王珊
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学公共卫生学院预防医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白磷酸酶2AB5613全酶调控氯化镉诱导肝细胞毒性的作用研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨蛋白磷酸酶2A（proteinphosphatase2A，PP2A）B56β全酶调控CdCl2诱导肝细胞毒性的作用及其机制。方法采用改良四甲基偶氮唑盐（M啊比色法检测CdCl2对人正常肝细胞（L-02）、黄曲霉素诱导转化细胞（L-02RT—AFB1）及肝肿瘤细胞（Bel7402）的毒性，利用病毒感染法在L．02或Bel7402上构建丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶B（AKT）低表达（L-02SHAKT）、B56p低表达（L．02SHB5613）和B56p高表达（L-02RT-AFB1-B5613、Bel7402．B56p）的细胞株。在浓度为0、20、40、80、160μmol/L的CdCl2处理下，检测人正常肝细胞、转化的肝细胞和肝肿瘤细胞的相对细胞活力。在2．5、5．0μmol/L的渥青霉素和40μmol／LCdCl3共同作用下检测L-02细胞中各蛋白相对表达量。采用Westemblot法检测这些细胞株中B56B、金属硫蛋白（metallothionein，MT）、AKT、AKT磷酸化（P．AKT）的表达水平。结果在40μmol／LCdCl：作用下，L．02RT。AFB，和Bel7402细胞中MT表达水平分别为0．12±0．02、0．06±0．06，低于对照组（0．92±0．14）（F=I148．16，P〈O．001）。在40μmol／LCdCl2作用下，AKT干扰细胞株L．02SHAKT-1、L-02SHAKT．2中p-AKT水平分别为0．08＋0．02、0．08±0．05，低于对照组（0．18±0．15）（F=724．70，P〈O．001）；两种细胞MT的表达水平均为0．62±0．16，高于对照组（0．22±0．14）（F=94．73，P〈O．001）。在2．5、5．0μmol／L渥青霉素和40μmol／LCdCl：共同作用下，L-02细胞中D．AKT的表达水平分别为0．28±0．07、0．15±0．11，低于未用渥青霉素处理组（0．52±0．11）（F=578．57，P〈0．001）；MT的表达水平分别为1．62±0．80、1．08±0．15，高于未用渥青霉素处理组（0．69±0．18）（F=12．34，P〈O．001）。在40μmol／LCdCl2作用下，B56p低表达细胞株L．02SHB5613．1、L-02SHB5613—2中β—AKT的表达水平分别为0．57±0．13、0．59±0．02，高于对照细胞L-02SHGFP（
- 张劲苗马璐王珊陈雯陈丽萍
- 关键词：金属硫蛋白细胞毒性
- 原代小鼠肝细胞培养方法的比较被引量：3
- 2016年
- 目的:比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方。方法:采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4 h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞。镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平。结果:成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95%以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87%和67.16%(P<0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P<0.05)。此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185%和24.2%(P<0.05)。结论:小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法。
- 王珊柏青王方萍李慧瑶陈燊何志妮王庆陈雯陈丽萍
- 关键词：小鼠表皮生长因子
- PP2A B56β全酶调控重金属诱导细胞毒性的作用研究
- 目的 探讨蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A,PP2A) B56β全酶调控重金属诱导细胞毒性的作用及其机制。方法 采用改良四甲基偶氮唑盐MTT法检测重金属对黄曲霉素B1诱导的转化细胞L02RT...
- 张劲苗马璐王珊陈雯陈丽萍
- 关键词：蛋白磷酸酶2A金属硫蛋白细胞毒性PI3K/AKT
- 蛋白磷酸酶2A调控环境化合物的毒作用效应研究
- 蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核生物中主要的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶,调控多条信号通路中关键蛋白的去磷酸化.本研究以去磷酸化作用在细胞毒性通路中的调控作用作为切入点,利用PP2A亚基缺失的体外细胞和动物模型来筛查影响环境化学...
- 陈丽萍樊俊灵郭萍王珊柳晓玲吴小嫩王方萍陈雯
- 关键词：环境化学物毒性效应蛋白磷酸酶2A
- 诱导性ppp2r1a基因敲除小鼠模型的表型和机制研究
- 2018年
- 目的 研究诱导性ppp2r1a基因全身敲除对成年小鼠的主要生理功能影响并探讨相关机制.方法 将ppp2r1aflox/flox小鼠和CAGG-CreER小鼠杂交繁殖,获得20只CAGG-CreER ppp2r1aflox/flox小鼠,设立为纯合子组,并同时选取同窝野生型小鼠20只,采用单纯随机法,将纯合子、野生型小鼠分别分为4组,共8组,每组5只,腹腔注射他莫昔芬0、2、4、6 d,建立ppp2r1a基因诱导性敲除小鼠模型.采用Western blot法检测主要脏器中PP2A Aα（由ppp2r1a基因编码）的敲除效率,并观察小鼠体重、脏器病理改变以及外周血细胞计数和血生化,采用Real-time PCR法检测肝脏糖脂代谢相关基因的表达改变.结果 他莫昔芬注射6 d后,小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑的PP2A Aα敲除效率分别约为35%、12%、15%、60%、69%和72%.他莫昔芬注射6 d后,纯合子小鼠体重[（17.42±1.76）g]低于野生型小鼠[（21.69±1.82）g]（P〈0.05）.纯合子小鼠活动减少,腹部和肾周脂肪少,存活不超过7 d.第6天后,纯合子小鼠脾脏的脏器系数[（0.36±0.05）%]低于野生型小鼠[（0.59±0.10）%]（P〈0.05）,组织病理HE染色显示脾脏萎缩明显,有核细胞明显减少.Tunel染色发现脾脏中淋巴细胞凋亡增多.纯合子小鼠血浆中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平[（153.68±62.80）U/L和（193.2±44.28）U/L]均高于野生型小鼠[（41.02±12.91）U/L和（69.40±9.55）U/L]（P值均〈0.05）,提示ppp2r1a敲除导致肝损伤.纯合子血糖水平[（4.20±1.99）mmol/L]低于野生型[（8.88±0.65）mmol/L]（P〈0.05）,而总胆固醇、HDL-C和β-羟基丁酸（β-HB）水平[（3.12±0.39）、（1.53±0.38）和（2.49±0.89）mmol/L]均高于野生型小鼠[（1.69± 0.92）、（0.78±0.50）和（0.45±0.30）mmol/L]（P值均〈0.05）,表明ppp2r1a敲除会扰乱葡萄糖和胆固醇代谢.此外,纯合子小鼠白细胞计数（WBC）和淋巴细胞计数[（1.88±0.89）×10^9/L和（0.92±0.37�
- 樊俊灵王方萍王珊柳晓玲吴小嫩陈雯陈丽萍李文学
- 关键词：小鼠表型蛋白磷酸酶2A糖脂代谢紊乱
