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实验性肺纤维化小鼠循环单核细胞亚群的动态变化及意义被引量：12: 2014年; 目的：外周血单核细胞表型偏移失衡与肺纤维化病理进展关系密切。文中通过阐述循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠不同病理时期的动态变化，探讨其表型偏移与肺组织炎症和纤维化的关系。方法100只雄性C57 BL/6 J小鼠随机数字表法分为等渗盐水组和博莱霉素组，经口咽吸入法分别给予等渗盐水及博莱霉素A5，术后第1、3、7、14及21天处死小鼠，病理学方法计算各组小鼠肺组织炎症评分（inflammation score， IS）及胶原容积分数（collagen volume fraction， CVF），常规方法进行支气管肺泡灌洗液（ bronchoalveolar lavage fluid ， BALF）细胞计数及分类计数，荧光定量PCR法检测各组小鼠肺组织胶原Ⅰ、胶原Ⅲ的mRNA表达量，氯胺T法检测肺组织羟脯氨酸（ hydroxyproline ， HYP）含量，流式细胞术检测循环单核细胞亚群的变化。结果博莱霉素组小鼠第3天炎性细胞浸润、肺泡壁水肿等炎症程度（ IS评价）较等渗盐水组显著增加（P＜0．01），第7天达到峰值后呈下降趋势。博莱霉素组小鼠第14、21天肺组织CVF较等渗盐水组明显增高（P＜0．01）；与等渗盐水组相应时间点比较，博莱霉素组第1天细胞总数无明显变化，第3天明显增多（25．18±2．06 vs 8．82±1．59， P＜0．01），第7天升至高峰（56．56±5．03 vs 3．68±0．79， P＜0．01），后呈下降趋势，但第14～21天细胞总数仍高于等渗盐水组（P＜0．01），肺泡巨噬细胞比例的变化趋势与细胞总数相一致；而中性粒细胞数量第1、3、7天显著高于等渗盐水组（9．086±1．268 vs 1．108±0．229、5．551±0．511 vs 0．315±0．100、8．093±0．922 vs 0．249±0．074），差异均有统计学意义（P＜0．01）；博莱霉素组胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达水平在第14、21天显著高于等渗盐水组（ P＜0．05）；HYP检测结果显示博莱霉素组第7、14、21天高于等渗盐水组（; 马永强姬文婕郑春秀张译丹彭守春胡道川陈雪芬周欣魏路清; 关键词：肺纤维化单核细胞博莱霉素

盐皮质激素受体阻断剂对SiO_2诱导的肺巨噬细胞表型偏移的调节被引量：2: 2016年; 目的:研究盐皮质受体阻断剂螺内酯(spirolactone,SPI)对二氧化硅(SiO_2)诱导的肺巨噬细胞表型偏移的影响。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为生理盐水(NS)组、SiO_2组、SPI治疗组(SiO_2+SPI组)及溶剂对照组(SiO_2+NS组),经口咽吸入SiO_2悬浊液(40 mg/kg)建立矽肺模型,对照组给予等量生理盐水,SiO_2+SPI组在造模后每天经口灌胃给予SPI(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),SiO_2+NS组以相同方式给予等量生理盐水。造模后3 d、14d、28 d取材,进行肺泡灌洗,取灌洗液细胞进行定量、分类计数及流式细胞术分析,右下肺叶用酶解法制成单细胞悬液行流式细胞术分析。结果:与SiO_2组相比,SPI治疗可以明显降低SiO_2干预后3 d、14 d支气管肺泡灌洗液总细胞数及巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数。SiO_2干预后14 d、28 d,肺泡巨噬细胞和间质巨噬细胞由M1表型向M2表型偏移,SPI治疗可以有效逆转SiO_2诱导的巨噬细胞表型偏移。结论:SPI可以减轻SiO_2导致的肺泡炎症细胞浸润,可能是通过逆转SiO_2诱导的巨噬细胞表型偏移实现的。; 苏程程张译丹向国安马永强周欣彭守春魏路清姬文婕; 关键词：螺内酯巨噬细胞

循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠中的动态变化及意义: 目的观察循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠中的动态变化,探讨其在肺纤维化发生发展中不同病理生理时期的作用.方法 100只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水组(NS组)和博莱霉素组(BLM组),参照Lakatos...; 马永强姬文婕张译丹胡道川陈雪芬魏路清

