刘苹
- 作品数：91 被引量：158H指数：6
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞及印迹基因H19效应的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的:研究甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,ADC)对人绒毛膜上皮癌细胞株JEG-3细胞的生物学作用,观察JEG-3细胞H19表达变化与滋养细胞增殖、分化和侵袭等行为的相关性,从表观遗传学角度探讨滋养细胞侵袭行为的调控。方法:应用MTT法检测不同浓度5-杂氮脱氧胞苷在不同时相下对JEG-3细胞增殖的影响。体外小室迁移实验观察5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞迁移的影响。荧光定量RT-PCR检测5-杂氮脱氧胞苷作用下JEG-3细胞H19mRNA表达的变化。结果:5-杂氮脱氧胞苷对JEG-3细胞增殖起抑制作用,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。经100μmol/L5-杂氮脱氧胞苷作用24h后的JEG-3细胞迁移能力明显受限,迁移细胞数较对照组差异显著(P<0.01)。经5-杂氮脱氧胞苷作用后JEG-3细胞中H19mRNA表达增高,在一定范围内与时间和剂量呈正相关。结论:甲基化酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷可致H19mRNA过量表达,并进一步抑制滋养细胞的增殖和迁移能力。H19印迹基因表达上调与滋养细胞增殖抑制和迁移能力降低有关。
- 卢林杉李力俞丽丽易萍李平陈星云刘苹周元国
- 关键词：绒毛膜癌脱氧胞苷印迹基因H19细胞系
- c-Ski在TGF-β1调节成纤维细胞和纤维瘤细胞增殖差异中的作用研究
- 目的:探讨c-Ski在TGF-β1调节成纤维细胞和纤维瘤细胞增殖差异中的作用及机制。方法:应用不同剂量TGF-β1及联合转染c-Ski RNAi等途径,作用于原代小鼠成纤维细胞和纤维瘤细胞系,采用MTT法、BrdU掺入法...
- 刘苹李平熊仁平陈星云赵艳周元国
- 关键词：TGF-Β1成纤维细胞细胞增殖
- 文献传递
- 血清浓度对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 目的比较低血清浓度(0.4%)和正常血清浓度(10%)培养条件对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响。方法原代大鼠皮肤成纤维细胞分别采用0.4%和10%血清浓度培养,加TGF-β1刺激细胞后,分别用BrdU ELISA法检测细胞增殖情况,噻唑蓝(MTT)比色法制作细胞生长曲线。结果0.4%和10%血清浓度下,250pg/ml TGF-β1均促进成纤维细胞增殖(P<0.01),并促使生长曲线的峰值提前和增加。而25ng/ml TGF-β1均抑制成纤维细胞增殖(P<0.05),并导致生长曲线峰值的滞后和降低。结论血清浓度对大小剂量TGF-β1刺激成纤维细胞增殖变化无明显影响。
- 刘苹李平周元国雷英
- 关键词：血清TGF-Β1细胞增殖MTT法BRDUELISA法
- 基因治疗用pUC118-ski质粒DNA纯化工艺的建立及其质量控制被引量：4
- 2013年
