张跃进
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：温州医科大学护理学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金温州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HCMV-UL138 CTL表位肽重组酵母菌的构建及其免疫效应被引量：1
- 2015年
- 目的:以乙肝病毒表面抗原为载体,制备含人巨细胞病毒(HCMV)-UL138 CTL表位肽的重组酵母菌并分析其免疫效应。方法:根据蛋白质数据库获得HCMV-UL138氨基酸序列,综合应用SYFPEITHI、NetCTL及HLA-Bind方法筛选富含CTL表位的UL138多肽,插入到乙肝表面抗原前S2(Pre S2)1-9区末端再与HBsAg序列连接,在不改变氨基酸密码的前提下,根据酵母偏爱密码子优化序列,进行全序列合成,克隆入pPIC3.5K酵母载体,构建pPIC3.5K/Pre S2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组质粒经Bgl I处理线性化后,电转化至GS115菌株中,构建Pre S2-HBsAg-UL13815-27重组酵母,阳性整合菌株经甲醇诱导后,通过Western blot及ELISA方法鉴定目的蛋白表达。鉴定的重组酵母菌经灭活后,全菌体皮下免疫BALB/c小鼠,通过ELISA法检测HBsAg特异性血清Ig G抗体;UL13815-27 CTL表位肽(VMLVLIVAILCYL)刺激免疫小鼠的脾细胞,通过检测IFN-γ表达分析诱导产生的CTL反应。结果:PCR、酶切和测序分析表明成功构建了pPIC3.5K/Pre S2-HBsAg-UL13815-27重组质粒。重组酵母经甲醇诱导后,酵母裂解液中可检测到HBsAg特异性抗体识别的、分子量约33 kD目的蛋白。表达Pre S2-HBsAg-UL13815-27灭活全菌体免疫小鼠后,可检测到HBsAg特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经UL13815-27 CTL表位肽刺激,IFN-γ表达水平比对照组明显升高。结论:重组酵母全菌体成功表达了Pre S2-HBsAg-UL13815-27重组蛋白,且重组酵母菌全菌体免疫小鼠可诱导产生UL13815-27特异性的细胞免疫。
- 张跃进柳献云陈向敏田晓娟李文姝薛向阳
- 关键词：人类巨细胞病毒CTL表位乙肝病毒表面抗原
- 表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120～146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价被引量：2
- 2014年
- 目的：构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120～146片段（PreS2120-146）-HBsAg 的重组酵母菌，并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列，串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3．5K 表达载体，构建 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 质粒，重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后，电转化至 GS115菌株中，筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母，通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达；以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB／c 小鼠，采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体；以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞，通过实时PCR 检测γ干扰素表达，分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3．5K／PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后，SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较，灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当（t＝0．946，P ＝0．381）。CTL 反应检测显示， HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素（t＝2．305，P ＝0．044）。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白，全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。
- 陈向敏张跃进田晓娟夏平潘唯文夏天俞陈慧张丽芳薛向阳
- 关键词：PRES2毕赤酵母免疫反应