不同诱导剂体外诱导巨噬细胞胞外诱捕网形成效率的比较: 2016年; 目的比较体外诱导巨噬细胞胞外诱捕网(MET)形成的不同方法。方法采用(0.5、1、5、10)μg/m L脂多糖(LPS)、(10、25、50、80)μmol/L佛波酯(PMA)和(50、100、150)μg/m L二氧化硅(Si O2)处理RAW264.7细胞,在处理后3 h和6 h,采用免疫荧光染色法检测MET的产生,并对其进行半定量分析。结果免疫荧光染色表明MET主要由DNA和组蛋白构成,1μg/m L LPS处理RAW264.7细胞6 h,MET形成百分比为(37.04±10.02)%,明显高于对照组(7.90±2.71)%;80μmol/L的PMA处理细胞后MET形成百分比为(22.40±1.83)%,高于对照组(10.11±1.13)%;各剂量的Si O2诱导MET的量与对照组无明显差异。结论用LPS和PMA均能在体外诱导RAW264.7细胞MET的形成,Si O2诱导不是可行的方法。; 苏程程向国安马永强张译丹周欣彭守春魏路清姬文婕; 关键词：RAW264.7细胞脂多糖

循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠中的动态变化及意义: 目的观察循环单核细胞亚群在实验性肺纤维化小鼠中的动态变化,探讨其在肺纤维化发生发展中不同病理生理时期的作用。方法100只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水组(NS组)和博莱霉素组(BLM组),参照Lakatos等经...; 马永强姬文婕张译丹胡道川陈雪芬周欣魏路清

中性粒细胞胞外诱捕网生成和降解方法的建立和评价被引量：8: 2014年; 目的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是近年来新发现的与自身免疫性疾病和血栓形成有关的结构,本研究拟建立一种评价NET体外生成和降解的方法。方法通过Ficoll-Histopaque密度梯度离心法从健康人外周血分离中性粒细胞,利用佛波酯(PMA)诱导其产生NET,免疫荧光细胞化学染色和琼脂糖凝胶电泳验证NET的形成,PicoGreen dsDNA染色结合荧光强度进行定量分析,研究DNA酶(DNaseⅠ)和健康人血清对NET的降解。结果 Ficoll密度梯度离心法分离的中性粒细胞纯度达到95%。激光共聚焦显微成像显示NET网状结构主要由DNA和组蛋白组成,琼脂糖凝胶电泳显示NET的DNA条带大小超过10 000 bp。DNase和健康人血清均可降解体外诱导的NET,但程度不同。结论本实验成功建立了人NET体外诱导生成和降解的方法。; 李金龙张译丹周欣姬文婕赵季红魏路清李玉明; 关键词：中性粒细胞佛波酯

石英诱导小鼠矽肺模型中循环单核细胞亚群的动态变化及意义被引量：4: 2016年; 目的矽肺是一种以肺纤维化为病理特征的疾病,其发病机制仍不完全清楚,外周血单核细胞表型偏移失衡在肺纤维化病理进展中发挥着重要作用。文中旨在研究石英诱导小鼠矽肺（pneumosilicosis）模型中循环单核细胞亚群在不同病理阶段的变化特点,探讨其动态变化与肺炎症损伤和纤维化的关系。方法 100只雄性C57BL/6小鼠（18～22 g）随机数字表法分为等渗盐水组和石英组,石英组滴注吸入40 m L石英混悬液（100 mg/kg）,等渗盐水组滴注吸入相同体积无菌等渗盐水。经术后第1、3、7、14和28天应用流式细胞术检测循环单核细胞亚群变化;常规支气管肺泡灌洗术后进行炎症细胞分类计数;HE染色和苦味酸天狼星红染色检测小鼠肺组织炎症评分及胶原容积分数。结果病理染色显示,造模后第7天,小鼠肺组织可见明显的矽结节;与等渗盐水组相比,石英组小鼠肺组织炎症评分、胶原容积分数显著升高[（1.400±0.089）vs（0.920±0.049）、（1.950±0.065）vs（0.525±0.048）,P〈0.01],并持续到第28天[（1.520±0.136）vs（0.800±0.089）,（5.300±0.776）vs（0.850±0.050）,P〈0.01];与相应时间点等渗盐水组比较,石英组BAFL细胞总数于第1天开始升高[（7.693±2.495）vs（2.008±0.901）,P〈0.01],在第3天达到高峰[（13.346±3.563）vs（1.044±0.695）],随后第7、14、28天呈现递减趋势,但仍都高于等渗盐水组（P〈0.01）;石英组BALF巨噬细胞绝对值在第3天时显著高于等渗盐水组（6.821±2.627 vs 0.980±0.663,P〈0.01）,并在第7天维持于高水平状态[（6.697±1.864）vs（1.225±0.601）,P〈0.01],后呈下降趋势,但第14及28天巨噬细胞绝对值仍高于等渗盐水组（P〈0.01）;石英组BALF中性粒细胞绝对值在第1、3、7及14天都显著高于等渗盐水组（P〈0.01）,且呈现出逐渐下降的趋势,在第28天与等渗盐水组差异无统计学意义（P〉0.05）。石英组小鼠Ly6Chi�; 向国安苏程程张译丹马永强周欣林志春彭守春魏路清姬文婕; 关键词：矽肺单核细胞石英

