王珊
- 作品数:5 被引量:4H指数:1
- 供职机构:中山大学公共卫生学院预防医学系更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 蛋白磷酸酶2AB5613全酶调控氯化镉诱导肝细胞毒性的作用研究被引量:1
- 2015年
- 目的探讨蛋白磷酸酶2A(proteinphosphatase2A,PP2A)B56β全酶调控CdCl2诱导肝细胞毒性的作用及其机制。方法采用改良四甲基偶氮唑盐(M啊比色法检测CdCl2对人正常肝细胞(L-02)、黄曲霉素诱导转化细胞(L-02RT—AFB1)及肝肿瘤细胞(Bel7402)的毒性,利用病毒感染法在L.02或Bel7402上构建丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)低表达(L-02SHAKT)、B56p低表达(L.02SHB5613)和B56p高表达(L-02RT-AFB1-B5613、Bel7402.B56p)的细胞株。在浓度为0、20、40、80、160μmol/L的CdCl2处理下,检测人正常肝细胞、转化的肝细胞和肝肿瘤细胞的相对细胞活力。在2.5、5.0μmol/L的渥青霉素和40μmol/LCdCl3共同作用下检测L-02细胞中各蛋白相对表达量。采用Westemblot法检测这些细胞株中B56B、金属硫蛋白(metallothionein,MT)、AKT、AKT磷酸化(P.AKT)的表达水平。结果在40μmol/LCdCl:作用下,L.02RT。AFB,和Bel7402细胞中MT表达水平分别为0.12±0.02、0.06±0.06,低于对照组(0.92±0.14)(F=I148.16,P〈O.001)。在40μmol/LCdCl2作用下,AKT干扰细胞株L.02SHAKT-1、L-02SHAKT.2中p-AKT水平分别为0.08+0.02、0.08±0.05,低于对照组(0.18±0.15)(F=724.70,P〈O.001);两种细胞MT的表达水平均为0.62±0.16,高于对照组(0.22±0.14)(F=94.73,P〈O.001)。在2.5、5.0μmol/L渥青霉素和40μmol/LCdCl:共同作用下,L-02细胞中D.AKT的表达水平分别为0.28±0.07、0.15±0.11,低于未用渥青霉素处理组(0.52±0.11)(F=578.57,P〈0.001);MT的表达水平分别为1.62±0.80、1.08±0.15,高于未用渥青霉素处理组(0.69±0.18)(F=12.34,P〈O.001)。在40μmol/LCdCl2作用下,B56p低表达细胞株L.02SHB5613.1、L-02SHB5613—2中β—AKT的表达水平分别为0.57±0.13、0.59±0.02,高于对照细胞L-02SHGFP(
- 张劲苗马璐王珊陈雯陈丽萍
- 关键词:金属硫蛋白细胞毒性
- 原代小鼠肝细胞培养方法的比较被引量:3
- 2016年
- 目的:比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方。方法:采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4 h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞。镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平。结果:成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95%以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87%和67.16%(P<0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P<0.05)。此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185%和24.2%(P<0.05)。结论:小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法。
- 王珊柏青王方萍李慧瑶陈燊何志妮王庆陈雯陈丽萍
- 关键词:小鼠表皮生长因子
- PP2A B56β全酶调控重金属诱导细胞毒性的作用研究
- 目的 探讨蛋白磷酸酶2A (protein phosphatase 2A,PP2A) B56β全酶调控重金属诱导细胞毒性的作用及其机制。方法 采用改良四甲基偶氮唑盐MTT法检测重金属对黄曲霉素B1诱导的转化细胞L02RT...
- 张劲苗马璐王珊陈雯陈丽萍
- 关键词:蛋白磷酸酶2A金属硫蛋白细胞毒性PI3K/AKT
- 蛋白磷酸酶2A调控环境化合物的毒作用效应研究
- 蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核生物中主要的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶,调控多条信号通路中关键蛋白的去磷酸化.本研究以去磷酸化作用在细胞毒性通路中的调控作用作为切入点,利用PP2A亚基缺失的体外细胞和动物模型来筛查影响环境化学...
- 陈丽萍樊俊灵郭萍王珊柳晓玲吴小嫩王方萍陈雯
- 关键词:环境化学物毒性效应蛋白磷酸酶2A
- 诱导性ppp2r1a基因敲除小鼠模型的表型和机制研究
- 2018年
- 目的 研究诱导性ppp2r1a基因全身敲除对成年小鼠的主要生理功能影响并探讨相关机制.方法 将ppp2r1aflox/flox小鼠和CAGG-CreER小鼠杂交繁殖,获得20只CAGG-CreER ppp2r1aflox/flox小鼠,设立为纯合子组,并同时选取同窝野生型小鼠20只,采用单纯随机法,将纯合子、野生型小鼠分别分为4组,共8组,每组5只,腹腔注射他莫昔芬0、2、4、6 d,建立ppp2r1a基因诱导性敲除小鼠模型.采用Western blot法检测主要脏器中PP2A Aα(由ppp2r1a基因编码)的敲除效率,并观察小鼠体重、脏器病理改变以及外周血细胞计数和血生化,采用Real-time PCR法检测肝脏糖脂代谢相关基因的表达改变.结果 他莫昔芬注射6 d后,小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑的PP2A Aα敲除效率分别约为35%、12%、15%、60%、69%和72%.他莫昔芬注射6 d后,纯合子小鼠体重[(17.42±1.76)g]低于野生型小鼠[(21.69±1.82)g](P〈0.05).纯合子小鼠活动减少,腹部和肾周脂肪少,存活不超过7 d.第6天后,纯合子小鼠脾脏的脏器系数[(0.36±0.05)%]低于野生型小鼠[(0.59±0.10)%](P〈0.05),组织病理HE染色显示脾脏萎缩明显,有核细胞明显减少.Tunel染色发现脾脏中淋巴细胞凋亡增多.纯合子小鼠血浆中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平[(153.68±62.80)U/L和(193.2±44.28)U/L]均高于野生型小鼠[(41.02±12.91)U/L和(69.40±9.55)U/L](P值均〈0.05),提示ppp2r1a敲除导致肝损伤.纯合子血糖水平[(4.20±1.99)mmol/L]低于野生型[(8.88±0.65)mmol/L](P〈0.05),而总胆固醇、HDL-C和β-羟基丁酸(β-HB)水平[(3.12±0.39)、(1.53±0.38)和(2.49±0.89)mmol/L]均高于野生型小鼠[(1.69± 0.92)、(0.78±0.50)和(0.45±0.30)mmol/L](P值均〈0.05),表明ppp2r1a敲除会扰乱葡萄糖和胆固醇代谢.此外,纯合子小鼠白细胞计数(WBC)和淋巴细胞计数[(1.88±0.89)×10^9/L和(0.92±0.37�
- 樊俊灵王方萍王珊柳晓玲吴小嫩陈雯陈丽萍李文学
- 关键词:小鼠表型蛋白磷酸酶2A糖脂代谢紊乱