何志强
- 作品数：16 被引量：60H指数：4
- 供职机构：河南省中医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目河南省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立
- 2010年
- 目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。
- 何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪
- 关键词：DC2.4EGFP
- 玉米胚芽多肽对小鼠免疫功能的影响
- 目的：探讨玉米胚芽提取多肽对小鼠免疫功能的影响.
方法：以BALB/c小鼠为研究对象,玉米胚芽多肽溶液分高(300mg/L)、中(150mg/L)、低(80mg/L)三个剂量组每天灌胃给药30天,同时设定灵芝多...
- 何志强杨恒李永伟
- 关键词：实验药理免疫功能细胞增殖能力
- 病毒性心肌炎患者外周血单核细胞来源DCs的功能研究被引量：5
- 2011年
- 目的:体外诱导病毒性心肌炎患者外周血单核细胞来源的DCs(Mo-DCs),并探讨其功能状态的变化,为寻求病毒性心肌炎的致病机制和新的治疗途径提供实验依据。方法:无菌分离18例临床病毒性心肌炎患者及20例健康志愿者外周血单核细胞,分别加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导外周血Mo-DCs,应用免疫荧光标记技术、流式细胞分析和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法比较病毒性心肌炎患者和健康志愿者外周血Mo-DCs的表型、吞噬能力和表达细胞因子的差异。结果:病毒性心肌炎患者外周血Mo-DCs表达较高水平的CD83、CD80、CD86和MHCⅡ,但是吞噬能力下降,并且分泌较高水平的TNFα-(P<0.01)和IL-12(P<0.01),可以更有效地刺激T淋巴细胞增殖。结论:病毒性心肌炎患者外周血Mo-DCs处于较成熟功能状态,且表达较高水平的IL-12和TNFα-。进而有可能通过调节T细胞、NK细胞和巨噬细胞发挥效应而在病毒性心肌炎的发生发展中起到举足轻重的作用。
- 李永伟何志强杨恒张小倩王春霞裴东旭
- 关键词：病毒性心肌炎树突状细胞细胞因子
- 类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1RORγ／t和白细胞介素-17表达水平的检测及临床意义被引量：3
- 2010年
- 目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血高迁移率族蛋白1（HMGB1）及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平，同时分析其与C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）和类风湿因子（RF）的关系，初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及其与Th17的关系。方法收集80例RA患者外周血标本，其中静止期32例、活动期48例，健康志愿者50名。采用实时荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中HMGB1、RORγt和白细胞介素（IL）-17的mRNA水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆HMGB1、IL-17、IL-23的蛋白浓度，采用单因素方差分析和Spearillan相关分析进行统计学处理。结果RA患者PBMC中HMGB1、RORγt和IL一17mRNA的表达水平均高于健康对照组（P〈0．05），且活动期[HMGB1（0．424±0．262）pg／ml，RORγt（0．34±0．25）pg／ml，IL-17（1．42±0．38）pg／ml]明显高于静止期（R0．01）。血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白水平也显示类似的结果，RA组明显高于健康对照组（P〈0．05），且与CRP、ESR、RF呈正相关（P〈0．05）。结论检测RA患者外周血HMGB1和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子水平，有助于探讨HMGB1和IL-17在RA发病过程中的病理生理作用，也为寻找RA的治疗靶点提供了新的思路。
- 石燕王胜军陈建国薛渊何志强周成林郑东杨恒李雅贞仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：白细胞介素17
- 远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。
- 何志强薛渊石燕杨恒赵银霞王楷文周成林王胜军邵启祥焦志军许化溪
- 关键词：原核表达
- ANA阴性而SS-A抗体阳性的临床意义
- 目的：探讨间接免疫荧光法抗核抗体(ANA)阴性,而印迹法抗干燥综合征A抗体(SS-A)阳性的临床意义.
方法：回顾性总结本院2013年1月～2014年12月5471例患者中54例抗SS-A抗体阳性而ANA阴性的...
