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强、弱毒力新城疫病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：5: 2017年; 通过比对新城疫病毒强、弱毒株F基因序列,根据其在F0裂解位点的差异以及F基因保守序列设计合成NDV-V-probe和NDV-L-probe探针组和NDV-F、NDV-R引物组,以基因Ⅶ型NA-1株和基因Ⅱ型LaSota疫苗株病毒RNA作为定量检测的标准品,建立检测方法。对所建立的标准曲线进行分析,相关系数R2均为0.997,线性关系良好。通过计算变异系数CV/%分别为0.034%和0.027%,均小于1%,说明稳定性良好。对禽类常见病毒IBV、H9亚型AIV检测未发现有交叉反应,特异性好、重复性佳。结果表明:成功建立了新城疫病毒强、弱毒双重荧光定量RT-PCR的检测方法,实现了从分子水平上快速鉴别强、弱毒力的新城疫病毒,也可快速区分野毒感染动物和疫苗接种动物,减少不必要的经济损失。; 王珂袁乾亮尹仁福薛聪钱晶穆昱张平仄杨明曦张晟韩丽丁壮; 关键词：弱毒 F基因

一种快速检测鹿粘膜病病毒BVDV的方法: 本发明提供了一种快速检测鹿粘膜病病毒BVDV的方法，通过将LDR与PCR技术相结合的检测导致梅花鹿粘膜病的BVDV，具体为：首先，从NCBI中下载BVDV全序列，通过软件比对BVDV的5’-UTR进行病毒特异性序列的设计...; 丁壮尹仁福丛彦龙穆昱周玉龙; 文献传递

牛病毒性腹泻病毒感染诱导的MDBK细胞自噬有益于病毒复制: 牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)能够感染牛、鹿等多种反刍兽,引起的临床症状复杂多样,给畜牧业造成巨大经济损失.BVDV可分为两个生物型：致细胞病变型(cytopathi...; 周玉龙丛彦龙穆昱尹仁福丁壮; 关键词：细胞自噬致病机理病毒复制

鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒的制备被引量：7: 2014年; 为了制备鸡传染性法氏囊病毒病毒样颗粒,本试验通过RT-PCR技术扩增出鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株JL株的VP2全长基因,并将其插入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中,构建含有IBDV VP2基因的重组供体质粒pFast-VP2,转化DH10Bac E.coli感受态细胞中,经蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-VP2,将重组杆粒rBacmid-VP2转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-VP2。rBac-VP2感染sf9细胞,提取DNA,经PCR电泳分析,得到1条与预期大小相符的特异性条带;间接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-blotting分析,在大约53 000处出现1条特异性的蛋白条带;电镜观察感染重组杆状病毒的细胞上清和沉淀,均可见重组VP2蛋白自行组装形成的病毒样颗粒。试验结果表明IBDV VP2基因在昆虫细胞中得到了表达,并自组装成了IBDV病毒样颗粒。本试验为研制鸡传染性法氏囊病病毒样颗粒疫苗奠定了基础。; 李芹王建忠黄楚荻穆昱周玉龙高超杨闽楠赛度丁壮; 关键词：鸡传染性法氏囊病毒 VP2 真核表达病毒样颗粒 SF9细胞

基因Ⅶ型新城疫病毒样颗粒的制备与鉴定被引量：8: 2016年; 利用Bac-to-Bac昆虫-杆状病毒表达系统分别构建了含有新城疫强毒株M、F、NP和HN等4个结构基因的单顺反子重组杆粒,经转染后,观察Sf9细胞病变以及PCR鉴定结果表明成功构建了4种重组杆状病毒;收集重组杆状病毒采用共感染策略,Sf9细胞上清经超速离心,蔗糖密度梯度纯化与浓缩后,利用Western blotting方法和透射电子显微镜技术检测,结果表明目的蛋白均正确表达且组装成具有完整囊膜形态的病毒粒子。; 袁乾亮钱晶薛聪穆昱丁壮; 关键词：新城疫病毒样颗粒新型疫苗

鹿黏膜病免疫胶体金诊断试纸条的研制及应用: 鹿黏膜病(Deer mucosal disease,DMD)是由牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(Bovine virus diarrhea/mucosal disease virus,BVD/MDV)引起的一种以怀孕母鹿流产、...; 穆昱; 关键词：E2蛋白单克隆抗体; 文献传递

Bac-to-Bac系统表达鹿源BVDV E2蛋白及其免疫原性被引量：3: 2014年; 为了制备针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体,本试验通过RT-PCR技术扩增出鹿源BVDV E2的全长基因,并将其插入杆状病毒bac to bac表达系统的供体质粒pFast BacHTA中,构建含有BVDV E2基因的重组供体质粒pFast-E2,转化至含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac E.coli感受态中,经半乳糖苷酶的蓝白斑筛选,获得重组杆粒rBacmid-E2,然后将其转染sf9细胞后得到重组杆状病毒vBac-E2,E2基因会随着杆状病毒的增殖而获得表达。表达产物经直接免疫荧光检测,可见特异性荧光;Western-Blot定性分析,在大约38 000处出现1条特异性的蛋白印迹与预期大小相符,表明BVDV E2基因在该系统中得到了表达。本研究为研制针对鹿源BVDV E2蛋白的单克隆抗体及胶体金试纸条奠定了基础。; 穆昱操时伟周玉龙李芹丁壮; 关键词：E2 杆状病毒表达系统 SF9细胞

梅花鹿粘膜病同源灭活疫苗及其制备方法: 本发明公开了一种梅花鹿粘膜病同源灭活疫苗及其制备方法。该梅花鹿粘膜病病同源灭活疫苗是将鹿源BVDV(牛病毒性腹泻/粘膜病病毒)接种培养至3～6代、稳定的、单层铺满的MDBK细胞的细胞瓶进行培养，挑选在培养72～144小时...; 丁壮董航丛彦龙尹仁福母连志张晓东周玉龙穆昱; 文献传递

检测鹿黏膜病病毒LDR-PCR方法的建立: 2015年; 为准确特异灵敏地检测鹿黏膜病病毒,本研究建立了一种新的LDR-PCR方法。首先在病毒的保守区内设计1对LDR探针,LDR探针两端各连有1段引物对应序列,以连接产物为模板进行PCR,琼脂糖凝胶电泳检测结果。通过对LDR反应的退火温度、连接酶浓度及探针浓度等反应条件进行优化,确定了LDR最佳的反应体系,并建立了LDR-PCR方法。结果表明,本方法可以特异地检测BVDV,最低检测限为101个拷贝。此方法的建立为BVDV基础研究和临床应用提供了良好的技术平台,为进一步开发高通量的多病原检测技术提供了技术基础。; 王雪刘新鑫穆昱尹仁福丁壮

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穆昱