何婷
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 柯萨奇病毒A组16型毒株的分离及其生物学特性初步分析
- 2014年
- 目的 对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）毒株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为CA16疫苗候选毒株的筛选奠定基础.方法 从手足口病患者的咽拭子或疱疹液样本中分离CA16毒株,经噬斑纯化后,用逆转录-聚合酶链反应进行病毒鉴定.将病毒连续传代后,对其VP1基因进行序列测定,分析VP1基因和氨基酸序列的同源性和遗传稳定性.结果 通过Vero细胞适应传代和噬斑纯化,获得遗传稳定的CA16毒株,感染Vero细胞后引起典型的细胞病变.病毒分离株经CA16特异性引物扩增后可见208 bp的特异性条带,经VP1基因测序进一步确定这些分离株为CA16.同源性和系统进化树分析表明,各毒株与shzh04-J31株的同源性最高,为92.4％～96.1％,均属于C基因亚型.病毒分离株在Vero细胞上连续传12代后,仅1株病毒的1个氨基酸发生改变.结论 成功分离到CA16毒株,其生物学特性稳定,可用于CA 16疫苗的研发.
- 曾献武陈平李玫颖何婷刘杰孙艳范凤鸣何敏
- 关键词：肠道病毒属VP1基因氨基酸序列手足口病
- 一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种乙脑/黄热嵌合病毒的cDNA克隆，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明还公开了乙脑/黄热嵌合病毒及其应用，以及一种预防黄热病的疫苗。本发明嵌合病毒Chimeri-JYF的毒性小，免疫保护作用好...
- 杨会强汪伟何婷刘莉娜赵宇刘俐曾献武
- 寨卡病毒E蛋白第三结构域的可溶性表达及多克隆抗体的制备
- 2019年
- 目的原核表达并纯化寨卡病毒(Zika virus)E蛋白第三结构域(ZK-EⅢ)重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增ZK-E Ⅲ序列,经双酶切后将其插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-ZKE Ⅲ,转化至大肠埃希菌(E. coli)Rosetta2(DE3),经IPTG诱导,表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备ZK-E Ⅲ多克隆抗血清,进行Western blot鉴定后,ELISA法检测该抗血清效价。结果经PCR及测序鉴定证明原核表达质粒pET-ZKE Ⅲ构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量约31 000,主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的60%;用纯化的重组蛋白免疫家兔后,获得的血清特异性良好,血清效价为1∶51 200。结论 ZKE Ⅲ蛋白在E. coli中以可溶性形式表达,制备的抗血清特异性好,效价高,具有用于寨卡病毒诊断和进行重组亚单位疫苗开发的潜力。
- 何婷杨欢范凤鸣刘杰牟建超孙艳陈智代云见曾献武杨会强
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 乙型脑炎减毒活疫苗病毒群体的异质性分析被引量：2
- 2015年
- 目的通过观察疫苗病毒群体中病毒个体的遗传和生物学特征，分析SA14-14—2株乙型脑炎减毒活疫苗病毒的均一性，为疫苗病毒的遗传稳定性提供实验证据。方法对3批疫苗病毒连续进行3次蚀斑纯化后，各挑选8个蚀斑纯化株，扩大培养一代。比较24个病毒纯化株的包膜（envelope，E）蛋白基因序列、单斑培养病毒滴度以及蚀斑特征。结果24个纯化株中共有6个病毒株（25％）的E蛋白核苷酸发生变化，其中2株（8．3％）的核苷酸变异导致其编码氨基酸发生改变，这些变异占总核苷酸变异数的28．6％。动物实验表明，这2个纯化株没有引起小鼠神经毒力变化。在所有24个纯化株中，我国2010年版药典规定的影响疫苗病毒遗传稳定性的8个E蛋白关键位点的氨基酸均未发生改变。24个纯化株病毒的蚀斑大小和形态以及单斑培养滴度均无明显差异。结论疫苗病毒具有典型的准种群体多样性特征，但在群体病毒中未检测到E蛋白氨基酸位点为野生型病毒位点的个体病毒，因此，疫苗病毒具有很好的减毒群体特征和遗传稳定性。
- 杨会强汪伟刘莉娜何婷曾献武
- 关键词：脑炎病毒遗传异质性
- 一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种乙脑/黄热嵌合病毒的cDNA克隆，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了乙脑/黄热嵌合病毒及其应用，以及一种预防黄热病的疫苗。本发明嵌合病毒Chimeri‑JYF的毒性小，免疫保护作用好...
