杨丽华
- 作品数：7 被引量：29H指数：3
- 供职机构：青岛大学医学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 槐耳颗粒免疫调控CXCL1在乳腺癌中的作用研究被引量：6
- 2016年
- 目的研究CXCL1与乳腺癌增殖转移的相关性,为乳腺癌发病机制提供线索,探究中药槐耳颗粒对乳腺癌发生发展的影响及其发挥效应的机制,为乳腺癌的治疗提供理论依据。方法分别设置1 nmol/ml CXCL1组、0.1 nmol/ml CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体处理组、5 mg/ml槐耳颗粒组、10 mg/ml槐耳颗粒组及空白对照组6组。CCK8检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测槐耳颗粒组与空白对照组CXCL1表达量,ELISA检测各组细胞Survivin、VEGF、MMP13的表达量。结果 CCK8检测细胞增殖活性:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞增殖活性明显增高且存在剂量依赖关系,有统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞增殖活性明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系;流式测细胞凋亡结果:与空白对照组相比,CXCL1处理组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系,与空白对照组相比,anti-CXCR2中和抗体处理组细胞凋亡率明显增高(P<0.05),与空白对照组相比,槐耳颗粒组细胞凋亡率明显增高且随浓度增加作用增强(P<0.05);CXCL1表达量:与空白对照组相比,槐耳颗粒组CXCL1表达量明显降低(P<0.05),且存在剂量依赖关系;survivin、VEGF、MMP13表达量:与空白对照组相比,CXCL1处理组蛋白表达量明显增高(P<0.05)且存在剂量依赖关系,anti-CXCR2中和抗体处理组蛋白表达量明显降低(P<0.05),槐耳颗粒组蛋白表达量明显降低(P<0.05)且存在剂量依赖关系。结论乳腺癌中CXCL1通过与其受体CXCR2结合促进survivin的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖抑制其凋亡,促进乳腺癌的发生;同时通过促进VEGF与MMP13的表达促进肿瘤血管的生成及细胞外基质的降解,提示CXCL1可能促进肿瘤转移。中药槐耳颗粒可通过抑制CXCL1表达而有效抑制乳腺癌细胞的增殖以及侵�
- 孙艺宁张蓓张姗杨丽华朱学华范世莹沈兆康孔滨
- 关键词：槐耳颗粒乳腺癌
- CXCL1促进乳腺癌细胞增殖和迁移及其作用机制的研究被引量：6
- 2015年
- 目的体外研究CXCL1对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取人乳腺癌细胞进行分组处理:空白对照组、CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体组,用CCK8、克隆形成实验、流式凋亡、细胞划痕及Transwell迁移实验分别对各组细胞增殖活性、凋亡率、迁移侵袭能力进行检测,并用ELISA法对各组细胞内MMP-9蛋白、磷酸化AKT及活化NF-κB水平进行检测。结果 CCK8与克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞增殖活性提高,细胞克隆形成率增加(P<0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成率降低(P<0.05);流式凋亡检测结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞凋亡率降低(P<0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞凋亡率增高(P<0.05);细胞划痕、Transwell迁移实验及细胞内MMP-9蛋白表达水平表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞迁移侵袭能力增强(P<0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞迁移侵袭能力减弱(P<0.05);细胞内p AKT/NF-κB蛋白检测表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平升高(P<0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平降低(P<0.05)。结论 CXCL1通过与CXCR2结合促进乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭,其机制可能是激活了AKT/NF-κB信号转导通路。