干扰P2X_7R基因对RAW264.7细胞增殖和吞噬的影响被引量：4: 2015年; 目的:应用RNA干扰技术抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞P2X7受体(P2X7R)基因的表达,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法:用脂质体法将P2X7R shRNA重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定干扰细胞株。细胞分为野生型(WT)组、阴性对照(NC)组和干扰(sh P2X7R)组。Real-time PCR法检测细胞中P2X7R mRNA的表达,Western blot检测细胞中P2X7R蛋白的表达;CCK-8方法检测细胞生长活性,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,Ed U)掺入实验检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞周期的分布和吞噬情况。结果:P2X7R shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的P2X7R mRNA和蛋白的表达,抑制率在80%以上。48 h后,sh P2X7R组细胞的生长速度明显高于NC组和WT组(P<0.05),增殖期细胞比例明显升高(P<0.05),说明下调P2X7R基因能明显促进细胞增殖。sh P2X7R组的细胞周期出现改变,S期和G2/M期的比例明显上升,增殖指数增高(P<0.05)。sh P2X7R组的细胞吞噬活性明显高于NC组(P<0.05)。结论:本研究成功构建了稳定干扰P2X7R基因表达的小鼠巨噬细胞株RAW264.7,sh P2X7R能够明显促进RAW264.7细胞的增殖,改变了细胞的吞噬活性。; 苏程程张译丹马永强陈雪芬向国安周欣彭守春林志春魏路清姬文婕; 关键词：P2X7受体 RAW264.7巨噬细胞细胞增殖细胞吞噬

螺内酯对实验性矽肺小鼠的干预研究被引量：3: 2016年; 目的：探讨螺内酯（spirolactone,SPI）在实验性小鼠矽肺病理进展中的作用及机制。方法：将120只雄性C57 BL/6小鼠（18~20 g）随机分为生理盐水组（NS组）、石英组（quartz组）、石英＋生理盐水组（quartz＋NS组）和石英＋螺内酯组（quartz＋SPI组）,经口咽吸入石英混悬液建立实验性小鼠矽肺模型;quartz＋SPI组及quartz＋NS组每天分别经灌胃给予螺内酯10 mg/kg或等体积的生理盐水。术后3 d、14 d和28 d处死小鼠,行常规支气管肺泡灌洗术,回收支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）进行细胞分类和计数;采用ELISA法检测BALF上清中转化生长因子β1（TGF-β1）的含量;采用HE染色、Masson染色和免疫荧光染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度;采用RT-q PCR检测各组肺组织中胶原Ⅰ（Col Ⅰ）、胶原Ⅲ（Col Ⅲ）及TGF-β1的mRNA表达水平。结果：经口咽吸入石英后,小鼠肺组织经历了典型的急性炎症期和纤维化期改变,给予SPI干预后的小鼠肺组织炎症反应程度相比于quartz＋NS组减轻（P〈0.05）。给予螺内酯干预后,在第3天小鼠肺组织TGF-β1的mRNA表达量显著下调（P〈0.01）,BALF中TGF-β1的含量也显著减少（P〈0.01）。到第28天,quartz＋SPI组小鼠肺组织Col Ⅰ、Col Ⅲ的mRNA表达量明显低于quartz＋NS组（P〈0.05）。结论：SPI可能通过调控TGF-β1的mRNA表达,减少TGF-β1蛋白的分泌,从而改善石英导致的早期急性炎症反应,并在纤维化期减轻了Col Ⅰ和Col Ⅲ的mRNA表达,抑制了纤维化的进展。; 向国安苏程程张译丹马永强周欣魏路清姬文婕; 关键词：石英肺纤维化螺内酯转化生长因子Β1

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张译丹

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