杨润霞
- 作品数：10 被引量：41H指数：4
- 供职机构：甘肃农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金甘肃省自然科学基金甘肃省科技支撑计划更多>>
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- 武威驴PrP基因序列与结构特征的分析
- 2015年
- 以武威驴朊蛋白(PrP)基因序列与结构特征分析为基础,通过比对找到奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因的差异,探究朊病毒病在奇蹄动物与偶蹄动物之间传播的种间屏障及其形成机制。分别从8头武威驴全血中提取基因组总DNA,用设计的特异性引物以聚合酶链反应扩增出细胞型朊蛋白基因(PrPC),并将其克隆到pGEM-T Easy载体。测序之后使用生物信息学方法与软件进行相关分析。序列测定分析表明,所克隆的武威驴PrP基因片段的大小为768bp,包含了驴PrP基因的完整编码区序列,为包含在单一外显子内的完整开放阅读框。本次克隆的武威驴PrP基因含5个短而富含G-C的元件,可编码九肽/八肽PQGGGGWGQ/PHGGGWGQ重复子。8个驴PrP基因之间核苷酸序列和推导的氨基酸序列的同源性分别介于99.2%~99.8%和98.4%~100%之间。武威驴与西吉驴、马之间PrP基因序列的同源性分别为99.2%和98.7%,与牛、绵羊、马之间PrP基因C端约100个残基区域的三级结构的相似性分别为91.84%、92.04%和97.35%。结果表明,奇蹄动物与偶蹄动物之间PrP基因存在明显的差异与进化分歧。
- 张天亮吴润杨润霞魏姣万学瑞刘霞刘磊张小丽
- 关键词：偶蹄动物
- 鸡PrP基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母GS115中的表达被引量：1
- 2015年
- 为构建鸡PrP基因的真核表达载体,并通过毕赤酵母表达系统获得鸡朊蛋白（ChPrP）,根据毕赤酵母GS115的密码子偏好性、G＋C含量等特点对目的基因PrP（25～248）进行密码子优化与基因合成,同时以特异性引物扩增获得天然未经密码子优化的目的片段,之后将两种目的片段分别连接于pPIC9K表达载体并转化至毕赤酵母GS115中,经PCR,选择培养基MM、MD方法鉴定表型后以甲醇进行诱导获得目的蛋白,最后以SDS-PAGE检测蛋白表达。结果显示,经PCR及双酶切鉴定,成功构建了真核表达重组载体pPIC9K-PrP（25～248）,并在毕赤酵母GS115中获得鸡朊蛋白,其与未经密码子优化的目的蛋白相比,具有更高的表达量。本研究通过毕赤酵母表达系统成功获得了鸡朊蛋白,为后续研究奠定了基础,也通过密码子优化前后蛋白表达量比对,再一次证实毕赤酵母具有较高的密码子偏好性。
- 张天亮吴润杨润霞魏姣万学瑞刘霞刘磊张小丽
- 关键词：PPIC9K毕赤酵母GS115真核表达
- PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响被引量：2
- 2015年
- 为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100、200nmol·L-1渥曼青霉素处理以抑制PI3K/Akt信号通路,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因转录量。结果显示,随着渥曼青霉素浓度的增加,DF-1-PrP、DF-1-NC和DF-1细胞的PRNP基因转录量均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在低于100nmol·L-1的同一渥曼青霉素浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于对照组,而总凋亡率均低于对照组。本研究表明ChPrPC的过量表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,在以上过程中,PI3K/Akt信号通路可能具有重要的作用,渥曼青霉素能有效阻断这一通路,但PI3K/Akt信号通路并不是ChPrPC调节细胞凋亡的唯一途径。
- 万学瑞朱曼玲杨润霞刘桂林刘磊吴润
- 关键词：PI3K/AKT渥曼青霉素凋亡
- 朊蛋白在癌症发生中的作用被引量：4
- 2015年
- 正常细胞型朊蛋白(PrPC)是一种高度保守、在所有哺乳动物体内广泛表达的细胞表面糖蛋白,人类PrPC在胚胎发育早期即已表达。研究表明,PrP在多种癌症中表达,包括胃癌、胰腺癌、大肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌(HCC)、口腔鳞状细胞癌(OSCC)等,影响这些癌症的发生与侵袭,并在多药耐性(MDR)获得中起重要作用。因此,朊蛋白有望成为治疗多种癌症的新靶标。论文就PrP的结构、功能及其在细胞功能和疾病发生发展中的作用,以及PrP在多种肿瘤发生发展、耐药性的作用等研究进行概述,并对PrP在癌症新型疗法未来发展中的潜在影响进行分析讨论,以期为PrP相关肿瘤病的防治方面做出贡献。
- 张天亮吴润杨润霞魏姣万学瑞刘霞刘磊张小丽
- 关键词：朊蛋白癌症过表达靶标
- 鸡朊样蛋白Doppel基因的克隆及其与PrP^C相互关系分析被引量：1
- 2015年
- 克隆鸡Doppel蛋白(ChDpl)基因(PRND)并初步分析其与正常细胞型朊蛋白(PrPC)的相互关系,为禽源Dpl结构与功能、Dpl与PrPC互作关系机制的研究提供理论依据与分子基础;以多物种Dpl氨基酸序列为基础,通过比对找到Dpl氨基酸序列保守区,设计简并引物并依据鸡的密码子偏好性对引物进行优化,以逐步降低其简并性。用此特异性引物以聚合酶链式反应(PCR)扩增鸡PRND基因,并将其克隆到pMD-18-T载体,鉴定后将序列上传GenBank数据库。结合Dpl与PrPC相关研究初步分析两者的相互关系;多物种Dpl氨基酸序列比对发现,第11—150位(139个氨基酸残基)为Dpl氨基酸序列保守区,以此区域设计引物并进行PCR扩增,得到约417bp的目的条带,GenBank登录号为KP140962。综合分析PrPC与Dpl相关研究发现,尽管Dpl与PrPC具有相似的翻译后修饰和空间结构,但两者多表现为拮抗作用,即PrPC能够拮抗Dpl的神经毒作用,尤其是其N-端包含八肽重复区的第23—88位残基对于保护Purkinje细胞免受Dpl诱导的神经退化作用至关重要。禽源Dpl的成功克隆不仅填补了目前研究的空白,更在分子水平为后续研究Dpl结构与功能及其与PrPC的拮抗机制奠定了基础。
