徐建
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：燕山大学环境与化学工程学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 人可溶性CD83在体外抑制PBMC分化为树突状细胞的研究
- <正>CD83属于Ⅰ型免疫球蛋白超家族(IgSF)糖蛋白,表达于成熟的树突细胞(DC),被认为是人类和小鼠成熟DC的一个特定的标志物。然而CD83具有多种免疫调节作用。研究发现CD83有两种形式,细胞膜结合CD83和由膜...
- 林洪羽徐建能昌爱王利月仲飞李秀锦
- 文献传递
- 微生态制剂的研究进展与应用前景
- 本文就微生态制剂的作用及畜牧业中的应用进行了概述,并对其应用前景作了展望.微生态制剂(Microbolecological agents)指经特殊工艺制成的生物活性制剂,它能促进动物消化道内微生态平衡的建立,提高机体对饲...
- 郑志强徐建张永红霍珊珊仲飞李秀锦
- 关键词：饲料添加剂微生态制剂肠道菌群免疫力
- PRRSV对猪树突细胞可溶性CD83释放影响的分析
- 2015年
- 为研究猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)感染是否促进猪树突细胞可溶性CD83(sCD83)的释放,在体外用PRRSV感染猪树突细胞,通过ELISA检测了树突细胞培养基sCD83的含量,结果显示PRRSV可明显提高猪树突细胞培养基sCD83的含量,表明PRRSV促进树突细胞sCD83的释放。为研究PRRSV对猪树突细胞CD83表达的影响,用RT-PCR和流式细胞术分别检测了细胞CD83mRNA的水平和细胞膜CD83的含量。结果显示PRRSV可提高猪树突细胞CD83 mRNA的水平,然而对细胞膜CD83的含量影响不大,说明PRRSV促进sCD83释放的作用高于刺激CD83表达的作用,致使膜结合的CD83保持较低的水平。PRRSV诱导树突细胞sCD83的释放为探讨PRRSV感染引起免疫抑制提供了重要的线索。
- 李秀锦霍珊珊张永红张建楼徐建林洪羽王利月仲飞
- 关键词：PRRSV免疫抑制
- 猪肺泡/羊水表面活性蛋白A的分离纯化及抗菌和抗病毒活性的分析被引量：2
- 2017年
- 为探讨猪肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的抗菌和抗病毒活性,需要从猪肺泡液和羊水中分离纯化SP-A。首先通过化学交联法将麦芽糖共价交联在Sepharose胶粒上,制成能够与SP-A结合的胶粒,即麦芽糖-Sepharose(MS)。采集肺泡灌洗液(BLAF)和羊水(AF),以11 000r/min转速离心40 min获得富含SP-A的沉淀;将沉淀溶解于含8mol/L尿素的缓冲液I中使SP-A变性,再以无尿素的缓冲液I透析使其复性。然后在含Ca2+的结合缓冲液中用MS吸附SP-A,用含EDTA的洗脱液洗脱,洗脱的SP-A过Sephadex G-75凝胶柱得到纯化的SP-A。SDS-PAGE和Western blot鉴定结果显示:在相对分子质量为35 000和70 000处出现特异的SP-A蛋白带(或杂交带)。菌体凝集试验显示:SP-A具有凝集E.coli的作用,表明制备的SP-A具有生物活性。抑菌试验证实SP-A对致病性E.coli、肠沙门杆菌、肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的增殖均有不同程度的抑制作用,特别是对E.coli和肠沙门杆菌抑制作用更为明显。抗病毒检测结果显示:SP-A可明显抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在MARC-145细胞中的增殖,同时对猪细小病毒(PPV)在PK-15细胞中的增殖也有一定的抑制作用。结果表明:制备的猪SP-A在体外具有明显的抗菌和抗病毒活性,这为以后进一步研究猪SP-A的生物学特性及抗菌、抗病毒活性提供了必要的条件。
- 张永红霍珊珊张建楼徐建左玉柱王利月崔丹李秀锦仲飞
- 关键词：抗病毒活性
- 密码子优化提高PRRSV GP5/M双基因在真核细胞中的同步表达被引量：3
- 2015年
- 为提高猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)GP5和M蛋白基因在动物细胞中同步表达水平,本试验依据动物偏爱的密码子对GP5和M蛋白基因分别进行了密码子优化,并利用本室构建的含内部核蛋白体进入位点(IRES)载体pcDNA-IRES,将密码子优化的和野生型的GP5基因和M蛋白基因分别插入到IRES的上下游,分别构建成GP5与His-标签融合和M蛋白与Myc-标签融合的密码子优化的和野生型的GP5/M双基因表达载体pcDNA-OpGP5/His-IRES-OpM/MH和pcDNA-GP5/His-IRES-M/MH,将双基因表达载体转染HEK293T细胞使其表达,通过Western blot检测,比较GP5和M蛋白在真核细胞的表达水平。结果显示,密码子优化可明显提高GP5和M在HEK293T细胞中的表达水平,本试验为GP5和M蛋白功能的研究提供了有利条件。