- 杨丽华张蓓孔滨沈若武王继燕高美华马宇张敏锐孙艺宁张姗朱学华范世莹李宝林
- 关键词：乳腺癌CXCR2AKTNF-ΚB
- 调控Tim-3通路在免疫性肝损伤大鼠中对Th17细胞的影响被引量：1
- 2015年
- 目的建立免疫性肝损伤模型,探讨Tim-3通路在阻断或激活时对Th17细胞的影响。方法大鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)8周,建立免疫性肝损伤模型。无菌取脾脏制备脾淋巴细胞,取外周血分离血清后于-20℃保存,取肝脏组织放入4%的多聚甲醛中固定备用。在96孔板上将脾淋巴细胞平均分成5组,即阻断实验组、阻断对照组、激活实验组、激活对照组和Con A对照组。用Tim-3的单克隆抗体即Anti-Tim-3来阻断Tim-3通路;用Tim-3的重组配体galectin-9来激活Tim-3通路,37℃、5%CO2培养箱中培养72 h,收集细胞上清液于-20℃保存。生化分析法测血清中ALT、AST和ALB的表达;HE染色观察肝脏组织的病理变化;免疫组化法测肝脏组织中IL-17A和ROR-γt蛋白的表达;ELISA法测细胞上清液中IL-17A及IL-6的表达;实时定量PCR测各组脾淋巴细胞ROR-γt mRNA的表达。结果与对照组相比,模型组HE染色可见明显的炎性细胞浸润、肝脏组织损伤及较多的假小叶,免疫组化可见IL-17A和ROR-γt蛋白的表达明显升高;与阻断对照组相比,阻断实验组中IL-17A和IL-6的水平升高(P<0.05);与激活对照组相比,激活实验组中IL-17A和IL-6的水平降低(P<0.05);实时定量PCR显示与阻断对照组相比,阻断实验组中ROR-γt mRNA的表达明显增加(P<0.05)。结论免疫性肝损伤的发病与Th17细胞密切相关,免疫调控Tim-3通路可通过影响Th17细胞效应,进而参与免疫性肝损伤的发病机制。
- 张文张蓓李秀梅沈若武丛蓓蓓杨丽华孙东君王建伟
- 关键词：免疫性肝损伤TH17细胞
- Notch信号对大鼠肝纤维化Th17/Treg平衡的影响被引量：3
- 2016年
- 目的建立大鼠肝纤维化模型,探讨Notch信号在肝纤维化模型中的作用及对Th17/Treg细胞平衡的影响。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(10只)、模型组(30只)。用刀豆蛋白A(Con A)建模,8周建模成功后模型组随机分成3组(PAPT组、TGFβ组、DMSO对照组),10只/组,并对其体外心尖取血3 ml,分离外周单个核细胞(PBMC),用Notch抑制剂DAPT及TGF-β抑制剂干预培养24 h,RT-PCR测Notch信号及TGF-β相关基因表达,流式细胞术测Th17和Treg细胞频率,ELISA法测PBMC培养上清中细胞因子IL-17、IL-23、TGF-β及IL-10的表达。结果与对照组相比,干预组Notch和TGF-β信号相关基因表达显著降低(P<0.05)。Th17细胞频率及其相关因子(IL-17、IL-23)水平降低(P<0.05),Treg细胞频率及其相关因子(TGF-β、IL-10)水平明显降低(P<0.05),Th17/Treg比值较对照组上升(P<0.05)。结论 Notch信号参与肝纤维化的发生发展,阻断Notch信号能抑制Treg细胞功能,降低TGF-β1水平,为肝纤维化的治疗研究提供实验基础。
- 王毅张蓓沈若武李振张凤玉熊乐李华侨杨丽华沈兆康王忠
- 关键词：肝纤维化NOTCHTGF-Β1TH17TREG
- Src羧基末端激酶结合蛋白过表达及棕榈酰化对裸鼠T系白血病Jurkat细胞增殖作用影响的研究被引量：2
- 2016年
- 目的:建立Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞裸鼠模型,研究Cbp过表达及棕榈酰化对Jurkat细胞增殖作用的影响。方法:利用neg-EGFP、Cbp-EGFP、Cbp-m-EGFP融合蛋白慢病毒载体转染的Jurkat细胞构建动物模型,24只5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、空病毒对照组、Cbp过表达组和Cbp棕榈酰化位点突变组,每组6只。接种前和接种后0、1、2、3、4、5周裸鼠称重,取外周血计数白细胞总数。利用病毒本身携带的EGFP绿色荧光蛋白在激光共聚焦显微镜下观察Jurkat细胞在外周血中的增殖情况;HE染色观察肝脏的病理变化;流式细胞仪检测Jurkat细胞在小鼠骨髓和外周血中的增殖水平。