- 张天亮吴润杨润霞魏姣万学瑞刘霞刘磊张小丽
- 关键词：PRPC拮抗
- 三种中药复方制剂对雏鸡免疫器官发育及免疫功能的影响被引量：10
- 2015年
- 为了探究中药复方对雏鸡免疫功能及免疫器官发育的影响.试验以黄芪、白术、防风、黄芩和五倍子等单味中药组成3种中药复方制剂,将120只1日龄健康雏鸡分为4组(Ⅰ组,"扶正止泄散",未加玉屏风散基础复方组;Ⅱ组,"扶正止泄散"复方组;Ⅲ组,"芪术扶正汤"复方组;Ⅳ组,对照,不加喂药),分别于42、52和62日龄对试验组和对照组鸡进行检测,测定T淋巴细胞、鸡γ-干扰素、抗体效价和免疫器官指数等免疫指标,同时制作组织切片、HE染色,观察其对雏鸡内脏器官发育的影响.结果表明:试验组T淋巴细胞ANAE阳性率、抗体效价和γ-IFN水平显著升高(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ组优于Ⅲ组;免疫器官指数和血细胞数量显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),Ⅱ组优于Ⅰ组;镜下观察组织切片,各器官结构良好无明显病变.3种中药复方对雏鸡免疫功能具有正向促进作用,增强机体细胞及体液免疫功能,其中Ⅱ组具有明显优势.
- 杨润霞吴润刘磊寇晓晶魏姣王玉龙
- 关键词：雏鸡中药复方制剂免疫功能器官发育组织切片
- 产纤维素酶真菌菌株的分离筛选及产酶条件优化被引量：18
- 2016年
- 【目的】由于真菌的纤维素酶系较全,且可分泌至胞外,易分离,所以试验致力于筛选高产纤维素酶真菌菌株.【方法】利用羧甲基纤维素钠培养法、刚果红染色法、纤维素酶活性测定法从样品中分离筛选出产纤维素酶菌株,同时结合菌落形态观察、显微镜观察和ITS序列同源性分析进行鉴定.【结果】通过初筛,筛选出15株Hc值较大的产纤维素酶真菌菌株,再经过液体发酵复测羧甲基纤维素酶活和滤纸酶活,筛选出一株产纤维素酶活最高的菌株B-2-3,经鉴定B-2-3为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）,其羧甲基纤维素酶活为2 341.76U/mL,滤纸酶活为398.18U/mL.经过产酶条件优化,确定其最适产酶条件为温度25℃、接种量4μL、蛋白胨0.5~0.6g/L、CMCNa 0.3~0.35g/L、pH 6.5.【结论】筛选出一株产纤维素酶活较高的烟曲霉菌株B-2-3.
- 魏姣万学瑞吴润畅通马亚茹刘磊张小丽张天亮杨润霞贾晓蕊
- 关键词：纤维素酶烟曲霉
- 蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2016年
- 为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处理以抑制CK2,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因mRNA转录。结果显示,DF-1-PrP、DF-1-SiRNA-3和DF-1细胞的PRNP基因mRNA转录量随着米托蒽醌浓度的增加均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在同一米托蒽醌浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于DF-1细胞,总凋亡率均低于DF-1细胞;DF-1-SiRNA-3细胞则相反。表明ChPrP^C的高表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,而ChPrP^C的低表达则相反;CK2在ChPrP^C介导DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中具有重要的作用。本研究结果为进一步阐明ChPrP^C生理功能的分子机制奠定基础。
- 万学瑞杨润霞王川刘桂林吴润
- 关键词：蛋白激酶2米托蒽醌
- 鸡朊样蛋白Shadoo的基因序列与结构特征分析
- 2015年
- 根据GenBank收录的鸡SPRN(ChSPRN)序列设计特异性引物,以鸡脑组织基因组DNA为模板,无菌采集10只青脚麻鸡脑组织,克隆鸡朊样蛋白Shadoo的基因(SPRN)并分析其序列与高级结构特征,并应用生物信息学方法与软件进行分析,探讨其与PrP(朊蛋白)之间的相互关系.结果表明:ChSPRN长354bp,在第23位与第56位发生G→A、C→T突变,分别对应氨基酸序列C→Y、P→S突变,与GenBank中收录的鸡SPRN序列相比,两者核苷酸序列同源性高达99.7%,推导氨基酸序列同源性为99.9%.分析氨基酸序列并利用同源法构建ChSho与ChPrP的三级结构,结果显示它们N-端同源性为44.25%,C-端结构相似性为23.33%;ChSho与ChPrP在核苷酸、RNA二级结构、氨基酸水平以及高级结构中表现出的惊人相似性,推测其与PrP具有相似功能.
- 张天亮吴润杨润霞魏姣万学瑞刘霞刘磊张小丽
- 产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定被引量：6
- 2017年
- 通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料。采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定。结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
- 吴自祥万学瑞马亚茹王艳吴润王川魏姣刘磊张小丽张天亮杨润霞贾晓蕊
- 关键词：纤维素酶RDNA枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌
