肖薇
- 作品数：13 被引量：44H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 人D-二聚体分离纯化及鉴定
- 2013年
- 目的分离纯度较高和人D-二聚体(D-dimer),为制备抗人D-二聚体单克隆抗体提供可靠抗原。方法以凝血酶、凝血因子等处理人纤维蛋白原,得到交联纤维蛋白,经纤溶酶消化,得到交联纤维蛋白降解产物(FDP);对FDP作Sephacryl S-300凝胶过滤层析和聚焦层析,分离纯化得到D-dimer。采用免疫比浊法测定D-dimer含量、染料结合法测定纯化蛋白含量,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察D-dimer的纯化情况,WestonBlot法确认D-dimer的存在。结果制备得到的FDP SDS-PAGE图谱显示有多条蛋白条带,1条分子量为180～250kD蛋白条带在Western Blot图谱中显示可以被D-dimer单克隆抗体特异性地识别。FDP经Sephacry S-300凝胶层析和聚焦层析后得到纯度较高的D-dimer(n=3):总蛋白含量比为(77.82±7.98)%,蛋白回收率(25.27±6.35)%;SDS-PAGE图谱显示:经过两步层析得到的终产物为分子量180～250 kD的蛋白;Western Blot证实:经过Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析处理,最终得到分子量为180～250 kD的终产物可被D-dimer单克隆抗体特异性识别。结论采用Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析能够分离纯化获得较高纯度的D-dimer,可作为制备D-dimer单克隆抗体的抗原。
- 苏娜林方昭李长清马莉肖薇肖小璞
- 关键词：D-二聚体凝胶层析
- 甲型肝炎病毒感染与无偿献血者血浆ALT水平升高的关系
- 苏娜汤龙海肖薇陈雪黎李长清林方昭孙盼马莉王鸿捷戎霞戴宇东李锦蹇志伟
- 人凝血因子Ⅶ基因在CHO-K1细胞中的瞬时表达与鉴定
- 2013年
- 目的在CHO-K1细胞中瞬时表达所克隆的人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的cDNA序列并表达其产物。方法首先从HepG2细胞中克隆人FⅦcDNA序列,将克隆得到的序列连接到pMD18-T载体上经测序验证后,将其与pcDNA3.1载体连接,构建得到重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ。将构建得到的表达质粒瞬时转染CHO-K1细胞,72 h取样,采用ELISA、Western blotting等方法对细胞上清液和细胞裂解物作鉴定。结果克隆得到的序列经NCBI比对后为FⅦ转录突变体Ⅱ基因序列,克隆得到的基因未见氨基酸突变,重组表达质粒pcDNA3.1-FⅦ经PCR、双酶切、测序验证正确。ELISA法未在上清中检测到目的蛋白,而在细胞裂解液中检测到了目的蛋白;Western blotting检测到表达产物有与FⅦ标准品类似的分子量为50 kD左右的特异性条带。结论在转染后的CHO-K1细胞裂解液上清中成功表达了hFⅦ蛋白。
- 肖薇赵睿李长清曹海军刘彬肖小璞林方昭
- 关键词：克隆基因表达
- 荧光定量PCR法用于转染CHO细胞中人凝血因子Ⅶ基因拷贝数检测的研究被引量：1
- 2014年
- 目的采用荧光定量PCR法检测转染后可分泌表达人凝血因子ⅦCHO细胞株CHO-FⅦ中FⅦ基因的拷贝数。方法提取CHO-FⅦ和CHO-pcDNA3.1(空载体转染得到的细胞株)基因组DNA,分别以含有β-actin基因片段的质粒pMDT-actin和含有FⅦ全长cDNA序列的质粒pcDNA-FⅦ制作标准曲线,以CHO-FⅦ和CHO-pcDNA3.1的DNA为模板进行qPCR反应,计算出模板中细胞总数以及目的基因的拷贝数,得到每个细胞中目的基因的拷贝数,反应均在ABI Stepone Plus荧光定量PCR仪上进行。结果经检测模板中的细胞数为24 421±7 414,FⅦ基因的拷贝数49 455±3 502,每个细胞含有2个FⅦ基因拷贝,空载体转染得到的细胞株中并没有检测到FⅦ基因的存在。结论 FⅦ基因是以2个拷贝的比例整合到宿主染色体上的。
- 肖薇李长清林方昭
- 关键词：实时荧光定量PCR拷贝数
- 蝙蝠蛾拟青霉与冬虫夏草关系的分子系统学研究被引量：35
- 2008年
- 以5月和6月两个不同时段采集的分别产于青海省化隆县和四川省康定县的冬虫夏草(Cordycepssinensis)新鲜子实体为材料,采用分子生物学方法,以rDNA-ITS序列为分子标记,对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyceshepiali)与冬虫夏草之间的关系进行了探讨。以真菌通用引物ITS1/ITS4分别对蝙蝠蛾拟青霉及冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA进行PCR扩增,获得的片段克隆到pMD18-TVector上进行测序,结果表明,随机挑取的46个克隆与某些已在GenBank中注册的中国被毛孢(Hirsutella sinensis)或冬虫夏草的rDNA-ITS序列的一致性均在99%以上,但与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列的一致性约为72%。根据蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列设计了两对特异引物,分别以不同产地及不同生长时期共4个批次的冬虫夏草子座和僵虫基因组DNA为模板,进行PCR及巢式PCR扩增,均得到了相应片段,该片段与蝙蝠蛾拟青霉的rDNA-ITS序列具有100%的一致性。在GenBank中注册号为AB067740的另一个标明为冬虫夏草的rDNA-ITS序列与注册号为AJ309353的中国被毛孢的rDNA-ITS序列一致性仅为87.3%,但根据AB067740序列设计特异引物,也从冬虫夏草基因组DNA中扩增到其相应序列。研究结果表明,在天然冬虫夏草中除了中国被毛孢之外,还普遍存在着蝙蝠蛾拟青霉等内寄生菌。
- 杨金玲肖薇何惠霞朱慧新王淑芳程克棣朱平
- 关键词：冬虫夏草中国被毛孢系统发育分析
- 大容量人源核糖体展示单链抗体文库的构建被引量：1
- 2012年
- 目的构建大容量、多样性的人源核糖体展示(Ribosome display,RD)单链抗体(Singe chain Fv segment,scFv)库。方法收集20名健康献血者的新鲜外周血,分离淋巴细胞,提取细胞总RNA;设计兼并引物,利用RT-PCR分别扩增人抗体的VH-linker、Vκ、Vλ及Cκ基因;采用重叠PCR(SOE-PCR)技术,构建VH-linker-Vκ和VH-linker-Vλ-Cκ单链抗体库;将VH-linker-Vκ和VH-linker-Vλ-Cκ等量混合后,与pMD19-T载体连接,并转化感受态E.coli DH5α,对所构建的scFv库进行菌落PCR和测序分析。结果构建的核糖体展示单链抗体库重组率较高,转化产物经菌落PCR鉴定,均可见约1 000 bp的scFv基因片段,库容量为2.06×1013。经分析该抗体库单链抗体序列均完整,内部无终止密码子,可变区序列无一重复,多样性良好,均具有完整的体外核糖体展示框架。结论已成功构建了大容量、多样性好的人源核糖体展示单链抗体库,为进一步筛选高特异性、高亲和力的人源抗体奠定了基础。
- 刘彬李长青林芳昭肖薇赵睿肖小璞
- 关键词：核糖体展示单链抗体文库
- DUSP22通过调控Syk的磷酸化选择性抑制胶原诱导的血小板活化
- 蒋鹏孙盼苏娜刘凤娟李长清肖薇林方昭
- 一种批式吸附法制备血浆蛋白制品的装置
- 一种批式吸附法制备血浆蛋白制品的装置，包括自动可调活塞系统、反应罐、移动反应罐的万向轮及固定阀。所述自动可调活塞系统主要由活塞、曲柄滑块、电机组成；所述反应罐上端设有物料液入口、清洗窗口，所述反应罐内近底端有滤布板，所述...
- 曹海军杜晞叶生亮刘彬孙盼张容肖薇李长清
- 文献传递
- 无偿献血者ALT水平升高与戊型肝炎病毒亚临床感染的关系
- 目的 研究无偿献血者ALT水平升高与戊型肝炎病毒(HEV)亚临床感染的关系.方法 收集来自全国6家采供血机构共计356例血浆ALT水平升高的无偿献血者血样(设为实验组)，同时收集1 89例血浆ALT水平正常的健康无偿献血...
- 马莉苏娜肖薇李长清林方昭孙盼王鸿捷戎霞戴宇东刘建强蹇志伟汤龙海
- 关键词：丙氨酸氨基转移酶戊型肝炎病毒抗-HEV抗-HEVIGM
- DUSP22通过调控Syk的磷酸化选择性抑制胶原诱导的血小板活化
- 目的双特异性磷酸酶22(Dual-specificity phosphatases22,DUSP22)属于双特异性磷酸酶家族的一员,在血小板中有较高的表达水平,但其在血小板的生物学功能尚不明确。本研究旨在体外探究DUSP...
- 蒋鹏孙盼苏娜刘凤娟李长清肖薇林方昭
- 文献传递