结果:Cbp过表达组小鼠体重低于空白对照组,高于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组,Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠体重低于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。Cbp过表达组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、低于空病毒对照组和Cbp棕榈酰化位点突变组。Cbp棕榈酰化位点突变组小鼠外周血白细胞总数和肝脏、骨髓、外周血中Jurkat细胞增殖水平高于空白对照组、空病毒对照组和Cbp过表达组。结论:成功建立了Cbp过表达及棕榈酰化的T系白血病Jurkat细胞动物模型,Cbp过表达可抑制Jurkat细胞增殖,Cbp棕榈酰化位点突变可促进Jurkat细胞增殖。
- 马宇高美华张敏锐张蓓王冰杨丽华
- 关键词：JURKAT细胞裸鼠模型
- LBH589调控Th17/Treg平衡抑制免疫性肝损伤的实验研究
- 2015年
- 目的建立大鼠免疫性肝损伤模型,探究Th17/Treg平衡状态与疾病进展的相关性及LBH589对Th17/Treg失衡的免疫调控。方法将雌性Wistar大鼠随机分为慢性肝损伤模型组(CC组)、干预组(LBH组)和健康对照组(HC组)3组。尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)建立动物模型。生化法检测肝功能,ELISA法检测肝脏纤维化指标,取肝脏做病理分析,流式细胞分析术(FCM)检测Th17细胞和Treg细胞频率变化;ELISA法检测外周血IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的质量浓度,免疫组化法检测肝脏局部IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β、Foxp3、RORγt蛋白表达情况。结果与HC组比较,CC组肝功受损,纤维化指标(HA、TIMP-1)水平升高(P<0.05),肝脏结构破坏,Th17细胞频率及细胞相关因子(IL-17、IL-6等)水平升高(P<0.05),Treg细胞频率及细胞相关因子(TGF-β、IL-10、Foxp3等)水平显著升高(P<0.05),Th17/Treg比值较HC组下降(P<0.05)。LBH589干预后,与CC组相比,LBH组肝功、纤维化指标(HA、TIMP-1)水平及肝脏病理明显改善,差异有统计学意义(P<0.05);与CC组相比,LBH组Th17细胞频率及细胞其相关因子(IL-17、IL-6等)水平下降,Treg细胞频率及细胞相关因子(TGF-β、IL-10、Foxp3等)水平也下降,但Th17/Treg比值较CC组上升(P<0.05)。体外试验中,与对照组相比,各LBH治疗组IL-17、IL-6、IL-10、TGF-β等相关细胞因子的含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)并呈现剂量依赖关系。结论大鼠慢性肝损伤中,存在Th17/Treg失衡,LBH589可以纠正Th17/Treg失衡状态,对肝脏进行免疫调控,抑制肝病的发展。
- 李晨雨张蓓潘烨杨永华李廷翠张婧雯王建伟孙东君张文杨丽华
- 关键词：TH17细胞调节性T细胞肝损伤
- 藻酸钙敷料的促凝血机制被引量：11
- 2015年
- 背景:藻酸钙敷料近年来被广泛应用于手术止血、外伤止血、鼻腔术后止血、穿刺部位止血等,但有关其止血机制的国内外研究较少。目的:初步探讨藻酸钙敷料的促凝血机制。方法:将人抗凝血分别滴加至藻酸钙敷料、纳吸棉与医用棉纱布上,室温静置2 min,扫描电镜下观察材料与血液的相互作用;在人红细胞悬液中分别加入藻酸钙敷料、纳吸棉与医用棉纱布,静置15 s,扫描电镜下观察材料与红细胞的相互作用;在人红细胞中分别加入10,5,2.5 g/L的藻酸钙敷料浸提液,观察作用30,60,120 min的红细胞沉降率;在人富血小板血浆中分别加入10,5,2.5 g/L的藻酸钙敷料浸提液,37℃孵育10 min,流式细胞仪检测CD62P阳性血小板百分率。结果与结论:藻酸钙敷料与抗凝血接触后可见致密的纤维蛋白网形成,其中网罗大量血细胞;纳吸棉组与医用棉纱布组仅见少量红细胞及血小板黏附。藻酸钙敷料与红细胞相互作用后可见红细胞变形,有伪足样改变,纳吸棉组与医用棉纱布组红细胞形态无变化。藻酸钙敷料浸提液呈剂量与时间依赖性提高红细胞沉降率,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.01);藻酸钙敷料浸提液呈剂量依赖性提高CD62P阳性血小板百分率,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.01)。表明藻酸钙敷料可通过释放钙离子、引起红细胞聚集和变形、活化血小板等促进止凝血过程。
- 崔飞艳王斌魏立王海涛陈豪初晓夏王祯祯杨丽华
- 关键词：藻酸钙敷料浸提液枸橼酸钠钙离子CD62P