- 杨会强汪伟何婷刘莉娜赵宇刘俐曾献武
- 文献传递
- 无小鼠神经毒力的乙型脑炎病毒／登革病毒1型嵌合病毒的筛选与序列分析
- 2018年
- 目的采用蚀斑纯化法筛选对小鼠无神经毒力的乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）／登革病毒（denguevirus，DENV）1型嵌合病毒（JD1）纯化株，分析影响JD1小鼠神经毒力的相关位点。方法将JD1在乳地鼠。肾细胞中进行3轮蚀斑纯化，检测JD1纯化株对小鼠的脑内神经毒力。然后提取无神经毒力纯化株的基因组RNA，用逆转录PCR分段扩增全基因组序列并进行序列测定。将测序结果分别与原DENV-1的前膜-包膜蛋白和JEV骨架病毒株SA-14-14-2的基因序列进行比对。选取2个无神经毒力纯化株进行小鼠免疫保护实验。采用单侧￡检验对结果进行比较。结果经过3轮蚀斑纯化后，获得大、中、小3种蚀斑形态的6个JD1纯化株。3个纯化株对小鼠无神经毒力，小鼠脑内注射后全部存活；1株神经毒力较弱，70％以上小鼠存活；2株具有强神经毒力，小鼠全部死亡。测序结果显示，对小鼠无神经毒力的3个纯化株存在2处相同的氨基酸突变。将其中2个纯化株JD1-PP-61和JD1-PP-31腹腔免疫小鼠后，再用1000半数致死量DENV-1鼠脑适应株进行脑内攻击。JD1-PP-61能较好地保护小鼠抵抗病毒攻击，仅20．0％小鼠死亡（t=7．237，P〈0．001）；JD1-PP-31保护效果稍弱，41．9％小鼠死亡（t=4．752，P〈0．01）。结论通过蚀斑纯化筛选出对小鼠无神经毒力的JD1纯化株，并发现了可能与神经毒力减弱相关的位点。
- 何婷范凤鸣牟建超杨欢刘莉娜刘俐汪伟曾献武杨会强
- 关键词：登革热病毒脑炎病毒神经毒力
- 乙脑/登革2型嵌合病毒的构建及其作为疫苗候选株的初步检定
- 2018年
- 目的构建以乙脑疫苗株SA14-14-2为基因骨架的乙脑/登革2型嵌合病毒,并进行初步检定,分析其作为疫苗候选株的可行性。方法用登革病毒(dengue virus,DENV)减毒株PDK53 prME基因替换乙脑病毒疫苗株SA14-14-2的相应区域,构建乙脑/登革2型嵌合病毒全长克隆质粒,通过体外转录、转染原代地鼠肾(PHK)细胞,拯救出乙脑/登革2型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒的蚀斑特征、增殖特征、神经毒力和神经侵袭力、免疫原性及免疫攻击保护作用。结果构建的嵌合病毒比乙脑疫苗株SA14-14-2具有更小的蚀斑,在PHK细胞上具有更低的增殖能力;对成鼠无神经毒力和神经侵袭力;可诱导小鼠产生较高的中和抗体效价,且免疫8周后,中和抗体滴度无明显下降(P> 0. 05);能保护小鼠免受致死剂量DENV的脑内攻击。结论本实验制备的嵌合病毒具有良好的安全性、免疫原性及免疫保护作用,有望作为登革疫苗候选株。
- 牟建超范凤鸣陈智冯劲松何婷杨欢杨会强曾献武刘杰
- 关键词：乙型脑炎病毒登革病毒神经毒力免疫保护