- 张永红徐建张建楼霍珊珊王利月林洪羽李秀锦仲飞
- 关键词：密码子优化PRRSVGP5蛋白M蛋白
- 重组鸡白细胞介素-7在HEK293T细胞中的表达及其条件分析被引量：1
- 2016年
- 为提高重组鸡白细胞介素-7(chIL-7)在真核细胞中的表达水平,本试验分析了影响基因表达的一些因素,包括转染方法、质粒用量、转染时间及表达时间等,对重组chIL-7表达水平的影响,并通过正交试验设计方法确定了利用HEK293T细胞表达重组chIL-7的最适表达条件。结果表明,在T75细胞瓶中,由脂质体介导使用30μg质粒,转染4h,表达48h和由磷酸钙介导使用40μg质粒,转染6h,表达60h可以获得较高的表达效率,表达水平分别为(124±9)和(94.3±8)μg/106个细胞。本结果为进一步研究chIL-7的功能提供有利条件。
- 霍珊珊王利月张永红张建楼徐建崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：正交试验
- 猪CD163 cDNA扩增及其稳定表达细胞系(CHO-K1)的建立被引量：1
- 2016年
- 猪CD163是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的重要受体之一。为探讨此受体在病毒感染过程中与PRRSV的相互作用,需要建立稳定表达猪全长CD163基因的细胞系。首先通过RT-PCR方法从猪肺泡巨噬细胞中扩增猪全长CD163cDNA,然后通过KpnI和XhoI将其插入到pcDNA3.1A质粒中,构建成真核表达载体。将表达载体转染CHO-K1细胞,通过G418加压,筛选出在细胞膜上稳定表达猪CD163的细胞系。结果显示,扩增出的猪CD163基因与基因库的序列基本一致,个别碱基的突变没有引起编码氨基酸的改变。通过转染表达载体和G418筛选,成功构建了稳定表达猪全长CD163基因的CHO-K1细胞系。经流式细胞仪检测证实,重组猪CD163可在CHO-K1细胞膜上进行表达,这为进一步研究PRRSV与CD163受体相互作用提供了必要条件。
- 徐建霍珊珊张建楼张永红崔丹仲飞李秀锦
- 关键词：CHO-K1细胞流式细胞术
- IL-15基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用被引量：1
- 2016年
- 为弄清犬白介素-15(cIL-15)能否增强犬细小病毒VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究首先通过RT-PCR方法从犬脾脏淋巴细胞中扩增全长cIL-15cDNA基因,并构建其与Myc-His-tag融合和非融合的表达载体:pcDNA-cIL-15/MH和pcDNA-cIL-15。将pcDNA-cIL-15/MH载体转染HEK293T细胞,确定构建的表达载体能否介导cIL-15进行分泌表达。利用过去构建的VP2表达载体和pcDNA-cIL-15载体共免疫小鼠,用ELISA检测免疫后小鼠血清中的抗体滴度,并用MTT检测小鼠淋巴细胞的增殖活性和用ELISA测定淋巴细胞干扰素-γ和IL-4的表达。结果显示,构建的cIL-15表达载体能够介导cIL-15在真核细胞中的分泌表达。用VP2和cIL-15表达载体共免疫小鼠,抗体水平明显高于VP2载体单免疫组(P<0.01)。当免疫35d时,共免疫组淋巴细胞的刺激指数、干扰素-γ和IL-4的表达水平均明显高于VP2载体单免疫组(P<0.05)。结果表明,cIL-15可明显增强VP2DNA疫苗的免疫原性。
- 霍珊珊李楠吴峰洋崔丹张建楼张永红徐建仲飞
- 关键词：免疫佐剂犬细小病毒
- CD83——免疫系统的重要调节分子
- CD83为跨膜分子,免疫球蛋白超家族中一个保守性的成员,在外周血循环中,被认为是成熟树突状细胞(DC)表面重要的标志分子。CD83在鼠科动物的树突状细胞中的作用尚未明确。然而,证据表明,其功能主要在于控制T和B淋巴细胞的...
- 林洪羽徐建李秀锦
- 关键词：CD83免疫
- 文献传递
- 犬细小病毒的研究进展
- 犬细小病毒是在1978年被首次分离,属细小病毒属成员,单链小DNA病毒。该病毒对犬的感染危害严重。可引起的一种高度接触性传染病,即犬细小病毒病。因此,对犬细小病毒的深入研究可以对该病的防治提供有效措施。本文在犬细小病毒的...
- 林洪羽徐建李秀锦
- 关键词：犬细小病毒生物学特征疫苗
- 文献传递