- 目的建立基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,并进行质量鉴定。方法采用碱裂解法粗提质粒,PEG/MgCl2沉淀法初步纯化后,依次通过Sepharose 6 FF分子筛层析、PlasmidSelect Xtra亲和层析和SOURCE30Q离子交换层析纯化质粒DNA。纯化的质粒DNA经琼脂糖凝胶电泳分析超螺旋质粒的比例;紫外分光光度计测定质粒的A260和A280值,以A260/A280比值评价其纯度;CCK-8法检测质粒促原代培养的大鼠皮肤成纤维细胞的增殖活性;BCA法和鲎试剂凝胶法分别检测质粒DNA中残留的蛋白质和内毒素含量;PCR法检测质粒中细菌基因组DNA的含量。结果经Sepharose 6 FF分子筛层析可有效去除质粒DNA中的RNA,经PlasmidSelect Xtra亲和层析能将超螺旋质粒DNA(scDNA)与开环质粒DNA(ocDNA)有效分离,经SOURCE30Q离子交换层析获得的质粒DNA纯度很高,但出现了少量ocDNA。获得的质粒DNA纯品中超螺旋质粒所占比例大于90.5%;纯度(A260/A280)为1.83;促原代培养的大鼠成纤维细胞的增殖活性与空载体组相比提高了22.9%(P<0.05),与纯化前的质粒促细胞增殖活性一致;内毒素含量小于50 Eu/mg;几乎检测不到蛋白质残留;细菌基因组DNA残留量小于1.2μg/mg。结论建立了基因治疗用pUC118-ski质粒DNA的纯化工艺,纯化产品的质量指标均符合国家食品药品监督管理局(SFDA)的标准,为申请该基因药物的临床试验及大规模制备质粒DNA奠定了基础。
- 彭艳李平刘苹周元国
- 关键词：重组质粒基因治疗层析
- 大鼠早期骨关节炎软骨下骨结构与骨改建相关基因表达研究被引量：4
- 2016年
- 目的考察创伤性关节炎早期软骨下骨的微结构变化和基因表达变化,探索软骨下骨的骨重建特点及其在关节软骨退变中的作用。方法选择13只SD大鼠,利用内侧半月板撕裂(MMT)模型模拟创伤性骨关节炎,右侧膝关节行MMT手术,左侧行假手术,术后3周处死大鼠并取膝关节组织标本4%PFA固定。取10只SD大鼠的造模侧及对照侧胫骨关节,利用microCT扫描并重建分析软骨下骨的微结构变化。标本脱钙后石蜡包埋切片,番红O固绿染色,普通光学显微镜观察摄片。另取3只SD大鼠,提取软骨下骨的组织RNA,RT-PCR检测两组之间骨形成标志基因(ALP、RUNX2、OCN)与骨吸收相关基因(TRAP、CTSK、MMP9)mRNA水平的表达变化。结果 MMT术后3周,胫骨关节micro-CT扫描显示模型组软骨下骨的小梁骨结构紊乱,软骨下骨小梁骨的骨体积分数(BV/TV)、骨小梁连接密度(Conn.D)、骨小梁厚度(Tb.Th)降低(P<0.05),骨小梁间隔(Tb.Sp)增大(P<0.05)。组织病理结果显示,模型组关节软骨未发生明显结构变化、软骨下骨骨小梁结构稀疏。与对照组比较,模型组骨形成标记基因mRNA表达水平降低(P<0.05),骨吸收相关基因mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论大鼠膝关节内侧MMT诱导的创伤性骨关节模型早期,软骨下骨体积分数降低、骨小梁厚度变薄,成骨细胞的标志基因表达下降,破骨细胞的功能基因表达增加。
- 兰贵华张波刘苹翁土军邓蔓菁
- 关键词：骨关节炎软骨下骨MICRO-CT
- 小牛胸腺素的提取及其对哮喘豚鼠肺组织Gq蛋白的表达影响被引量：3
- 2001年
- 目的：从小牛胸腺中提取胸腺素并检测药物指标，观察其对哮喘豚鼠肺组织 Gqα表达的影响。方法：酸碱沉淀加离心法制备胸腺素，经多肽定量、活性鉴定、细菌培养、毒性试验和热原实验检测其药物指标。卵蛋白雾化吸入致敏法复制哮喘模型， Western blot(蛋白免疫印迹 )分析法测定 Gqα水平。结果：所制胸腺素符合中国药典标准。其治疗哮喘豚鼠后，肺组织 Gqα水平显著降低 (P<0.5）。结论：采用酸碱沉淀加离心法可制备胸腺素，其治疗哮喘的机理可能是通过改变肺组织Gqα水平来达到。
- 刘苹熊仁平周元国侯淦泉
- 关键词：胸腺素哮喘
- 利用pcDNA 3.0裸质粒探讨创伤愈合动物模型中转入基因的分布规律
- 2006年
