刘春明
- 作品数：10 被引量：193H指数：7
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 表达豇豆胰蛋白酶抑制剂(CPTI)的转基因NC89的抗虫性研究被引量：2
- 1993年
- 利用 Ti 质粒介导的叶圆盘转化法,将豇豆腋蛋白酶抑制剂基因导入 NC89,并获得再生植株,对转基因植株进行了室内和田间抗虫性鉴定,结果表明,21%的植株对烟青虫危害具有高度抗性;另45%的植株对烟青虫危害具有明显抗性。转基因烟草的叶面平均虫害面积只有对照 NC89的25%。
- 吴中心张同庆张保占姚根怀梁洪敏朱桢刘春明李向辉
- 关键词：蛋白酶抑制剂转基因抗虫性
- 转抗虫基因烟草NC89纯合品系的获得及大田抗虫试验被引量：4
- 1995年
- 经过连续三代抗虫性鉴定，选育出了表达直豆胰蛋白酶抑制剂（ＣＰＴＩ）的广谱抗虫转基因烟草ＮＣ８９纯合品系ＮＣ８９Ｌ２７－１９和ＮＣ９８Ｌ２７－２１。在大田对两个纯合系的抗虫性状进行了研究。①人工接种烟青虫；②害虫自然发生，不施杀虫剂；③在同一虫害防治阈值时施用杀虫剂。结果表明：转基因品系可稳定表达抗虫性状。在不施用杀虫剂时，田间相对抗虫效果在６４．７％～７０．５％之间；在施用杀剂时，可减少用药量４０％左右。转基因品系仍维持原ＮＣ８９主要植物学特性及农艺性状，为ＮＣ８９品种的抗虫改良品系。
- 吴中心张同庆姚根怀郭芳阳朱帧刘春明周兆斓李向辉常宝勋
- 关键词：转基因
- 水稻cDNA文库的构建及巯基蛋白酶抑制剂cDNA的分离被引量：23
- 1996年
- 取开花后２周左右的水稻未成熟种子提取总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，进而反转录合成ｃＤＮＡ并定向插入λｇｔ２２Ａ克隆载体，经体外包装建成水稻未成熟种子的表达型ＣＤＮＡ文库，经测定库容量达１．５×１０＾６Ｐｆｕ，进一步人工合成水稻巯基蛋白抑制剂（Ｏｒｙｚａｃｙｓｔａｔｉｎ）编码基因５－端保守的２１Ｎｔ的寡核苷酸经末端标记作为探针，从２．１×１０＾４Ｐｆｕ中筛选出９个阳性克隆。
- 周兆斓朱祯刘春明张海涛肖桂芳李向辉
- 关键词：水稻CDNA文库抑制剂CDNA
- 抗虫转基因烟草8611纯合系的选育被引量：1
- 1995年
- 对获得的表达江豆胰蛋白酶抑制剂的转基因８６１１进行了抗虫性研究，从转基因当代植株中筛选出两株高抗单株８６１１－６、８６１１－１１，在用其离体叶片饲养烟方虫８天后，对烟青虫的杀死率分别达到５０％和４０％。在田间接种及自然（不施药）条件下，８６１１－６、８６１１－１１子代植株的虫害指数分别为６３．５％、６９．３％（接种后１５天）和３７．７％、３９．８％（移栽后２５天），而未转基因对照植株的虫害指数分别为９３．５％和５７％。
- 吴中心张同庆姚根怀朱祯刘春明李向辉
- 关键词：转基因抗虫性烟草选育
- 豇豆胰蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：42
- 1993年
- 从即将成熟的豇豆子叶中分离出总RNA,逆转录合成cDNA第一条链。参照已知的几种Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列,设计并合成了两段寡核苷酸引物,以单链cDNA为模板,进行PCR扩增,得到320bp的均一扩增产物,克隆到pBluescrip SK(+)的EcoRV位点上并转化大肠杆菌JM101。酶切图谱及DNA序列分析表明克隆到的片段含有编码完整80个aa的豇豆胰蛋白酶抑制剂结构基因和一段编码27aa的前导序列。利用限制酶NcoI对其前导序列进行缺失,只保留成熟蛋白结构基因上游第一个ATG密码子并克隆到大肠杆菌表达载体pKK233-2中进行表达研究,从转化细菌的提取物中检测到了外源CpTI基因表达产物对胰蛋白酶的抑制活力。
- 刘春明朱祯周兆斓孙宝林李向辉
- 关键词：豇豆胰蛋白酶抑制剂
- 转化脂介导小麦原生质体转化及转基因白化苗的再生被引量：19
- 1993年
- 应用转化脂介导转化技术成功地将含有潮霉素磷酸转移酶基因的Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＣＧＮ１０５５导入到了小麦（徐州２１１）原生质体内，并由此获得了转化愈伤组织。根据Ｈｐｔ抗生及ＤＮＡ分子杂交证实转化频率高达６．０－８．８％，在分化培养基上转化愈伤组织再生出了白化植株，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和酶活性检测证明外源Ｈｐｔ基因存在于转化植株（白化苗）内，并进行了有效的表达。
- 朱祯孙宝林刘春明肖桂芳李向辉
- 关键词：小麦原生质体转基因植物
- 水稻巯基蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的表达被引量：11
- 1996年
- 根据从水稻未成熟种子cDNA文库中筛选出的水稻巯基蛋白酶抑制剂(Oryzacys-tatin)cDNA序列,利用聚合酶链反应(PCR)技术扩增出Oryzacystatin编码区,插入到温度敏感型大肠杆菌表达载体的P_RP_L启动子下游,该质粒带有温度敏感型阻遏子的编码基因cIts857。转化大肠杆菌DH5α后,通过升温诱导,Oryzacystatin在大肠杆菌中获得高效表达,SDS-PAGE表明分子量约为12kDa,与预期结果一致,表达量占细菌可溶性蛋白总量的10％以上;对巯基蛋白酶的抑制活性检测表明,可溶性蛋白组分对木瓜蛋白酶有明显的抑制活力。
- 周兆斓朱祯陈荣刘春明李向辉
- 关键词：水稻抑制剂CDNA
- 从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法被引量：7
- 1995年
- ｃＤＮＡ文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力．利用微波炉加热的方法，简化了原位杂交中噬菌斑裂解、ＤＮＡ变性与固定的程序；进一步运用ＰＣＲ扩增技术，特异扩增克隆载体中插入的ｃＤ－ＮＡ片段，加快了阳性克隆分析的进程．
- 周兆斓朱祯刘春明肖桂芳李向辉
- 关键词：DNACDNA文库
- 豇豆胰蛋白酶抑制剂抗虫转基因烟草的获得被引量：84
- 1992年
- 主要农作物、园艺作物以及林木由于受到多种害虫的严重危害,造成巨大的经济损失。即使每年喷洒大量农药,也不能得到有效控制。害虫易产生抗性,而且造成严重的环境污染。因此,培育广谱抗虫的作物有重要的现实意义。植物蛋白酶抑制剂是一类天然的抗虫物质。
- 刘春明朱祯周兆斓孙宝林冯平章李向辉
- 关键词：植物转化烟草
