结构对4个保守性表位进一步分析,结果显示,这4个肽段均能与MHCⅠ分子和TCR形成稳定的TCR-pMHC复合物。【结论】本研究结果表明,PCV2b和PCV2d为当前湖南省主要流行的基因型,且表现出高度变异;预测的CTL表位可作为候选抗原表位。; 周文锋张英婕白一涵张露华麦金辉王乃东杨毅杨毅王东亮; 关键词：CAP蛋白 CTL表位

猪圆环病毒3型检测及其Cap结构序列和抗原性预测分析被引量：91: 2017年; 近期报道在美国多个州的养猪场发现了一种新型的猪圆环病毒3型毒株(porcine circovirus 3,PCV3)。为了确定PCV3是否已经在我国南方部分省份的猪场中广泛存在,并对目前PCV2疫苗是否对PCV3感染具有交叉保护作用作出科学预测,笔者对我国南方几个省份疑似猪皮炎肾病综合征的病猪组织样品进行PCV3巢式PCR检测及其核衣壳蛋白质(capsid protein,Cap)结构的PyMol和抗原表位服务器在线模拟分析。结果首次在这些病料中检测到PCV3的存在,部分病料表现为PCV2和PCV3共感染的特性。对其Cap结构及抗原性分析发现,PCV2和PCV3表现出很大的差异。因此,推测PCV2和PCV3不具有交叉免疫保护的特性,新的疫苗研究和开发,对于将来控制PCV3流行是必要的。; 湛洋王东亮王乃东蒋一凡黄坤崔尚金姜平杨毅; 关键词：皮炎肾病综合征巢式PCR

非洲猪瘟血清学诊断靶点的研究进展被引量：15: 2021年; 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的猪高致死性传染病。ASFV编码蛋白p30、p54和p72等具有较高的免疫原性,且部分氨基酸序列较为保守,常被作为血清学诊断靶点,用于评价ASF不同阶段或发病程度的抗体水平变化,ASF血清学诊断靶点相关深入研究有助于其感染检测、致病机制和机体免疫系统反应等探究。本文系统阐述用于ASF血清学诊断的主要候选蛋白及其靶点的检测应用进展,并分析候选靶点的抗原表位(区域)及其抗体结合的特点,探讨其作为ASF血清学诊断新靶点的应用潜力。; 杨文兵邹亚文蒋一凡余婉婷杨毅邬静王乃东; 关键词：结构蛋白抗原表位

猪圆环病毒2型病毒样颗粒的研究及应用被引量：3: 2015年; 自20世纪90年代中期起,猪圆环病毒2型（PCV2）引起的猪圆环病毒病在全球范围内大规模爆发,给世界各国造成了巨大的经济损失和环境灾难。2013年,英国皇家兽医学院Alarcon,P等对PCV2给英国养猪业所造成的经济损失进行了科学的统计,研究结果表明,2008年PCV2造成5.23千万英镑的损失,而在PCV2流行期所造成的直接经济损失可达8.8千万英镑[1]。我国生猪出栏量居世界第一,占据世界约50%的产量。; 余婉婷湛洋雷昕诺张颜谢小红王乃东邓治邦王爱兵杨毅; 关键词：猪圆环病毒病毒样颗粒环境灾难出栏量病毒基因组核衣壳

厌氧菌预还原琼脂平板培养方法被引量：5: 2020年; 为简化厌氧菌分离培养方法,使其在普通实验条件下于固体培养基上形成单菌落,本研究增加庖肉培养基无氧溶液体积,用作无氧倍比稀释液,在琼脂柱下进行倍比稀释,将皿盖带有胶塞孔的厌氧琼脂平板进行预还原,注射接种倍比稀释菌液,通过厌氧指示剂监测无氧效果,初步试用于肠道厌氧菌分离培养。结果显示,该方法整个操作过程厌氧效果良好,无需专门厌氧设备即可以分离纯化培养肠道乳酸杆菌,甚至无芽胞专性厌氧菌,如双歧杆菌和韦荣球菌。; 郑昕宫利宏杨毅王贵平尹崇; 关键词：厌氧菌预还原厌氧装置

猪圆环病毒2型衣壳蛋白Loops结构及病毒样颗粒制备的研究进展被引量：11: 2018年; 病毒样颗粒（virus—like particles，VLPs）是某种病毒的1种或几种结构蛋白在体外组装而成，由于VLPs不包含病毒基因组，在宿主细胞q-不能自我复制，因此VLPs在亚单位疫苗应用中具有较高的生物安全性。自猪圆环病毒2型（poreine circovirus type2，PCV2）在世界范围内流行以来，已经给全球养猪业带来巨大经济损失，因此PCV2的致病机理和疫苗研究具有重要现实意义。PCV2Cap蛋白（capsid protein）是病毒唯一的衣壳蛋白，也是主要的免疫原性蛋白，60个Cap蛋白亚基在体外能自行组装成PCV2VLPs，该VLPs因与天然病毒粒子形态相似并保留了病毒完整的构象表位，已经在PCV2组装和侵染机理研究、亚单位疫苗的研发及其相关性系统疾病（PCV2-systemic disease，PCV2-SD）的预防研究中得到广泛应用。本文主要对PCV2Cap蛋白的Loops结构及其VLPs的制备研究进展进行阐述，为PCV2侵染机理与亚单位疫苗的研发等提供参考。; 王东亮湛洋胡意雷昕诺庞培张素娇王爱兵杨毅王乃东; 关键词：猪圆环病毒2型病毒样颗粒亚单位疫苗

杆状病毒介导猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白在PK15细胞中的表达与鉴定被引量：2: 2016年; 以pFastBac I为载体骨架,通过PCR从pcDNA3.3-TOPO载体引入巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV3.3)强启动子及不同功能调控元件,构建成含有双启动子,能在PK15细胞(porcine kidney cell)中表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)的昆虫杆状病毒转移(穿梭)载体pFastBac I-CMV3.3-eGFP。收获重组杆状病毒,侵染PK15细胞。倒置荧光显微镜下验证该重组转移载体构建成功,根据荧光水平筛选出重组杆状病毒侵染PK15细胞的最佳MOI(multiplicity of infection)和最佳表达强度时间。另将PRRSV(porcine reproductive and respiratory syndrome virus)GP5蛋白基因克隆到pFastBac I-CMV3.3载体。获得的重组杆状病毒以MOI=100侵染PK15细胞48h后收获细胞产物。Western blot鉴定目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了重组杆状病毒介导PRRSV GP5蛋白在PK15细胞表达系统。因此,建立的重组杆状病毒在PK15细胞中高效表达GP5蛋白的方法,将为研究PRRSV吸附机制,GP5蛋白与宿主细胞互作蛋白的筛选和针对PRRSV基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。; 呼高伟余婉婷朱哲王占锋邹亚文王乃东王爱兵邓治邦杨毅; 关键词：PK15细胞 WESTERN BLOT

一种嵌合猪细小病毒B细胞线性表位的PCV2病毒样颗粒的构建与分析: 王东亮张素姣王乃东杨毅

杨毅

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