- 目的 通过在Wistar大鼠皮肤伤口局部应用含半乳糖苷酶（LacZ）报告基因的裸peDNA3．0重组质粒，建立创伤愈合转基因治疗动物模型并评价其应用价值。方法 通过建立大鼠全层皮肤切割伤模型，采用自身对照，在治疗侧伤口周围局部注射重组转染裸pcDNA3．0-LacZ质粒，通过B-gal原位染色检测注射3、30、100μg剂量后1、3、6、15天及愈合时的伤口组织标本中报告基因LacZ的表达，确定目标基因表达效率。结果 报告基因LacZ主要表达于皮下成纤维细胞中，100μg剂量有较高表达，表达效率为10．3％，表达时间主要在注射后3-6天，15天时仍可检测到少量表达细胞，愈合时及对照侧各个时相点均未检测到表达。结论 重组的裸pcDNA3．0-LacZ质粒能成功转染伤口的成纤维细胞等修复细胞，表达效率及时间适用于动物创伤愈合的转基因治疗。
- 李平熊仁平刘苹刘霞张恩周元国
- 关键词：创伤愈合基因治疗裸质粒半乳糖苷酶
- N乙酰半胱氨酸对肠道缺血再灌注引起肝脏损伤的保护作用被引量：2
- 1998年
- N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）是体内游离巯基的组成部分，可补充体内谷胱甘肽，具有清除自由基，保护细胞的作用。本实验观察补给NAC在大鼠肠系膜上动脉夹闭造成缺血再灌损伤时，对肝脏的保护作用。大鼠肠系膜上动脉夹闭45分钟后松夫，于松夹前或后5分钟给予NAC（50mg／kg），测定松夹后2、4、6小时肠、肝组织总流基（TSH），游离巯基（NPSH），丙二醛（MDA）和髓过氧化酶（MPO）的改变。结果给予NAC可明显增加组织NPSH水平，降低MDA和MPO含量．但松夫后给予NAC者效果优于松夫前给予者。说明NAC对缺血再灌注引起的肝脏损伤具有保护作用。
- 刘苹肖南刁有芳田昆仑刘韧
- 关键词：肠缺血再灌注损伤肝损伤乙酰半胱氨酸
- 原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节被引量：3
- 2011年
- 背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法:Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P<0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高(P<0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。
- 刘苹李平彭艳杨楠周元国
- 关键词：转化生长因子Β1细胞增殖纤维肉瘤细胞自分泌
- 失血致低血容量性休克大鼠心脏G蛋白表达及纳络酮的影响被引量：4
- 2000年
- 目的 :探讨纳络酮对失血致低血容量性休克大鼠的治疗作用及其对休克大鼠心脏组织 G蛋白含量的影响。方法 :颈总动脉放血 ,使平均动脉压降至 6 k Pa(1k Pa=7.5 mm Hg)稳定 1小时完成失血致低血容量性休克大鼠模型。2 1只大鼠随机均分为 :休克组 (HS组 )、纳络酮治疗组 (NAL组 )和正常对照组 (NS组 )。在观察动脉血压、血气等指标的同时 ,采用 Western blot技术测定大鼠伤后 6小时心脏组织中 Gsα、Giα、Gqα、Goα的含量。结果 :纳络酮能提升休克大鼠的血压和改善心肺功能。休克后心脏膜组织 Gsα两条带较对照组显著降低(P<0 .0 5和 P<0 .0 1)。Giα和 Gqα带较 NS组则显著升高 (P<0 .0 1和 P<0 .0 5 ) ,Goα降低 (P<0 .0 5 )。纳络酮治疗后 ,Gsα两条带较 HS组显著升高 (P均 <0 .0 1) ,Giα和 Gqα带较 HS组显著降低 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1) ,Goα降低更明显 (P<0 .0 1)。结论 :纳络酮在改善休克的同时 ,也改变了 G蛋白的水平 ,提示休克大鼠的心脏收缩舒张功能及 NAL 的治疗作用可能有 G蛋白参与。
- 熊仁平周元国刘苹
- 关键词：低血容量性休克G蛋白纳络酮BLOT