- 曹新春何志强李永伟
- 关键词：自身免疫病抗核抗体间接免疫荧光法
- Toll样受体8在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达及其激动剂对HeLa细胞增殖和凋亡的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察Toll样受体8（TLR8）在人宫颈癌细胞株HeLa中的表达，探讨TLR8激动剂CL075对HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法，检测13种肿瘤细胞系中TLR8mRNA和经CL075作用后HeLa细胞中环氧化酶2（COX-2）、Bcl-2和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达水平；采用免疫荧光技术对HeLa细胞中TLR8蛋白的表达进行定位观察；采用流式细胞术检测不同浓度CL075作用下HeLa细胞的细胞周期和凋亡的变化；采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HeLa细胞的增殖状态。结果与其他肿瘤细胞株相比，HeLa细胞中TLR8mRNA的表达水平最高，达703．7±20．6。TLR8蛋白主要定位于HeLa细胞的胞浆中。0．1、0．5和1．0μg／ml的CL075分别作用于HeLa细胞48h后，G2／M＋s期细胞所占的比例逐渐增高，其中1．0μg／mlCL075作用组G2／M＋S期细胞所占的比例最高，达（57．67±1．73）％，明显高于空白对照组[（39．02±2．33）％，P〈0．01]。经不同浓度的CL075处理后，HeLa细胞的凋亡水平与空白对照组相比，无明显改变（P〉0．05）；但经顺铂处理后，凋亡细胞明显增多（P〈0．01）。MTT法检测结果显示，与空白对照组比较，CL075作用于HeLa细胞48和72h后，HeLa细胞的增殖能力明显增强（P〈0．01）。CIA）75作用于宫颈癌HeLa细胞24和48h后，COX-2、Bcl-2和VEGF mRNA的表达水平明显升高（P〈0．05）。结论宫颈癌HeLa细胞中TLR8的表达水平及其与配体相互作用的信号，可能是肿瘤发生和发展的重要因素之一。TLR8可能是宫颈癌治疗的一个潜在靶点。
- 杨恒何志强赵银霞王楷文郑东苏兆亮仝佳马洁王胜军许化溪
- 关键词：宫颈肿瘤HELA细胞细胞增殖细胞凋亡
- 转录因子Hlx修饰树突状细胞系DC2.4的功能研究
- 2011年
- 目的:在鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时表达Th1特异的核转录Hlx,探讨该转录因子对树突状细胞系DC2.4的功能的影响。方法:含有Hlx基因全部编码序列的真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx通过脂质体转染的方法转入DC细胞,转染效率应用FACS鉴定;Hlx基因在DC中表达情况应用RT-PCR和Real-time PCR检测。转染48 h后,分别从细胞因子,表面分子,吞噬功能,单向混合淋巴细胞反应方面对DC功能进行探讨。结果:真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx成功转入DC细胞,转染率可高达60%;在树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可以有效的增进成熟标志CD80,CD86,MHCII分子的表达,减弱DC的吞噬功能,IL-12表达量增加,但同时却高表达IL-10,TGF-β并表现为可抑制淋巴细胞增殖。结论:在小鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可有效地促进DC2.4的成熟,但是在功能方面多表现为调节性DC的功能。
- 周成林苏兆亮朱金连何志强王胜军李平许化溪
- 关键词：IL-10树突状细胞
- T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用RealtimePCR和Westernblot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;RealtimePCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CD80、CD86与MHCⅡ类分子表达情况。结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达下调,IFN-γmRNA水平显著下降。结论:成功地构建了T-betshRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能。
- 薛渊王胜军何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET真核表达树突状细胞
- TNF-α、TGF-β_1在慢性非细菌性前列腺炎病人前列腺液中的表达水平及意义被引量：18
- 2013年
- 慢性非细菌性前列腺炎（CNP）为一种发病机制和病因尚未明确的疾病。有学者认为其由病原体感染、炎症、盆底神经肌肉的异常以及免疫异常等共同作用导致〔1〕。根据前列腺液镜检的结果将CNP分为炎症型和非炎症型。近年来,许多临床和动物实验研究〔2,3〕显示,免疫反应在CNP的发生发展中发挥着非常重要的作用,其整个发生过程是以细胞因子为中心产生的各种连锁反应。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。
- 李永伟王春霞何志强
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α转化生长因子-Β1慢性非细菌性前列腺炎
